健康鸡源肺炎克雷伯菌检测到质粒介导喹诺酮耐药qnrA基因

通过PCR技术检测195株健康动物肠杆菌中qnrA基因的流行情况;琼脂稀释法对qnrA阳性菌株进行8种抗菌药物的药物敏感性试验;质粒接合转移试验研究qnrA的可转移性;Southern杂交对qnrA基因进行定位;PCR检测qnrA阳性菌中Ⅰ类整合酶intI基因的携带情况.结果表明,195株肠杆菌中检出1株qnrA阳性的肺炎克雷伯菌Klebsiella pneumoniae GDKA1,经Blast鉴定为qnrA1.药物敏感性试验表明GDKA1对磺胺甲恶唑、氨苄西林、大观霉素、氯霉素、四环素耐药,对环丙沙星(MIC=0.019 mg·L-1),头孢噻肟(MIC=0.047 mg·L-1)表现敏感,对萘啶酸(MIC=12 mg·L-1)表现为部分敏感.接合试验表明qnrA1位于可转移的质粒上,且可以通过接合试验水平传播.接合子TGDKA1对喹诺酮类药物的敏感性比大肠埃希菌Escherichia coli J53 AzR稍高,但远低于GDKA1·South-ern杂交进一步证实了qnrA1基因位于质粒上.TGDKA1的质粒扩增出intI1,表明qnrA1阳性菌株携带I类整合子.可见,qnrA1基因已在健康鸡源肺炎克雷伯菌中出现且同时携带I类整合子位于质粒上,整合子灵活多样的存在方式和传播方式为qnrA基因的传播提供了便利条件,整合子可能携带qnrA基因通过食物链传播给人,因此健康动物共生菌携带qnrA1基因值得注意.

大肠埃希菌qnrA基因的检测

[目的]了解大连地区耐环丙沙星的大肠埃希菌中qnrA基因的流行情况并研究其耐药机制。[方法]收集临床分离的耐环丙沙星的大肠埃希菌213株,通过PCR法扩增qnrA基因,对qnrA基因阳性株,KB纸片法检测抗菌药的体外抗菌活性,琼脂稀释法测MIC,并进行质粒结合试验。[结果]213株菌中查到2株qnrA阳性菌株,测序结果与Genbank中qnrA基因比对吻合率达100%。其中一株对多种抗菌药耐药,另一株则比较敏感。[结论]大连地区检测到了qnrA基因阳性的菌株,耐药机制复杂,应引起临床重视。

环丙沙星浓度对大肠埃希菌qnrA基因的影响

[目的]研究携带qnrA基因的大肠埃希菌在环丙沙星压力下gyrA基因的突变情况及防耐药变异浓度(MPC)。[方法]采用质粒结合实验构建出携带qnrA基因且gyrA基因未发生突变的结合子。在不同浓度环丙沙星药物平皿上观察gyrA基因突变情况及对防耐药变异浓度的影响。[结果]结合子(菌株4E、5E)的突变选择指数(MPC/M IC)分别为24.0和35.0,平均突变率分别为0.6852和0.5500;阴性对照大肠埃希菌ATCC25922的突变选择指数为6.25,平均突变率为0.2078,与结合子比较差异有显著性意义(P<0.05)。[结论]携带qnrA基因的菌株在环丙沙星压力下,更容易发生gyrA基因突变,导致产生对环丙沙星的高水平耐药和高MPC。

广东省中医院阴沟肠杆菌qnrA基因的检测及耐药机制的研究

目的了解广东省中医院临床分离的阴沟肠杆菌qnrA基因的分布及其耐药机制。方法应用VITEK32全自动细菌鉴定仪鉴定400株阴沟肠杆菌,采用纸片K-B法检测耐药情况,PCR法检测qnrA基因阳性菌,质粒接合试验验证qnrA基因可发生水平传播。结果 qnrA基因阳性的阴沟肠杆菌共检出65株,检出率为16.3%,阳性菌对两种喹诺酮药物均产生耐药且多数还伴产ESBLs,呈多重耐药性。结论广东省中医院分离的阴沟肠杆菌中存在qnrA耐药基因的流行,多数与ESBLs基因共同存在,且可发生水平传播。

宋内志贺菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药性研究

目的检测宋内志贺菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药情况,探讨染色体介导DNA旋转酶A亚单位(gyrA)和拓扑异构酶ⅣC亚单位(parC)基因突变或(和)质粒介导qnrA基因存在与宋内志贺菌耐喹诺酮类药物的相关性。方法用K-B纸片扩散法对58株宋内志贺菌进行耐药性检测;PCR法检测宋内志贺菌喹诺酮耐药决定区(QRDR)相关gyrA、parC基因,并根据药敏结果挑选5株菌扩增片段进行DNA测序;PCR法扩增qnrA基因片段。分析宋内志贺菌gyrA、parC基因突变或(和)qnrA基因存在与喹诺酮类药物耐药性的关系。结果宋内志贺菌对萘啶酸的耐药率高达94.8%。58株宋内志贺菌中,8株检出qnrA基因,5株测序gyrA、parC基因的菌株中,4株萘啶酸耐药菌株均在gyrA83位发生有义突变TCG(Ser)→TTG(Leu),但未发生parC基因突变,gyrA基因突变菌株对萘啶酸全耐药。qnrA基因阳性菌株对5种喹诺酮类药物抑菌圈中位数比较都缩小;对NAL、氧氟沙星的耐药率高于qnrA基因阴性菌株(P<0.05),差异有统计学意义。结论gyrASer83→Leu突变是导致宋内志贺菌临床分离株对喹诺酮类药物耐药的关键突变,宋内志贺菌若携带质粒介导qnrA基因则会导致对喹诺酮类药物的敏感性下降,若两者同存也可引起喹诺酮类药物耐药增强,除萘啶酸耐药外对其他喹诺酮类药物也可呈中介。

中国部分地区产超广谱-β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌qnrA基因的检测

目的明确我国部分地区产超广谱-β内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中qnrA基因的存在状况。方法PCR扩增产ESBL菌株,包括263株大肠埃希菌和99株肺炎克雷伯菌的qnrA基因;测序分析其基因序列。琼脂稀释法测定10种抗菌药物对qnrA基因阳性菌株的最低抑菌浓度(MIC)。接合实验和Southern杂交进行基因定位。脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析qnrA基因阳性株的同源性。结果263株大肠埃希菌中有5株检出qnrA基因,占1.9%;99株肺炎克雷伯菌中有8株检出qnrA基因,占8.1%。13株qnrA阳性株中qnrA基因均位于可接合性质粒上。13株菌株同时携带CTX-M基因(1株CTX-M-9、5株CTX-M-14和7株CTX-M-24)。qnrA基因阳性的接合菌与受体菌J53相比,环丙沙星对前者的MIC较后者提高了4～133倍。11株环丙沙星耐药株(MIC≥4 mg/L)均存在GyrA亚基的83位氨基酸和(或)87位氨基酸改变,其中8株对环丙沙星高水平耐药株(MIC≥16 mg/L)同时存在ParC亚基的80位氨基酸改变。2株MIC分别为4 mg/L和2 mg/L的菌株GyrA和ParC两亚基均未发生改变。结论肺炎克雷伯菌中qnrA基因的携带率高于大肠埃希菌。qnrA基因单独作用仅导致低水平喹诺酮类耐药,合并gyrA和(或)parC突变导致喹诺酮类高水平耐药。

肺炎克雷伯杆菌对氟喹诺酮耐药的机制研究

目的研究肺炎克雷伯杆菌对氟喹诺酮类药物(FQNs)的耐药机制。方法筛选临床分离的对环丙沙星耐药的肺炎克雷伯杆菌共10株,采用微量肉汤稀释法检测菌株对5种氟喹诺酮类药物的MIC值;采用PCR方法检测菌株染色体和质粒携带的喹诺酮耐药基因(gyrA基因、parC基因和qnr基因)并测序;质粒接合试验验证qnr基因的转移性。结果 10株肺炎克雷伯杆菌对5种氟喹诺酮类药物均产生耐药性。扩增产物经测序发现10株肺炎克雷伯杆菌染色体的gyrA基因和parC基因均有突变;有2株菌株(K79和K107)携带qnrA基因,这2株菌的接合菌对喹诺酮抗菌药的MIC值上升了5～30倍;未检测到qnrB阳性的菌株。结论 gyrA和parC基因突变是肺炎克雷菌对氟喹诺酮类产生耐药机制的主要原因,质粒上qnrA基因的存在,也是产生喹诺酮耐药的一个重要因素。