同步PCR技术及其在植物核酸分子定量中的应用(英文)

同步PCR是一种集生化、光电和计算机技术于一体的封闭式DNA扩增系统 ,采用荧光染料将扩增与检测过程结合在一起 ,实现了在PCR过程中在线显示PCR反应 ,通过检测荧光强度来绝对定量起始模板的拷贝数。该技术大大简化和加速了核酸分子的定量过程 ,不仅快速、灵敏、准确、重复性好 ,而且很容易计算出待测样品中核酸分子的绝对起始拷贝数。同微阵列等分子生物技术一起 ,同步PCR技术将会在功能基因解析和病害分子诊断等方面发挥重要作用。本综述除了介绍同步PCR技术的原理和应用外 ,还介绍了定量拟南芥Aux IAA基因的转录水平的实验 ,并就同步PCR操作过程中的问题进行了讨论。

液滴数字PCR芯片结果自动化读出平台的研究

液滴数字聚合酶链式反应(ddPCR)作为第三代PCR技术,可实现核酸分子绝对定量。然而,在数字PCR结果读出过程中,对1 000万量级的液滴进行统计费时费力而且容易出错。针对此情况设计了液滴数字PCR芯片的自动扫描识别平台,系统包括硬件移动平台和软件拍照、拼接和识别功能。软件控制平移台顺序移动并控制摄像头拍照,移动完成后把拍得的照片拼接成一张图片,之后对图片中的液滴进行识别。此平台通过二维平移台的精确定位扫描及图像分割、识别算法,对荧光和非荧光液滴识别率达到99.6%以上。平台已经应用到了实验室中,对数字PCR芯片上的微液滴可实现一键识别,极大的减小了识别时间和错误率。