重组双功能水蛭素的发酵、纯化和鉴定

构建了重组双功能水蛭素 (Recombinant RGD Hirudin、r RGD Hirudin )cDNA的表达质粒RGD Hirudin pPIC9K ,转化入毕赤酵母中 ,经筛选得到高表达的阳性克隆。种子菌经过 3d发酵培养 ,其培养液上清经超滤浓缩、凝胶过滤层析和离子交换层析后 ,得到纯度大于 97%、比活性为 12 0 0 0ATU mg的r RGD Hirudin ,回收率大于 6 0 % ,发酵产率为 1g L。纯化后的r RGD Hirudin经过还原SDS PAGE ,抗凝血酶活力分析、抗血小板聚集分析、质谱分析及等电聚焦分析等方法鉴定 ,证明该表达产物为水蛭素的衍生物 ,具有抗凝血酶和抗血小板聚集双重功能。

水蛭素对大鼠急性心肌梗死后室性心律失常的影响

【目的】探讨凝血酶的直接抑制剂重组双功能水蛭素对大鼠急性心肌梗死后室性心律失常的影响及相关机制。【方法】将70只雄性SD大鼠随机分为10组:水蛭素(HIR)结扎前(HIR0min)组,HIR结扎后5min(HIR5min)组,HIR结扎后10min(HIR10min)组,HIR结扎后20min(HIR20min)组,HIR结扎后30min(HIR30min)组),和生理盐水(NS)对应的各时间组,即NS0min,NS5min,NS10min,NS20min,NS30min,最终每组7只。观察各组室性心律失常的发生情况,Evans法计量各组心梗面积及采用逆转录聚合酶链反应对各组缺血心肌组织的IP3R家族的三种亚型进行测定。【结果】水蛭素组发生室性心律失常的持续时间及心律失常评分较生理盐水组在结扎后5～20min均减少(P<0.05);IP3R家族的三种亚型均与心梗后室性心律失常持续时间呈正相关性;但IP3R2mRNA在结扎后10min及IP3R3mRNA在结扎后10min和20min,HIR组较NS组下调(P<0.05)。【结论】水蛭素有抗心梗后室性心律失常的发生作用,其机制可能为通过IP3R2和IP3R3实现的,而并非IP3R1。