利用CRISPR/Cas9构建敲除小鼠模型研究PPP2R3A基因对心脏功能的影响

目的 应用CRISPR/Cas9技术构建蛋白磷酸2调节亚基B″家族α亚型(PPP2R3A)基因敲除小鼠,从分子水平及组织水平上研究PPP2R3A缺失对心脏的影响。方法 将Cas9 mRNA和两个靶向PPP2R3A第3外显子翻译起始密码子附近区域的单导向RNA微注射到C57BL/6小鼠受精卵中。小鼠出生后取其基因组DNA进行聚合酶链反应(PCR)和测序以鉴定基因型,鉴定后,基因PPP2R3A缺失型小鼠为KO组,野生型C57BL/6小鼠为WT组(雄性3只,雌性2只)。小鼠心脏组织经甲醛固定并制成切片后分别进行苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色。提取小鼠心脏组织总RNA和蛋白,应用荧光定量PCR和Western印迹验证基因敲除小鼠的有效性和检测互作蛋白表达。结果 获得F1代PPP2R3A杂合小鼠,PCR和测序结果表明突变小鼠的基因型存在113 bp的缺失突变。与WT组相比,KO组心脏组织中PPP2R3A mRNA和蛋白表达量明显下降(均P<0.05),参与心脏发育的G蛋白信号转导调控因子(RGS)19表达量明显升高(P<0.05)。PPP2R3A蛋白表达受损引起了心脏组织病理学变化。结论 PPP2R3A在体内可能通过与RGS19蛋白互作来参与心脏的发育并对心脏功能产生影响。

幼儿游戏理论研究的热点与趋势分析——基于CiteSpace6.1.R2的可视化分析

随着社会对功利主义和科学主义的盲目追求导致“游戏边缘化”,因此对游戏理论的相关研究进行梳理、分析,是重塑当代游戏精神的迫切需要。借助CiteSpace6.1.R2软件,对游戏理论的研究成果进行可视化分析后发现:游戏理论的研究整体呈现上升趋势,其中研究作者以张庭华、谢光辉为代表,尚未形成核心作者群、机构群;研究阶段经历了萌芽起步阶段、初步发展阶段、多元探索阶段;对研究内容进行三维分析后发现,已有的研究多以基础理论研究、内容研究、应用研究为切入点,未来游戏理论研究应注重提升游戏理论价值意蕴研究、扩宽游戏理论的研究视角、优化游戏理论的研究方法。

骨髓增殖性肿瘤患者血清IL-2R、IL-8、VEGF表达情况及检测意义

目的 分析骨髓增殖性肿瘤患者血清白介素-2R (IL-2R)、白介素-8 (IL-8)、血管内皮生长因子(VEGF)表达情况及检测意义。方法 选取2017年10月至2022年10月收治的骨髓增殖性肿瘤患者60例(患者组),另选取健康人60例(对照组),测量其血清IL-2R、 IL-8、 VEGF水平,对比患者组治疗前后及不同类型患者间血清IL-2R、 IL-8、 VEGF水平。结果 患者组血清IL-2R、 IL-8、 VEGF高于对照组(P <0.05);真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、原发性骨髓纤维化(PMF)患者的血清IL-2R、 IL-8水平依次递增(P <0.05)。结论 骨髓增殖性肿瘤患者血清IL-2R、 IL-8、 VEGF水平普遍高表达,治疗后明显下降,不同类型患者的血清IL-2R、 IL-8水平有显著差异,可用于诊断鉴别。

百香果(Passiflora edulis)R2R3-MYB基因家族的结构和功能分析

【目的】探究R2R3-MYB转录因子在代谢、发育等多种生物学过程中发挥的调控作用。对百香果R2R3-MYB基因家族进行表达分析并探究其在花果发育过程中的调控机制,对深入研究R2R3-MYB转录因子在百香果中的生物学作用中具有重要意义。【方法】基于百香果全基因组数据,通过HMM搜索对R2R3-MYB家族成员进行筛选鉴定,并利用实时荧光定量PCR分析其在百香果花不同组织中的表达模式。【结果】从百香果基因组中鉴定出99个R2R3-MYB基因,根据系统进化分析将其分为36个亚组。99个R2R3-PeMYB基因随机分布在9条百香果染色体上。基序和基因结构分析表明,R2R3-PeMYB在同一亚组中具有相对保守的结构特征。共线性分析表明,片段复制事件促进了百香果R2R3-MYB家族的扩张。基于转录组数据和qRT-PCR分析,发现R2R3-PeMYB基因在百香果花的不同组织的不同发育阶段中表现出差异的表达模式,说明R2R3-PeMYB基因在花不同组织和果实的发育过程中发挥重要作用,尤其是PeMYB62和PeMYB63在百香果果皮转色期的高表达,说明其可能参与百香果花青素的合成。同时8个R2R3-PeMYB基因在非生物胁迫(冷、热、盐和渗透压)下也表现出不同的反应,说明R2R3-PeMYB基因还受到非生物胁迫的诱导。【结论】鉴定了99个R2R3-PeMYB基因家族成员,发现其在百香果花果发育和胁迫诱导方面发挥重要作用,为今后研究百香果R2R3-MYB基因在花果发育中的功能和进化提供了有价值的线索。

IP3R2及RYR2介导Ca^(2+)信号在急性一氧化碳中毒迟发性脑病小鼠模型中的表达

背景:研究发现星形胶质细胞中Ca^(2+)的表达与认知功能密切相关,目前由1,4,5-三磷酸肌醇受体(Inositol 1,4,5-trisphosphate receptors,IP3Rs)2、兰尼碱受体(ryanodine receptors,RYRs)2受体及其调控的Ca^(2+)信号通路已经成为认知障碍相关疾病研究的热点。目的:研究急性一氧化碳中毒迟发性脑病动物模型中,海马组织内星形胶质细胞和IP3R2、RYR2介导的Ca^(2+)信号的表达情况,探索急性一氧化碳中毒迟发性脑病可能的发病机制。方法:Morris水迷宫实验筛选认知功能合格的C57BL小鼠随机分为对照组、实验组,实验组小鼠采用静态吸入一氧化碳建立急性一氧化碳中毒迟发性脑病模型,对照组小鼠吸入等量空气。造模后第21天,利用Morris水迷宫、苏木精-伊红染色、Western blot、免疫荧光双标法、Ca^(2+)荧光探针检测中毒小鼠行为学及神经元改变、星形胶质细胞特异性标记物胶质纤维酸性蛋白及IP3R2、RYR2受体、星形胶质细胞内Ca^(2+)浓度变化。结果与结论:①Morris水迷宫实验发现与对照组相比,实验组小鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.05);②苏木精-伊红染色表明实验组小鼠海马锥体细胞数减少、细胞结构紊乱、细胞核碎裂伴溶解;③免疫荧光检测表明海马区IP3R2、RYR2分别和胶质纤维酸性蛋白存在共表达,且实验组海马区IP3R2、RYR2和胶质纤维酸性蛋白表达均上调(P<0.05);④Western blot检测显示实验组海马区IP3R2、RYR2及胶质纤维酸性蛋白的蛋白表达均增多(P<0.05);⑤Ca^(2+)荧光探针法检测表明实验组小鼠海马区星形胶质细胞内Ca^(2+)浓度明显升高(P<0.05);⑥结果说明,星形胶质细胞可能通过介导IP3R2、RYR2受体影响Ca^(2+)信号,进而使一氧化碳中毒的小鼠认知功能受损,最终导致急性一氧化碳中毒迟发性脑病发生。

黄芩苷通过抑制IL1R2表达对A549肺癌细胞增殖、迁移及凋亡的作用及机制研究

目的探究黄芩苷通过抑制IL1R2在A549肺癌细胞增殖、迁移及凋亡中的作用,并探究可能作用机制。方法体外培养A549肺癌细胞,转染si-IL1R2质粒分为对照组、低表达IL1R2组、黄芩苷+低表达IL1R2组、过表达IL1R2组、黄芩苷+过表达IL1R2组,对照组正常培养细胞,含有黄芩苷的实验组采用200mol/L的黄芩苷处理24h。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定IL1R2表达;采用CCK-8法、Transwell、流式细胞法分别观察细胞增殖、迁移能力及凋亡情况;采用Western Blotting法观察各组白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)表达。结果IL1R2低表达组干扰后A549细胞的增殖受到抑制,IL1R2过表达组则明显促进细胞增殖;低表达IL1R2组较对照组细胞迁移个数降低,过表达IL1R2组细胞迁移个数较对照组升高,与低表达IL1R2组细胞迁移个数相比,黄芩苷+低表达IL1R2组细胞迁移个数降低明显;与过表达IL1R2组迁移个数相比,黄芩苷+过表达IL1R2组细胞迁移个数降低;与对照组相比,过表达IL1R2组、黄芩苷+过表达IL1R2组细胞凋亡率均降低;黄芩苷+过表达IL1R2组较过表达IL1R2组细胞凋亡率升高;低表达IL1R2组IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子表达明显下降,过表达IL1R2组各组细胞因子表达明显升高,黄芩苷+过表达IL1R2组各组细胞因子表达较过表达IL1R2组降低。结论黄芩苷通过抑制IL1R2表达抑制肺癌细胞的A549肺癌细胞增殖、迁移,促进肺癌细胞凋亡。

miR-19a靶向胰岛素样生长因子2受体抑制血管瘤干细胞的增殖和迁移

目的探讨婴儿血管瘤(IHs)中miR-19a是否与胰岛素样生长因子2受体(IGF-2R)相互作用,影响血管瘤干细胞(HemSCs)的增殖、迁移和脂肪生成。方法从IHs标本中分离、筛选和培养HemSCs,免疫组织化学鉴定IGF-2R在HemSCs中表达。用miR-19a模拟物和抑制剂对HemSCs进行转染,通过CCK-8、划痕实验、Transwell、qRT-PCR和免疫印迹相关实验验证miR-19a对于HemSCs增殖与迁移的影响。结果与对照组相比,用miR-19a抑制剂处理的HemSCs增殖与迁移速度显著增加,miR-19a过表达显著抑制IGF-2诱导的细胞迁移和增殖(P<0.05)。结论miR-19a可能通过靶向IGF-2R抑制HemSCs的增殖、迁移和脂肪生成。

血清PLA2R抗体阳性膜性肾病发生血栓患者的中医证型探讨

目的:膜性肾病(membranous nephropathy,MN)易发生血栓,本文探究M型磷脂酶A2受体(M-type phospholipase A2 receptor,PLA2R)抗体阳性MN发生血栓患者的中医证型分布,以期提高对临床表现的认识和及早防治。方法:2021年8月-2023年12月的136例血清PLA2R抗体阳性MN住院患者中,27例患者发生血栓,比较27例发生血栓和109例未发生血栓患者的中医证型分布。结果:136例血清PLA2R抗体阳性MN患者均表现为本虚标实证。本虚证的分布上,发生血栓的患者表现为脾肾阳(气)虚证的比例(66.7%)较未发生血栓的患者(45.0%)更高(P=0.043);标实证的分布上,发生血栓的患者表现为血瘀证的比例(70.4%)较未发生血栓的患者(30.3%)更高(P<0.001)。在整体证型分布中,发生血栓与未发生血栓者差异存在统计学意义(P=0.001)。发生血栓的患者表现为脾肾阳(气)虚兼血瘀证的比例(51.9%)较未发生血栓患者(19.3%)高(P<0.05),表现为气阴两虚兼水湿证的比例(14.8%)较未发生血栓患者(44.0%)低(P<0.05);脾肾阳(气)虚兼水湿证、气阴两虚兼血瘀证在两组患者中的分布无明显差异。结论:血清PLA2R抗体阳性的MN患者中,本虚证表现为脾肾阳(气)虚、标实证表现为血瘀证的患者更易发生血栓。

黄瓜R2R3-MYB亚家族鉴定及生物信息学分析

【目的】深入研究黄瓜Cucumis sativus R2R3-MYB亚家族成员的相关功能。【方法】利用生物信息学手段分析黄瓜全基因组,鉴定R2R3-MYB亚家族成员,对其系统进化关系、蛋白理化性质、染色体定位、基因结构、保守基序、顺式作用元件、蛋白质互作进行分析。【结果】黄瓜全基因组中含99个具有典型结构域的R2R3-MYB转录因子,蛋白序列含195~552个氨基酸,有保守基序及氨基酸位点;基因在染色体上分布不均匀;大部分亚家族成员蛋白质的不稳定指数大于40,属于不稳定蛋白。顺式作用调控元件分析发现:大部分基因启动子区所含元件与激素调节、MYB结合位点、胁迫密切相关。【结论】通过黄瓜全基因组鉴定,获得黄瓜基因组99个R2R3-MYB家族成员,分为30个亚组,映射于7条染色体上,该家族成员的上游启动子区含逆境相关作用元件。

中华鳖IGF2和IGF2R基因克隆及其功能研究

【目的】探索胰岛素样生长因子2基因(IGF2)和胰岛素样生长因子2受体基因(IGF2R)在中华鳖生长过程中发挥的作用,为揭示IGFs系统在中华鳖异速生长及两性生长差异中的作用机制打下基础。【方法】采用RACE克隆中华鳖IGF2和IGF2R基因c DNA序列,利用BioEdit、ExPASy、TMHMM Server v2.0、SignalP及SMART等在线软件进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR分析IGF2和IGF2R基因在雌雄中华鳖不同组织、不同表型及不同性类固醇激素处理下的表达变化。【结果】中华鳖IGF2基因cDNA序列全长1180 bp,共编码222个氨基酸残基;IGF2蛋白相对分子量为24.84 kD,理论等电点(pI)为9.00,属于跨膜蛋白,含有1个IIGF结构域。中华鳖IGF2R基因cDNA序列全长8765bp,共编码2443个氨基酸残基;IGF2R蛋白相对分子量为271.92kD,pI为5.64,属于跨膜蛋白,含有14个重复的CIMR结构域和1个FN2结构域。基于IGF2和IGF2R氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树均显示,中华鳖与龟鳖类的亲缘关系最近,与鱼类和两栖动物的亲缘关系相对较远。IGF2和IGF2R基因在中华鳖体内具有广泛的组织表达谱,IGF2基因在精巢中的相对表达量显著高于卵巢(P<0.05,下同),IGF2R基因则恰好相反。IGF2基因在成年中华鳖生长快个体肝脏中的相对表达量显著高于生长慢个体,IGF2R基因的表达模式则相反。在雌二醇(E2)处理下,除雌性中华鳖肝脏中的IGF2R基因相对表达量在注射6 h时显著升高外,IGF2和IGF2R基因在雌雄个体肝脏中的相对表达量整体上呈下降趋势;MT处理对雄性个体肝脏中IGF2基因的表达无显著影响(P>0.05),但在注射48 h后显著提高雌性个体肝脏中的IGF2基因相对表达量,且显著下调雌性中华鳖肝脏中的IGF2R基因相对表达量。【结论】IGF2和IGF2R基因参与调控中华鳖性腺的发育及成熟,且IGF2R可能通过内化降解IGF2而对中华鳖的生长起负调控作用。此外,IGF2和IGF2R基因会通过下调表达量来响应外源激素的刺激,进而实现对中华鳖生长的调控。

非共沸工质CO_(2)/R1234yf商超增压制冷系统性能分析

为满足商超制冷领域系统能效提升和制冷剂替代的需求,提出了非共沸工质CO_(2)/R1234yf商超增压制冷系统,通过建立热力学模型,与纯CO_(2)商超增压制冷系统进行对比。结果表明:CO_(2)/R1234yf商超增压制冷系统可在最优的CO_(2)质量分数(0.94)及最优排气压力(8.81 MPa)下获得最大COP(1.40);CO_(2)/R1234yf商超增压制冷系统COP与纯CO_(2)系统相比具有显著提升,环境温度为35℃时,提升7.25%;CO_(2)/R1234yf商超增压制冷系统APF提升率为2.68%~4.72%,系统APF随典型城市所处纬度的增加而增大。CO_(2)/R1234yf商超增压系统(火用)效率随CO_(2)质量分数的增加呈先增后减趋势,CO_(2)质量分数为0.95时获得最高(火用)效率,为0.18,相比纯CO_(2)系统提升4.62%。

R2C2联合思维导图在肿瘤指南教学中的实践

目的 探索R2 C2联合思维导图在肿瘤指南教学中的效果。方法 回顾性分析2020年12月—2023年12月内科在培住院医师75人,其中,2022级和2023级41人为观察组,2020级和2021级34人为对照组。在肿瘤指南的学习中观察组采取R2 C2联合思维导图的教学模式,对照组采取传统教学模式。比较两组住院医师的理论知识及满意度调查。结果 两组在性别、年龄和学历上差异无统计学意义(均P> 0.05)。观察组理论考核成绩高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。满意度调查结果,观察组教学方式、学习兴趣、知识掌握、临床思维和团队协作得分均高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 基于R2 C2的思维导图肿瘤指南学习易学易操作能够提高临床教学的满意度,激发住院医师的自主学习能力。

R2粗轧机主传动轴强度及疲劳计算研究

R2粗轧机是金属加工领域中广泛应用的关键设备之一。在其工作过程中,主传动轴承载着巨大的轴向和弯曲载荷,因此,其强度和疲劳寿命的计算对于保障设备的正常运行和生产效率的提高具有重要意义。文章基于R2粗轧机主传动轴的实际情况,进行了强度及疲劳计算的研究。通过对主传动轴材料性能的分析,建立了强度计算模型,并采用有限元方法分析了其在工作环境下的受力情况。同时,根据疲劳损伤理论,结合振动信号分析,对主传动轴进行了疲劳寿命预测。研究结果表明,主传动轴在设计要求下具备足够的强度,并且疲劳寿命满足工作要求。

基于FPGA的R2R DAC设计与仿真

随着通信技术和数字信号处理技术的快速发展,对数模转换器(DAC)提出了更高的要求,尤其在转换速度和转换精度方面,为此,设计了一种高精度的数字DAC系统。该系统包括DAC模块、电源电路和模拟滤波模块。其中,DAC电路设计是基于R2R电阻网络的架构,使用分立元器件设计的一种16位高性能数模转换器。输入端采用的是I2S通信接口,将输入的串行数据转为并行数据,再传输至电阻网络,经过DAC完成数模转换。通过设计的模拟滤波器对输出的模拟信号进行滤波处理,可使整个系统满足高精度和高分辨率的要求。最后,使用FPGA测试和验证该系统,发现数据转换结果达到了预期目标。

回热器对CO_(2)/R32热泵热水器性能的影响——基于窄点温差分析法

当今,生活热水所消耗的能源越来越多,热泵热水器由于具有显著的节能作用,被广泛应用于热水生产。自然工质CO_(2)较低的临界温度使其容易实现跨临界循环,将其应用于热泵热水器系统中更接近于Lorentz循环,可获得更优的热力学性能。但是,CO_(2)系统还存在着效率较低及运行压力较高的劣势,采用混合工质代替纯质CO_(2)是一种理想的解决方案。尝试用CO_(2)/R32混合制冷剂替代纯质CO_(2)应用于热泵热水器系统,建立相关热力学模型,基于窄点温差分析法,讨论不同组分配比条件下,有、无回热器的系统综合性能并进行详细对比。结果表明,CO_(2)/R32混合制冷剂的最优组分配比为0.84/0.16;回热器对系统热力学完善度提升的幅度很小,最大不超过1.8%,建议系统不采用回热器;CO_(2)/R32可将纯质CO_(2)系统和纯质R32系统的COP h分别提升6.2%和5.7%,还能将CO_(2)系统的运行高压降低13.6%。

腰椎脂肪分数联合R2^(*)值对骨质疏松症的诊断价值分析

目的探讨腰椎脂肪分数(FF)和R2^(*)值在骨质疏松症的诊断价值。方法回顾性分析2022年1月至2023年12月在我院收治的120例慢性腰痛患者的临床资料。全部患者完成腰椎磁共振成像(MRI)及双能X线(DXA)检查。分析FF、R2^(*)和骨密度(BMD)的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估FF和R2^(*)在骨质疏松症的诊断价值。结果按照T值的不同分为三组,包括骨质正常组30例、骨质降低组41例、骨质疏松症组49例。三组患者的年龄、体重指数、BMD、FF、R2^(*)无明显差异(P<0.05)。R2^(*)和BMD呈正相关(r=0.5339,P<0.05);FF和BMD呈负相关(r=-0.6470,P<0.05);FF对骨质疏松症的诊断效能AUC为0.893(95%CI:0.837~0.949),截断值为56.09%,敏感度、特异度分别为83.70%、83.10%,约登指数为0.668。R2^(*)对骨质疏松症的诊断效能AUC为0.843(95%CI:0.771~0.914),截断值为138.31Hz,敏感度、特异度分别为79.60%、81.70%,约登指数为0.613。二者联合诊断骨质疏松症的AUC为0.931(95%CI:0.889~0.973),敏感度、特异度分别为77.60%、93.00%,约登指数为0.705。二者联合诊断效能优于二者单独使用的诊断效能(P<0.05)。结论腰椎R2^(*)和FF均与骨密度密切相关,定量评估骨质疏松症,二者联合可显著提高诊断骨质疏松症的价值。

重症肺炎患儿血清sIL-2R、PGRN、Copeptin表达及与其预后的相关性分析

目的:探讨血清可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)、血清颗粒蛋白前体(PGRN)、肽素(Copeptin)在重症肺炎患儿中的表达水平,并分析其与重症肺炎预后的相关性。方法:选取某院2021年1月—2022年12月收治的肺炎患儿183例为研究对象,根据病情严重程度分为重症肺炎组(n=80)和普通肺炎组(n=103),另选取同期100例健康体检儿童为健康组。比较3组受试者入组时血清sIL-2R、PGRN、Copeptin水平,绘制ROC曲线分析各指标对重症肺炎的诊断价值,比较不同预后患儿入组时血清各指标水平及小儿危重病例评分(PCIS)、急性生理慢性健康(APACHEII)评分水平,并分析入组时血清指标预测预后的危险度。结果:重症肺炎组患儿入院时血清sIL-2R、PGRN、Copeptin水平分别为(648.47±100.27)U/mL、(36.17±10.47)μg/L、(62.77±14.21)pmol/L),高于普通肺炎组患儿入院时的(461.51±79.64)U/mL、(30.66±7.21)μg/L、(47.66±11.47)pmol/L和健康组的(214.79±39.47)U/mL、(26.31±4.14)μg/L、(11.27±6.94)pmol/L,差异均有统计学意义(P<0.05)。入组时血清sIL-2R、PGRN、Copeptin水平联合检测诊断重症肺炎的ROC曲线下面积(AUC)为0.789。预后不良组患儿血清sIL-2R、PGRN、Copeptin水平及APACHEII评分分别为(715.98±79.51)U/mL、(43.79±8.97)μg/L、(68.49±6.79)pmol/L、(22.81±3.79)分,高于预后良好组患儿的(627.44±45.69)U/mL、(33.82±8.46)μg/L、(60.99±7.21)pmol/L、(20.16±3.68)分,PCIS评分为(72.14±6.44)分,低于预后良好组患儿的(81.51±7.41)分,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清sIL-2R、PGRN、Copeptin水平与PCIS评分均呈负相关,与APACHEII评分均呈正相关(P<0.05)。入组时血清sIL-2R、PGRN、Copeptin高水平患儿发生预后不良的危险度是低水平的2.981、4.637、3.458倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:重症肺炎患儿血清sIL-2R、PGRN、Copeptin表达水平升高,与重症肺炎预后密切相关,可作为预测预后的辅助指标。

PPP2R5C对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和药物敏感性的影响

目的探讨蛋白磷酸酶2调节亚基B′γ(protein phosphatase 2 regulatory subunit B′gamma,PPP2R5C)对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞增殖、凋亡和药物敏感性的影响。方法利用qRT-PCR和Western blot检测PPP2R5C在人MM细胞系(MM1S、RPMI-8226细胞系)和正常外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中的表达水平。在MM1S细胞中分别转染PPP2R5C干扰siRNA(si-PPP2R5C组)及其阴性对照-siRNA(si-CTRL组)、PPP2R5C过表达质粒(OE-PPP2R5C组)及其阴性对照(OE-CTRL组),利用CCK-8法检测各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。用不同浓度硼替佐米(bortezomib,BTZ)处理si-PPP2R5C组和si-CTRL组细胞24 h后,采用CCK-8法检测细胞活力并计算半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。用1 nmol/L的BTZ干预si-PPP2R5C组和si-CTRL组细胞24 h后,采用qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中BCL-2和BAX的表达水平,Caspase 3/7活性检测试剂盒检测Caspase 3/7活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果相较于PBMC细胞,MM1S、RPMI-8226细胞在mRNA和蛋白水平上均高表达PPP2R5C(均P<0.001)。与si-CTRL组相比,si-PPP2R5C组在培养48 h、72 h后细胞增殖活力均受到抑制(均P<0.001),凋亡率明显增加(5.97%vs 14.39%,P<0.001)。与OE-CTRL组相比,OE-PPP2R5C组在培养48 h、72 h后细胞增殖活力均增强(均P<0.01)。si-PPP2R5C组BTZ的IC50值相比si-CTRL组显著下降(3.40 nmol/L vs 10.37 nmol/L,P<0.001)。si-PPP2R5C+BTZ组相比于Control组和si-CTRL+BTZ组,BCL-2的mRNA和蛋白水平均下降,而BAX的mRNA及蛋白水平、Caspase3/7活性和细胞凋亡率则增加(均P<0.05)。结论PPP2R5C在MM细胞系中显著高表达,敲低PPP2R5C表达后可抑制MM细胞增殖并促进凋亡,以及增强BTZ的药物敏感性。

PPP2R3A表达与乙型肝炎相关肝癌易感性及患者预后的关系

目的探讨PPP2R3A表达水平与乙型肝炎相关性肝癌易感性及患者预后的关系。方法选择2020年1月至2021年6月秦皇岛市第三医院收治的60例慢性乙型肝炎肝硬化患者(肝硬化组)和120例慢性乙型肝炎肝硬化癌变患者(肝癌组)作为研究对象。采用免疫组织化学染色法和ELISA法检测2组的病变肝组织和血清中PPP2R3A表达水平,分析肝癌组的血清PPP2R3A表达水平与患者临床病理特征的关系,以及肝癌组的病变肝组织中PPP2R3A表达与患者预后的关系。结果肝癌组病变肝组织中PPP2R3A高表达率显著高于肝硬化组(64.2%%比23.3%,P<0.05)。肝癌组的血清PPP2R3A表达水平显著高于肝硬化组[(14.05±4.68)ng/mL比(11.36±2.99)ng/mL,t=3.669,P<0.001]。肝癌组患者中,T2~T3期、血清DCP≥2000 ng/mL、AFP-L3%阳性和HBV-DNA表达阳性的患者的血清PPP2R3A表达水平分别较T1期、血清DCP<2000 ng/mL、AFP-L3%阴性和HBV-DNA表达阴性的患者显著升高(P均<0.05)。病变肝组织中PPP2R3A高表达组的1年总生存率显著低于低表达组(χ^(2)=4.546,P=0.033)。二分类Logistic回归分析结果显示,肝癌患者病变肝组织中PPP2R3A高表达、T2~T3期、AFP-L3%阳性及血清DCP水平升高均为患者预后的独立危险因素(P均<0.05)。结论PPP2R3A在肝癌患者血清和病变肝组织中均呈高表达,且与不良预后相关,是肝癌患者生存的独立危险因素,也是肝癌患者早期诊断和预后预测的潜在指标。

基于百脉根两代基因组的LjR2R3-MYB家族比较鉴定

【目的】探明LjR2R3-MYB转录因子家族的结构和功能,为二代测序与三代测序的差异研究、百脉根转录因子发掘鉴定及LjR2R3-MYBs的调控功能鉴定提供参考。【方法】对二代测序(SGS)与三代测序(TGS)2个版本百脉根全基因组数据的LjR2R3-MYB转录因子进行鉴定分析,研究其成员组成、进化特征、基因结构、蛋白性质、空间结构、染色体定位、顺式作用元件等。【结果】在SGS和TGS版本中,LjR2R3-MYB家族分别有96个和135个成员,TGS的基因序列比SGS多3条保守基序;家族成员均属于14个亚族,TGS获得的独有序列比SGS多39条;SGS中有86条基因含有UTR,TGS中有78条,二者的LjR2R3-MYB成员motif类型存在差异;所有LjR2R3-MYB基因编码蛋白均为亲水性蛋白,不含信号肽,定位于细胞核,二级结构组成基本一致;SGS的0号染色体上分布有25条R2R3-MYB基因,TGS含有6条染色体且无0号染色体;LjR2R3-MYB基因启动子含有逆境胁迫、防御、激素以及生长发育响应等顺式作用元件。【结论】同SGS相比较,从TGS数据中获得的基因信息量更完整丰富,百脉根TGS组装质量高于SGS。