rAAV-LyoVec载体介导血管抑素及野生型P53治疗C6胶质瘤

目的探讨重组腺病毒相关病毒(recombinant adenovirus-associated virus,rAAV)-阳离子脂质体(LyoVec)载体介导血管抑素(Angiastain)及野生型P53(wild typeP53)联合基因治疗C6胶质瘤。方法构建新型载体rAAV-LyoVec,建立裸鼠C6胶质瘤模型,观察各组不同时间肿瘤体积变化,免疫组织化学分析血管抑素、野生型P53及相关蛋白产物的表达情况,RT-PCR确认血管抑素基因在分子水平表达,电镜观察C6细胞凋亡、病毒转染、组织坏死等,从组织,细胞,蛋白,分子水平研究rAAV-LyoVec载体介导血管抑素及野生型P53联合治疗C6胶质瘤的有效性。结果rAAV-LyoVec载体介导血管抑素及野生型P53基因联合治疗C6胶质瘤,对比血管抑素及野生型P53单基因治疗效果显著(P<0.05),免疫组织化学检测各组细胞P53、VEGF及CD34蛋白均有不同程度的表达。RT-PCR法检测血管抑素在rAAV-angiastain-LyoVec组及rAAV-P53-LyoVec+rAAV-angiastain-LyoVec组表达。结论联合基因治疗是治疗脑胶质瘤的有效方法。

重组腺相关病毒-阳离子脂质体载体的构建及评价

目的探讨重组腺病毒相关病毒(rAAV)-阳离子脂质体(LyoVec)复合载体的构建方法及其转染率评价。方法构建rAAV-GFP,rAAV-LyoVec复合载体及rAAV-GFP-LyoVec。倒置荧光显微镜观察,测定rAAV-GFP,LyoVec-GFP及rAAV-GFP-LyoVec对定量C6细胞的转染率,筛选出高转染率载体。结果rAAV-GFP组24、48、72和96h转染率分别为16%、23%、21%和9%;LyoVec-GFP组为28.5%、33%、32%和11%;rAAV-GFP-LyoVec组为49%、59%、64%和20%。rAAV-GFP-LyoVec组分别在24、48、72和96h的转染率显著高于rAAV-GFP组(P<0.01)及LyoVec-GFP组(P<0.01)。结论新构建rAAV-LyoVec复合载体基因的转染效率远远高于rAAV或LyoVec独立转染。