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Genetic diversity and phylogenetic analysis of EG95 sequences of Echinococcus granulosus:Implications for EG95 vaccine application 被引量:4
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作者 Wei Pan De-Sheng Chen +6 位作者 Yun-Juan Lu Hui-Wen Xu Wen-Ting Hao Ya-Wen Zhang Su-Ping Qin Kui-Yang Zheng Ren-Xian Tang 《Asian Pacific Journal of Tropical Medicine》 SCIE CAS 2017年第5期497-500,共4页
Objective:To analyse the genetic variability of EG95 sequences and provide guidance for EG95 vaccine application against Echinococcus granulosus(E. granulosus). Methods:We analysed EG95 polymorphism by collecting tota... Objective:To analyse the genetic variability of EG95 sequences and provide guidance for EG95 vaccine application against Echinococcus granulosus(E. granulosus). Methods:We analysed EG95 polymorphism by collecting total 97 different E. granulosus isolates from 12 different host species that originated from 10 different countries. Multiple sequence alignments and the homology were performed by Lasergene 1(DNASTAR Inc.,Madison,WI),and the phylogenetic analysis was performed by using MEGA5.1(CEMI,Tempe,AZ,USA). In addition,linear and conformational epitopes were analysed,including secondary structure,NXT/S glycosylation,fibronectin type ecoⅢ(Fnndary Ⅲ) domain and glycosylphosphatidylinositol anchor signal(GPIanchor). The s structure was predicted by PSIPRED method. Results:Our results indicated that most isolates overall shared 72.6-100% identity in EG95 gene sequence with the published standard EG95 sequence,X90928. However,EG95 gene indeed has polymorphism in different isolates. Phylogenetic analysis showed that different isolates could be divided into three subgroups. Subgroup 1 contained 87 isolates while Subgroup 2 and Subgroup 3 consisted of 3 and 7 isolates,respectively. Four sequences cloned from oncosphere shared a high identity with the parental sequence of the current vaccine,X90928,and they belonged to Subgroup 1. However,in comparison to X90928,several amino acid mutations occurred in most isolates besides oncosphere,which potentially altered the immunodominant linear epitopes,glycosylation sites and secondary structures in EG95 genes. All these variations might change their previous antigenicity and thereby affecting the efficacy of current EG95 vaccine. Conclusions:This study reveals the genetic variability of EG95 sequences in different E. granulosus isolates,and proposed that more vaccination trials would be needed to test the effectiveness of current EG95 vaccine against distinct isolates in different countries. 展开更多
关键词 Echinococcus granulosus Cystic echinococcosis EG95 vaccine Genetic diversity
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全长细粒棘球蚴95抗原基因的克隆及DNA疫苗的构建 被引量:12
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作者 林仁勇 丁剑冰 +2 位作者 温浩 王笑峰 魏晓丽 《新疆医科大学学报》 CAS 2002年第4期359-361,共3页
目的 :克隆分析新疆地区细粒棘球蚴 95 (Eg95 )抗原全长基因的结构特点 ,并构建 Eg95 DNA疫苗。方法 :根据细粒棘球蚴 95抗原基因序列设计 PCR引物 ,应用 PCR方法从新疆株细粒棘球蚴 c DNA文库中克隆获得Eg95全长抗原目的基因。利用定... 目的 :克隆分析新疆地区细粒棘球蚴 95 (Eg95 )抗原全长基因的结构特点 ,并构建 Eg95 DNA疫苗。方法 :根据细粒棘球蚴 95抗原基因序列设计 PCR引物 ,应用 PCR方法从新疆株细粒棘球蚴 c DNA文库中克隆获得Eg95全长抗原目的基因。利用定向克隆技术将全长 Eg95抗原基因片段克隆至真核表达质粒 pc DNA3上 ,构建DNA疫苗 pc DNA3 - Eg95 ,测序确定基因碱基序列。利用 DNAm an软件及 Gene Bank/ Blast功能 ,对其进行基因全序列分析及同源性比较。 结果 :从新疆株细粒棘球蚴 c DNA文库中克隆出全长 Eg95抗原基因。所克隆的全长Eg95抗原基因长度为 471bp,编码 15 6个氨基酸。pc DNA3 - Eg95阳性克隆均为正确连接全长 Eg95抗原基因的重组质粒 ,可作为 DNA疫苗作进一步的研究。新疆株全长 Eg95抗原基因与 Gene Bank中已登录的新西兰株 Eg95抗原基因序列一致。 结论:成功克隆并构建了新疆株全长细粒棘球蚴 95抗原基因 展开更多
关键词 全长细粒棘球蚴95 抗原基因 DNA疫苗 基因克隆
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细粒棘球蚴重组St-Eg 95-Eg.ferritin疫苗构建及生物学特性检测 被引量:3
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作者 王志昇 林源 +4 位作者 刘强 吴璟 郎多勇 李红兵 杨文 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期44-48,共5页
构建表达细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白的重组口服减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株并评价其生物学特性。将细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合基因插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-Eg95-Eg.ferritin,将重组质粒分别电转... 构建表达细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白的重组口服减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株并评价其生物学特性。将细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合基因插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-Eg95-Eg.ferritin,将重组质粒分别电转入减毒鼠伤寒沙门菌X3770和X4550,获得重组疫苗菌株St-Eg95-Eg.ferritin,对重组菌的稳定性、生长状态及安全性进行分析。结果表明,经PCR和酶切鉴定成功构建重组质粒pYA3341-Eg95-Eg.ferritin,Western blot检测Eg95-Eg.ferritin蛋白在重组菌中获得表达;生物学特性研究结果表明,重组质粒可稳定存在,且不影响重组菌的生长状态,小鼠口服试验证实,重组菌安全无毒性。成功构建能稳定表达细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株,将为研究包虫病口服基因工程疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 Eg95-Eg.ferritin 减毒鼠伤寒沙门菌 口服疫苗
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PSD-95多肽疫苗对神经病理性痛大鼠脊髓脑源性神经营养因子的影响
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作者 刘东义 冯颢 +3 位作者 杨洪宝 刘真真 乔勇 金延武 《潍坊医学院学报》 2014年第2期132-134,共3页
目的:评价突触后致密物(PSD)95多肽疫苗对神经病理性痛大鼠的镇痛效应。方法成年雌性SD大鼠,制备保留性神经损伤(SNI)模型,7d后选取SNI模型制备成功的大鼠30只,随机分为5组( n=6):NP1组、NP2组、磷酸盐缓冲液(PBS)组、匙... 目的:评价突触后致密物(PSD)95多肽疫苗对神经病理性痛大鼠的镇痛效应。方法成年雌性SD大鼠,制备保留性神经损伤(SNI)模型,7d后选取SNI模型制备成功的大鼠30只,随机分为5组( n=6):NP1组、NP2组、磷酸盐缓冲液(PBS)组、匙孔虫戚血蓝蛋白(KLH)组及PSD-95组。 PSD-95组沿背部两侧皮下多点注射PSD-95多肽疫苗50μl(含PSD-95100μg)3次,每隔2周注射1次;PBS组和KLH组分别给予PBS 50μl和KLH 100μg,均用弗氏佐剂稀释至100μl。分别于制备SNI前1d、第1次免疫前1d及第3次免疫后14d(T0-2)时测定机械痛阈;于T1时处死NP2组大鼠,于T2时处死其余各组大鼠,取L3~5脊髓背角组织,采用Elisa法测定脊髓背角脑源性神经营养因子(BDNF)表达水平。结果与T0时比较,T1时各组机械痛阈均降低(P<0.05)。与T1时比较,PSD-95组T2时机械痛阈升高,BDNF表达下调(P<0.05);PBS组和KLH组T2时指标差异无统计学意义(P>0.05)。与NP1组比较,PSD-95组T2时机械痛阈升高,BDNF表达下调(P<0.05);PBS组和KLH组T2时指标差异无统计学意义( P>0.05)。结论 PSD-95多肽疫苗对神经病理性痛大鼠具有镇痛作用,其机制可能与下调脊髓BDNF表达有关。 展开更多
关键词 PSD-95 疫苗 神经病理性痛 脑源性神经营养因子
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突触后致密物质-95多肽疫苗对神经病理性痛大鼠脊髓脑源性神经营养因子mRNA表达的影响
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作者 金延武 冯颢 +3 位作者 王公明 刘真真 班艳林 王月兰 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期2182-2184,共3页
目的 观察突触后致密物质-95(PSD-95)多肽疫苗对大鼠神经病理性痛的影响.方法 成年雌性SD大鼠,制备保留性神经损伤(SNI)模型,7d后选取SNI模型成功的大鼠24只,随机分为4组(n=6):NP组、磷酸盐缓冲液(PBS)组、匙孔虫戚血蓝蛋白(... 目的 观察突触后致密物质-95(PSD-95)多肽疫苗对大鼠神经病理性痛的影响.方法 成年雌性SD大鼠,制备保留性神经损伤(SNI)模型,7d后选取SNI模型成功的大鼠24只,随机分为4组(n=6):NP组、磷酸盐缓冲液(PBS)组、匙孔虫戚血蓝蛋白(KLH)组及PSD-95组.PSD-95组沿背部两侧皮下多点注射PSD-95多肽疫苗3次,每隔2周注射1次;PBS、KLH组分别给予PBS和KLH.分别于制备SNI前1 d(基础值)、第1次免疫前1d及第3次免疫后7d和14 d(T0-3)时测定机械痛阈;于T3时处死大鼠,取脊髓腰膨大组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定脑源性神经营养因子(BDNF) mRNA表达.结果 与T0时比较,T1时各组机械痛阈均降低(13.2±1.1比1.9±0.5:12.9±0.9比1.9 ±0.7;13.5±1.0比1.8±0.5;13.1±1.1比1.7±0.6);T2、T3时NP、PBS和KLH组机械痛阈降低(2.4±0.6、2.5±0.6;3.2±0.9、3.4±0.8;3.3±0.8、3.5±1.1)(P<0.05).与T1时比较,PSD-95组T2、T3时机械痛阈升高(1.7±0.6比10.5 ±2.1、11.2±1.9),BDNF mRNA表达下调(1.48±0.21比0.92±0.13、0.88 ±0.12)(P<0.05);PBS组和KLH组其余时点各指标差异无统计学意义(P>0.05).与NP组比较,T2、T3时PSD-95组机械痛阈升高(2.4±0.6比10.5±2.1;2.5±0.6比11.2±1.9),BDNF mRNA表达下调(1.48±0.17比0.92 ±0.13;1.52±0.23比0.88±0.12)(P <0.05);PBS组和KLH组各指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 PSD-95多肽疫苗对神经病理性痛大鼠具有镇痛作用,其机制可能与下调脊髓BDNF mRNA的表达有关. 展开更多
关键词 疫苗 突触后致密物质-95 脑源性神经营养因子 神经病理性痛
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