人补体C3功能片段rC3B的克隆、表达和活性鉴定

本研究获取人类补体C3上与补体Ⅲ型受体(CR3)结合的功能区rC3B,并进行了表达、纯化和活性鉴定。用基因扩增法获得rC3B基因,并插入原核表达载体pQE30a,转化大肠杆菌E.coli M15进行表达;用SDS-PAGE电泳检验目的蛋白后以Ni2+螯合Sepharose Fast Flow层析进行纯化;用Western blot与单核细胞黏附试验初步确认蛋白活性。结果表明:钓取了人类补体C3的功能片段rC3B,构建了原核表达载体pQE30-rC3B并在E.coli中得了到高效表达;经Ni2+固相化的螯合Sepharose Fast Flow亲和层析纯化蛋白后,蛋白纯度达80%;Western blot检测证明rC3B具有抗原性,单核细胞的黏附试验初步确认了纯化后蛋白的活性。结论:确认了人类补体C3的这一活性区域,并获得了该蛋白的功能片段,为深入研究人类补体C3蛋白的功能和应用奠定了基础。