rHSG对COPD大鼠小气道阻力及成纤维细胞TGF-β1表达的影响

目的检测正常COPD大鼠小气道成纤维细胞中r HSG的表达,寻找其与小气道阻力、TGF-β1的相关性,探索r HSG调控气道重塑的机制。方法将大鼠随机分为对照组及模型组,分别检测肺功能和肺泡灌洗液中TGF-β1含量。用组织块贴壁法培养气道成纤维细胞,用RT-PCR和Western blot检测r HSG mRNA和蛋白的表达。分析r HSG基因量与小气道阻力以及TGF-β1的相关性。结果模型组大鼠先后出现咳嗽、气急、喘鸣和痰多等症状并伴有精神萎靡、纳少和毛发枯黄等,之后出现体质量减轻,肺体积略增大,肺顺应性明显下降,而气道阻力明显高于对照组(P<0.01);肺泡灌洗液中TGF-β1含量均明显高于对照组(P<0.01);r HSG基因在对照组中表达高于模型组(P<0.05);r HSG mRNA和蛋白与气道阻力(RI)、TGF-β1呈负相关,与肺顺应性(cydn)呈正相关。结论 r HSG可能通过调控TGF-β1水平干预气道重塑过程。

大鼠蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛和rHSG表达相关性的实验研究

目的探讨大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后迟发性脑血管痉挛(DCV)和大鼠增殖抑制基因(rHSG)表达之间的关系。方法SD大鼠156只,随机分为SAH组(A组)、生理盐水组(B组)和正常对照组(C组)。A组采用枕大池二次注血法诱发;B组同法注射等量生理盐水。A、B组分别在4、7、10、13、16、20d取基底动脉(BA)行HE染色后测量其内径周长、血管壁厚度,观察血管结构改变;免疫组化检测BA rHSG蛋白;RT-PCR法检测BA中rHSG mRNA。结果B、C组BA血管结构正常,无DCV发生;A组第4天出现DCV,第7天达到高峰,高峰期持续至第10天,后逐渐缓解,20d趋于正常。A组除20d外,各时相BA有不同程度的内膜增厚皱折、平滑肌层增厚等增殖性改变。与B组及C组相比,A组4～16d rHSG蛋白及rHSG mRNA表达均降低(P<0.05),第7天显著降低(P<0.05)。结论SAH后DCV的发生和严重程度与血管壁增生程度及rHSG低表达密切相关。

rHSG基因调控COPD大鼠气道成纤维细胞增殖凋亡

目的采用脂质体介导携带大鼠增殖抑制基因(rHSG)的真核表达载体,转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,为干预COPD的气道成纤维细胞增殖,打下基因治疗基础。方法构建真核表达载体pEGFP-N1,对重组质粒pEGFP-rHSG进行鉴定并测序;采用阳离子脂质体将重组质粒pEGFP-rHSG转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,分别感染24和48 h及3、5和7 d后,用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测rHSG mRNA的不同时段表达水平,MTT、流式细胞仪检测转染后成纤维细胞增殖及凋亡。结果证实重组质粒pEGFP-rHSG构建成功。转染24 h,rHSG mRNA表达量开始增加,7 d达到高峰,各转染组间rHSG mRNA表达差异显著(P<0.05);转染48 h后rHSG基因转染组成纤维细胞的增殖抑制明显低于未转染组成纤维细胞(P<0.05);转染后48 h凋亡开始,与模型对照组相比,随着时间延长,凋亡逐渐增加,7 d时凋亡率达最大(P<0.05)。结论外源性rHSG基因介导,能够使气道成纤维细胞的增殖受到抑制并诱导其凋亡。

rHSG基因对COPD大鼠气道成纤维细胞增殖凋亡的调控

目的:研究外源性大鼠增殖抑制基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道成纤维细胞增殖的影响。方法 :采用阳离子脂质体将重组质粒pEGFP-rHSG转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,分别感染24、48 h及3、5 d和7 d后,用实时荧光定量PCR(Real time-PCR)检测rHSGmRNA的不同时段表达水平,MTT、流式细胞仪检测转染后成纤维细胞增殖及凋亡。结果:转染24 h,rHSGmRNA表达量开始增加,高峰在7 d时,各转染组间rHSG mRNA表达差别满足(P<0.05);转染48 h后rHSG基因转染组成纤维细胞的增殖抑制明显低于未转染组(P<0.05);转染后48 h凋亡开始,与对照组相比,随着时间延长,凋亡逐渐增加,7 d时凋亡率达最大(P<0.05)。结论:外源性rHSG基因能够抑制气道成纤维细胞增殖诱导其凋亡。

腺病毒介导的rHSG对大鼠迟发性脑血管痉挛作用的实验研究

目的探讨重组腺病毒介导的大鼠增殖抑制基因(rHSG)对大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后基底动脉(BA)迟发型脑血管痉挛(DCV)的影响。方法 SD大鼠156只随机分为5组:SAH组(A组,36只)、SAH+Adv-rHSG-GFP组(B组,36只)、SAH+Adv-GFP组(C组,36只)、假手术组(D组,36只)和正常对照组(E组,12只)。采用枕大池二次注血法建立大鼠SAH模型,假手术组注射等量生理盐水。将重组腺病毒Adv-rHSG-GFP及空载腺病毒Adv-GFP分别转染B、C组大鼠BA。设立4d、7d、10d 3个观测点,HE染色后测量BA内径周长及血管壁厚度,观察血管结构改变;免疫组化染色后检测BA中rHSG蛋白表达;用RT-PCR法检测BA中rHSG mRNA表达。结果A﹑C组各时相BA有不同程度的内膜增厚皱折、平滑肌层增厚等增殖性改变。与A组及C组相比,B组7d、10d时BA血管痉挛明显缓解,且rHSG蛋白及mRNA表达明显增强(P<0.01)。结论 rHSG的过表达可以减轻SAH后血管壁的增殖和DCV,为外源性rHSG基因治疗DCV提供了实验依据。

rHSG基因转染对蛛网膜下腔自体血注入模型大鼠基底动脉形态学的影响

目的利用腺病毒载体介导外源性rHSG转染至蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠的基底动脉(BA),观察SAH后各时相BA形态学变化规律。方法 SD大鼠60只随机分为四组:SAH组(A组,18只)、SAH+Adv-GFP组(B组,18只)、SAH+Adv-rHSG-GFP组(C组,18只)和正常对照组(D组,6只)。建立大鼠蛛网膜下腔2次出血模型,将重组腺病毒Adv-rHSG-GFP及空载腺病毒Adv-GFP分别转染至BA。设立4、7、10d3个观测点,HE染色BA后测量其内径周长及血管壁厚度,观察血管结构改变。结果 A、B组各时相BA均有不同程度的痉挛、缩窄的表现;主要为血管内径明显变小,管壁增厚,弹力纤维皱缩,向血管腔内隆起。C组各时间点血管腔及管壁变化不明显,无痉挛发生。不同时间点纵向比较采用单因素方差分析,C组与A、B组相应时间点比较差异有统计学意义(P<0.05);A、B组各时间点横向比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 rHSG的过表达可以缓解SAH后血管壁痉挛的发生。

大鼠增殖抑制基因通过Ras-Raf-MEK-ERK信号通路抑制C6胶质瘤细胞增殖

目的探讨Ras-Raf-MEK-ERK通路在大鼠增殖抑制基因(r HSG)抑制C6大鼠胶质瘤细胞增殖中的作用。方法用r HSG过表达腺病毒载体(Adv-r HSG-GFP)转染C6细胞后,流式细胞仪分析腺病毒转染效率;Western blot检测r HSG蛋白表达变化;流式细胞仪分析细胞周期;qRT-PCR检测H-ras、N-ras、K-ras、Erk1、Erk2基因mRNA表达变化;Western blot检测H-ras、N-ras、K-ras、p-Erk1/2、Erk1/2、p-Rb、Rb蛋白表达变化。结果腺病毒载体能高效的转染C6细胞并表达GFP蛋白,Adv-r HSG-GFP组r HSG蛋白表达显著高于未转染组(PBS)和AdvGFP组,C6细胞被阻滞于G0/G1期(P<0.01);经IGF-1刺激后,Adv-r HSG-GFP组细胞H-ras、N-ras、K-ras、Erk1、Erk2基因的mRNA和蛋白表达水平与PBS组和Adv-GFP组无明显差异(P>0.05);Adv-r HSG-GFP组细胞过表达r HSG能显著抑制IGF-1诱导的Erk1/2的活化,p-Erk1/2蛋白表达量显著低于其余两组(P<0.01);同时其p-Rb蛋白的表达量显著低于其余两组(P<0.01),而Rb蛋白表达量3组无明显差异(P>0.05)。结论 r HSG可能通过抑制Ras-Raf-MEK-ERK信号通路的激活抗C6恶性胶质瘤细胞增殖。

大鼠增殖抑制基因通过P53-P21cip1途径抑制胶质瘤细胞增殖

目的:探究大鼠增殖抑制基因(r HSG)过表达抗C6大鼠胶质瘤细胞增殖的机制。方法:体外培养C6细胞,感染运载r HSG基因的腺病毒载体(Adv-r HSG-GFP),倒置显微镜及流式细胞仪分析腺病毒载体感染效率;应用流式细胞仪分析C6细胞周期;Western blot检测细胞r HSG蛋白、抑癌基因P53蛋白、细胞周期调控蛋白P21cip1、磷酸化及非磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白(p-Rb,Rb)表达变化。结果:腺病毒可以高效的将目的基因导入C6靶细胞;Adv-r HSG-GFP组r HSG蛋白的表达量明显高于PBS组和Adv-GFP组(P<0.01);r HSG过表达的C6细胞停滞于G0/G1期细胞的数量明显增加(P<0.01);P53、P21cip1蛋白表达量明显增加(P<0.01),p-Rb蛋白表达降低(P<0.01),Rb蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论:r HSG可能通过P53-P21cip1途径抑制胶质瘤细胞增殖。