重组抗原rMIC3-ELISA检测猪弓形虫抗体的研究

[目的]探讨检测猪弓形虫病的新方法。[方法]应用纯化的重组弓形虫微线体蛋白3(rMIC3)作为包被抗原建立间接ELISA方法,用于猪弓形虫抗体的检测。[结果]该法所用最佳抗原浓度为3.40μg/ml,最适宜的血清稀释倍数为1∶160,与猪瘟病毒等阳性血清不发生交叉反应,与LAT的符合率为92.56%。[结论]该方法快速、特异、重复性好,可用于猪弓形虫病的诊断和流行病学的调查。

血清法监测人工感染弓形虫病猪特异抗体的比较

应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较。结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4d)早于ELISA(第14d)和IHA(第20d);检出持续时间方面,LAT(54d)长于ELISA(44d)和IHA(19d);平均检出率方面,LAT(7/8)高于ELISA(6.7/8)和IHA(5/8)。试验结果表明,ELISA和LAT适合于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于猪弓形虫病的早期检测。

弓形虫MIC3亚单位疫苗的免疫效果观察

将重组的弓形虫微线体蛋白MIC3(rMIC3)25μg以皮下注射的方式,间隔2周3次免疫Balb/c小鼠,同时设相同剂量的谷胱甘肽转移酶(GST)和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组。以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试验小鼠血清特异性抗体,并在3免后腹腔接种弓形虫RH株速殖子1×103个/鼠,观察其免疫保护效果。结果表明,与GST和PBS对照组小鼠相比,rMIC3组试验小鼠在3免后的ELISA抗体水平极显著提高(P<0.01),免疫小鼠的生存时间明显延长(P<0.05)。上述结果为研制弓形虫基因工程亚单位疫苗奠定了基础。

ELISA和LAT检测猪血清弓形虫抗体的比较

应用弓形虫重组蛋白rMIC3为抗原建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LAT)2种方法,平行检测来自36个猪场的471份猪血清中的抗弓形虫特异性抗体。结果显示,ELISA和LAT对母猪弓形虫抗体的阳性检出率分别为42.86%(21/49)和44.90%(22/49),2种方法的阳性检出符合率为95.45%(21/22);对育肥猪的阳性检出率分别为42.06%(135/321)和43.61%(140/321),2种方法的阳性检出符合率为93.57%(131/140);对仔猪的阳性检出率分别为29.07%(30/101)和45.54%(46/101),2种方法的阳性检出符合率为63.04%(29/46)。结果表明,ELISA和LAT可用于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于仔猪弓形虫病的检测。

人弓形虫病重组蛋白MIC3诊断抗原纯化方法的比较

目的:探讨人弓形虫病重组蛋白MIC3诊断抗原的纯化。方法:采用SDS-PAGE和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测GST亲和层析法与复性透析法对rMIC3纯化的影响。结果:2种方法纯化的rMIC3的SDS-PAGE分析显示,目的蛋白带明显,杂蛋白带少;2种方法纯化的rMIC3的ELISA检测结果差异无显著性(P>0·05)。结论:大量纯化的弓形虫rMIC3为人弓形虫病诊断试剂的研制和推广应用奠定了基础。