rSj26-Sj32融合蛋白Dot-ELISA检测慢性日本血吸虫病患者血清IgG

目的探讨rSj26-Sj32融合蛋白对慢性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法分别用rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)作为包被抗原,采用Dot-ELISA检测慢性日本血吸虫病患者(40例)血清IgG,同时以华支睾吸虫病(21例)、卫氏并殖吸虫病(13例)、泡型棘球蚴病(10例)、囊型棘球蚴病(9例)、乙型肝炎(20例)和肺结核患者(20例)及健康人(43例)血清作为对照。结果 rSj26-Sj32融合蛋白检测慢性日本血吸虫病患者的敏感性和特异性分别为92.5%(37/40)和94.9%(129/136);SjAWA的为95.0%(38/40)和91.9%(125/136),两种抗原检测率间的差异无统计学意义(P>0.05)。两种方法与华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病和泡型棘球蚴病患者血清均有不同程度的交叉反应;但与囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者血清均无交叉反应。rSj26-Sj32融合蛋白诊断慢性日本血吸虫病的阳性预测值、阴性预测值及诊断效率分别为84.1%(37/44)、97.7%(129/132)和94.3%(166/176),SjAWA的为77.6%(38/49)、98.4%(125/127)和92.6%(163/176)。两种方法检测率间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 rSj26-Sj32融合蛋白可替代SjAWA,用于慢性日本血吸虫病的免疫诊断。

rSj26-Sj32-HRP-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值

目的探讨rSj 26-Sj 32-HRP-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法利用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)建立HRP-IgG-Dot-ELISA检测急性日本血吸虫病患者血清,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病患者和健康人血清作对照,观察二者的检测结果。结果 rSj 26-Sj 32和SjAWA检测急性日本血吸虫病患者阳性检出率均为100%,特异性分别为95.35%和93.02%;二者均与华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病和泡型棘球蚴病患者血清存在不同程度的交叉反应。结论纯化的rSj26-Sj32融合蛋白是一种较好的免疫诊断抗原。

日本血吸虫rSj26GST疫苗抑制小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成的效果观察

目的:日本血吸虫rSj26GST疫苗抑制小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成的效果观察。方法:将含有rSj26GST编码基因的菌株E.coliBL21/p ET28a涂布LB/Kana/IPTG/X-gal平板,培养、收集细菌、超声碎菌、分离、纯化,分别取5μL进行SDS-PAGE,观察纯化结果,采用BCA法测定重组蛋白的浓度。45只BALB/c小鼠随机分为2组:A组(感染对照组):于第0周每鼠经背部皮下多点注射50μL PBS及等体积福氏完全佐剂(CFA),第2、第4周每鼠皮下多点加强注射50μLPBS加等体积福氏不完全佐剂(IFA);B组(rSj26GST组),同A组,唯将PBS改为50μg(50μL)rSj26GST。上述两组分别于末次免疫2周后每鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(30±2)条。C组(正常对照组):未作任何处理。攻击感染45 d剖杀小鼠,测量肝脏单个虫卵肉芽肿的大小,采用ELISA测定血清透明质酸及层黏连蛋白含量。结果:rSj26GST疫苗组小鼠虫卵肉芽肿的直径为(191.6±26.3)μm,显著小于感染对照组的(267.7±28.6)μm(P<0.05)。透明质酸和层黏连蛋白水平,rSj26GST疫苗组明显低于感染对照组(P<0.05),两者均高于正常对照组。结论:rSj26GST疫苗具有一定的抗虫卵肉芽肿及降低免疫病理损伤作用。

rSj26GST-Sj32融合蛋白-IgG4-ELISA诊断慢性血吸虫病的研究

目的探讨rSj26GST-Sj32-IgG4-ELISA诊断慢性血吸虫病的价值。方法用rSj26GST-Sj32融合蛋白作为包被抗原,通过rSj26GST-Sj32-IgG4-ELISA检测慢性日本血吸虫病患者血清抗体,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核患者血清和健康人血清作为对照。结果该法检测慢性血吸虫病的敏感性和特异性分别为95.00%和100.00%,且与泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者血清均无交叉反应;诊断慢性血吸虫病的阳性预告值、阴性预告值及诊断效率分别为100.00%、95.56%和97.59%。结论 rSj26GST-Sj32-IgG4-ELISA可用于慢性血吸虫病的免疫诊断。

rSj26-Sj32融合蛋白用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值

目的探讨rSj26-Sj32融合蛋白用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法以纯化获得的rSj26-Sj32融合蛋白和SjAWA为包被抗原建立酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和Dipstick三种方法分别检测急性日本血吸虫病患者血清中IgG抗体,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者以及健康人血清作对照。结果 rSj26-Sj32三种方法检测急性日本血吸虫病患者血清的敏感性分别为90.00%、100.00%和96.00%;特异性分别为97.67%、95.35%和97.67%。结论 rSj26-Sj32融合蛋白作为诊断抗原用于急性日本血吸虫病患者血清的诊断具有较好的敏感性和特异性,对急性日本血吸虫病的诊断有较大的应用价值。

rSj26-Sj32-IgM-ELISA法用于急性日本血吸虫病的诊断价值

目的探讨rSj26-Sj32-IgM-ELISA法用于急性日本血吸虫病的诊断价值。方法用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)建立ELISA方法,检测急性日本血吸虫病患者血清中的特异性IgM抗体,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病患者和健康人血清作对照,比较二者的敏感性、特异性和交叉反应性。结果 rSj26-Sj32-IgM-ELISA和SjAWA-IgM-ELISA检测急性日本血吸虫病患者血清特异性IgM抗体的敏感性分别为98.0%和96.0%,特异性均为97.7%;SjAWA-IgM-ELISA检测华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清时存在不同程度的交叉反应,而rSj26-Sj32-IgM-ELISA则未见交叉反应。结论纯化的rSj26-Sj32融合蛋白对急性日本血吸虫病具有较高诊断价值,可用作急性日本血吸虫病的诊断抗原。

rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于慢性日本血吸虫病的诊断研究

目的探讨rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于慢性日本血吸虫病的诊断价值。方法分别以rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)作为包被抗原,通过Immunogold-IgG-Dot-ELISA检测慢性日本血吸虫病患者血清抗体,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病人血清及健康人血清作为对照。结果 rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA检测日本血吸虫抗体的敏感性和特异性分别为95.00%和97.67%,且与华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者血清均无交叉反应;诊断慢性日本血吸虫病的阳性预告值、阴性预告值分别为97.44%和95.45%,诊断效率为96.39%,与SjAWA-Immunogold-IgG诊断效率(96.39%)相同。结论 rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA法可用于慢性日本血吸虫病的诊断。

rSj26GST-Sj32融合蛋白-IgG-ELISA用于慢性日本血吸虫病诊断的研究

目的探讨rSj26GST-Sj32-IgG-ELISA用于慢性日本血吸虫病的诊断价值。方法将含有重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32的大肠埃希菌BL21(DE3)用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳,用Ni-NTA试剂盒纯化重组Sj26GST-Sj32(rSj26GST-Sj32)融合蛋白。常规方法制备日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)。用rSj26GST-Sj32融合蛋白和SjAWA作为包被抗原建立ELISA检测慢性日本血吸虫病患者的血清特异性IgG抗体,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核患者血清和健康人血清作为对照。结果 rSj26GST-Sj32融合蛋白检测慢性日本血吸虫病患者的敏感性和特异性分别为95.00%(38/40)和97.67%(42/43),而SjAWA分别为92.50%(37/40)和97.67%(42/43)。两种抗原的检出率差异无统计学意义(P均>0.05)。两种抗原与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清均有不同程度的交叉反应。rSj26GST-Sj32融合蛋白与泡型棘球蚴病患者血清无交叉反应,但SjAWA与该病2例患者血清有交叉反应,两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 rSj26GST-Sj32-IgG-ELISA可用于慢性日本血吸虫病的免疫诊断。

rSj26-Sj32-Immunogold-Dipstick试剂对慢性日本血吸虫病的诊断价值研究

目的研究rSj26-Sj32-Immunogold-Dipstick试剂对慢性日本血吸虫病的诊断价值。方法用rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)Immunogold-Dipstick法检测慢性日本血吸虫病患者血清,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊性棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核患者和健康人血清作为对照,比较两种抗原检测抗体效果的差异。结果该法检测慢性日本血吸虫病的敏感性和特异性分别为92.50%和97.67%,诊断该病的阳性预告值、阴性预告值及诊断效率分别为97.37%、93.33%和95.18%,并且与其他疾病患者血清均无交叉反应。结论 rSj26-Sj32-Immunogold-Dipstick试剂可用于慢性日本血吸虫病的免疫诊断。

rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病的诊断价值

目的探讨rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法利用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)建立Immunogold-IgG-Dot-ELISA方法检测急性日本血吸虫病患者血清,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病患者和健康人血清作对照,比较检测结果。结果 rSj26-Sj32和SjAWA检测急性日本血吸虫病患者的阳性检出率均为100%,特异性分别为97.67%和95.35%;SjAWA与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病血清均存在不同程度的交叉反应。结论纯化的rSj26-Sj32融合蛋白是一种较好的免疫诊断抗原。

rSj26-Sj32-IgG4-ELISA法用于慢性日本血吸虫病疗效考核价值的研究

目的 探讨rSj26-Sj32-IgG4-ELISA法用于慢性日本血吸虫病疗效考核价值的研究。方法 采用rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫粗抗原(SjAWA)作为包被抗原建立ELISA方法检测慢性日本血吸虫病患者体内治疗前后血清中特异性IgG4抗体水平的变化。结果 rSj26-Sj32融合蛋白组中,化疗前、化疗后3个月、化疗后6个月和化疗后12个月血清中IgG4抗体阳性率分别为95.00%、77.27%、60.00%和30.43%;而SjAWA组中血清特异性IgG4抗体阳性率分别为97.50%、81.82%、55.00%和34.78%。结论 rSj26-Sj32-IgG4-ELISA法可用于慢性日本血吸虫病的疗效考核。

日本血吸虫重组抗原rSj26的磁分离酶联免疫分析的建立及其在低感染度血清抗体检测中的应用

目的建立基于重组日本血吸虫抗原Sj26(rSj26)的磁分离酶联免疫分析(rSj26-MEIA),并将其用于检测低感染度的日本血吸虫病患者的血清抗体。方法将重组质粒pET28a-Sj26转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21,用0.6 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析法纯化后,二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白含量,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)检测分析rSj26。将纯化后的rSj26与磁珠偶联(100μg抗原/mg磁珠),优化反应条件,建立rSj26-MEIA方法。用rSj26-MEIA和ELISA分别检测58份低密度感染的日本血吸虫病患者血清、30份非血吸虫病流行区阴性血清和6份并殖吸虫病患者血清,并比较两者的检测结果。结果纯化后的重组蛋白含量测定结果显示,rSj26浓度为2.5 mg/ml。SDS-PAGE结果显示,rSj26相对分子质量约27 000,主要以可溶性的形式表达。Western blotting结果显示,rSj26可被感染日本血吸虫的兔血清和小鼠血清特异识别。rSj26-MEIA优化反应条件结果显示,采用rSj26-磁珠0.2 mg(含rSj26 10μg)、血清稀释度为1∶100时,阳性血清平均吸光度(A_550值)/阴性血清平均A_550值(P/N)最大,为3.97。rSj26-MEIA和rSj26-ELISA检测低密度感染日本血吸虫病患者血清的结果显示,两者的阳性检出率均为24.14%(14/58),两者P/N分别为3.61和2.56;相关分析结果表明,两者检测的抗体A_550值间存在正相关关系(r=0.658,P<0.01)。rSj26-MEIA和ELISA检测6例并殖吸虫病患者血清和30例非血吸虫病流行区阴性血清,均未出现阳性反应。结论rSj26-MEIA可作为检测低密度感染日本血吸虫血清抗体的一种新技术。

日本血吸虫中国大陆株62kDa重组抗原的表达、纯化及鉴定

目的 获得并鉴定日本血吸虫 6 2 k Da重组抗原。方法 将 Sj6 2 / p GEX- 1λT/ TG2 克隆菌用 IPTG诱导表达 ,经超声粉碎 ,离心后取上清过 GS4B柱 ,用还原型谷胱甘肽洗脱液洗脱后获得纯化的 r Sj6 2 / 2 6 GST重组融合蛋白 ,用 Throm bin酶切后获得纯化的 r Sj6 2重组蛋白 ,并对重组蛋白进行 SDS- PAGE和 Western blotting鉴定。结果 重组蛋白纯度较高 ,且可被血吸虫感染的鼠血清识别。

日本血吸虫(中国大陆株)线粒体相关的重组融合蛋白(rSj338/26GST)的免疫原性鉴定

目的 鉴定纯化的重组日本血吸虫线粒体相关融合蛋白 (r Sj3 3 8/2 6GST)的免疫原性。方法 对已构建的阳性表达菌 p GEX-6p-1/Sj3 3 8进行大量诱导表达 ,并对纯化蛋白进行活性分析。将粗提包涵体蛋白、复性包涵体蛋白、经分子筛纯化并复性的蛋白分别免疫新西兰家兔 2只。用 West-ern blot及 Dot-EL ISA方法检测特异性抗体的免疫原性及各组抗体水平。结果 用分子筛纯化的融合蛋白 r Sj3 3 8/2 6GST经 SDS-PAGE电泳鉴定显示达电泳纯 ;Western blot显示纯化蛋白能够被日本血吸虫重感染兔血清及 r Sj3 3 8/2 6GST免疫兔血清识别。Dot-ELISA法检测结果表明 ,经分子筛纯化并复性的 r Sj3 3 8/2 6GST融合蛋白免疫兔血清中特异性抗体的滴度最高 ,为 1∶ 5 12 0 0。结论 纯化后的融合蛋白 r Sj3 3 8/2 6GST具有较高的纯度及较强的免疫活性 ,可望作为日本血吸虫病疫苗候选分子 。