羊膜、结膜及Tenon's膜移植在兔结膜重建中的实验研究

目的比较羊膜移植(amniotic membrane transplantation,AMT)、自体结膜移植(autologous conjunctivaltransplantation,ACF)、自体Tenon’s膜移植(autologous Tenon’s fasia transplantation,ATFT)在结膜重建中的作用。方法新西兰大白兔24只随机分组:对照8眼不作任何处理,滴bFGF眼药水8眼;AMT组16眼,ACT组8眼,ATFT组8眼。于第2,3,4,6周时杀死兔各2只,HE及透射电镜观察。结果 AMT组3w时结膜上皮移行至羊膜表面,6w时再生上皮的超微结构接近正常,但杯状细胞较正常少。ACT组从一开始就保持了上皮的完整性且杯状细胞丰富。ATFT组上皮再生与AMT组接近但有轻度结膜下纤维化。结论 AMT可有效地修复结膜表面,抑制炎症和瘢痕化。ATFT可改善眼表的基质和血供。ACT是修复结膜缺损的最有效方法。

3D生物打印兔肺成纤维细胞水凝胶结构体片段

目的通过三维(3D)生物打印兔肺成纤维细胞-海藻酸钠-明胶共混物,探讨3D生物打印技术构建肺成纤维细胞水凝胶结构体片段的可行性。方法用轻度Ⅳ型胶原酶消化结合组织块培养法分离纯化新生兔肺成纤维细胞,并对分离纯化的肺成纤维细胞进行原代和传代培养;制备海藻酸钠-明胶水溶胶,与兔肺成纤维细胞共混;用圆柱状微丝逐层交错堆积技术,进行兔肺成纤维细胞-海藻酸钠-明胶共混物的3D生物打印,获得三维结构体。用钙黄绿素-AM和碘化丙啶溶液对该结构体进行活/死细胞双荧光染色,评价打印后及培养后兔肺成纤维细胞的活性,计算细胞存活率。结果通过按照设计的参数,打印出含有兔肺成纤维细胞的网格状水凝胶结构体。该结构体的大小约为9 mm×9 mm×1.2 mm,微丝间的孔隙相互通连,孔隙大小约600μm×600μm。打印后的兔肺成纤维细胞在三维结构体中仍可增殖,活/死细胞荧光染色结果表明结构体中兔肺成纤维细胞的存活率约为84%±3%,兔肺成纤维细胞在结构体中分布均匀。结论本实验实现了兔肺成纤维细胞共混物结构体的3D生物打印,为构建类肺组织工程结构体片段提供新思路。

五倍子对兔眼结膜成纤维细胞的抑制作用（Ⅱ）

为进一步探讨五倍子对活体眼结膜成纤维细胞增生的抑制作用及其对眼组织的毒性作用，对制成青光眼滤过术模型的兔眼及另一组健康兔眼，结膜下注射五倍子提取液，结果五倍子组术后结膜滤过泡的形成维持时间优于对照组（Ｐ＜０．０１）。五倍子组的手术区组织病理改变比对照组轻，药物毒性试验结果显示五倍子对角膜内皮细胞密度无影响，与对照组比较差异无显著性（Ｐ＞０．０５），五倍子不引起角膜上皮缺损，房水清晰无混浊，眼球各组织结构无改变。结果提示五倍子对手术伤口的成纤维细胞增生具有显著的抑制作用，可以提高青光眼滤过术的成功率，而且对眼球组织无毒性作用。

加味四妙散对兔膝骨关节炎IL-6和bFGF的影响

目的:观察加味四妙散对兔膝骨关节炎白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast grow th factor,b FGF)的影响,并分析b FGF、IL-6与Mankin’s评分是否有相关性。方法:选取健康清洁大白兔36只,随机选取12只为对照组,共12个关节,行假手术。其余24只应用改良Hultu法建兔膝骨关节炎模型,共24个关节;造模成功后,随机分为模型组、受试组各12只,受试组给予加味四妙散汤剂,空白组及模型组给予等量生理盐水喂服,10周后,取右后肢膝关节内胫骨平台的软骨作为标本。1观察标本软骨的大体形态,关节内关节积液情况,并给出大体评分;2通过光镜观察标本软骨并评分;3通过光镜观察HE染色后标本软骨的细胞数量、组织结构和潮线的完整情况,参照Mankin’s标准进行评分;4免疫组织化学法测定b FGF、IL-6在标本软骨内的表达情况,并将b FGF、IL-6的表达水平与Mankin’s评分进行Pearson相关性分析。结果:1受试组的大体评分和Mankin’s评分与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05);2造模组的大体评分和Mankin’s评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),其中以模型组最为显著;3各造模组全层软骨中IL-6表达较对照组显著升高,以模型组为最(P<0.05);受试组IL-6表达低于模型组(P<0.05);4模型组b FGF表达高于对照组(P<0.05),受试组b FGF表达高于模型组(P<0.05);5 IL-6表达与Mankin’s评分指数呈弱正相关,r=0.183(P<0.05);b FGF表达与Mankin’s评分指数呈弱负相关,r=-0.283(P<0.05)。结论:加味四妙散能调节软骨中IL-6和b FGF表达;软骨病理改变的Mankin’s评分与IL-6表达呈正相关,与b FGF表达呈负相关。

环孢素A壳聚糖纳米微粒抑制兔结膜成纤维细胞增生的作用

目的研究自制的环孢素A壳聚糖纳米微粒[CS(CsA)-NP]对兔结膜成纤维细胞(RCFs)增生的抑制作用。方法取第4～6代培养的兔结膜成纤维细胞,分别加入CS(CsA)-NP、环孢素A(CsA)原药、壳聚糖纳米微粒(CS-NP)及平衡盐溶液,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测对RCFs的抑制作用。结果 CS(CsA)-NP、CsA原药、CS-NP以质量浓度和时间依赖方式抑制RCFs的增生。对RCFs的抑制作用CS(CsA)-NP组显著强于CsA原药组及CS-NP组(均P<0.01)。结论 CS(CsA)-NP可缓慢释放药物,能有效抑制RCFs的增生,随时间延长,作用显著强于CsA原药,可作为缓释药物载体。