Radical-scavenging activity,ACE-inhibiting capability and identification of rapeseed albumin hydrolysate

Albumin derived from rapeseed was hydrolyzed sequentially using alcalase and flavorzyme to produce antioxidant peptides.To identify antioxidant peptides,rapeseed albumin hydrolysate(RAH)was fractionated using size exclusion chromatography(G-25).The antioxidant activity and angiotensin I-converting enzyme(ACE)inhibiting activity of rapeseed peptides(RSP)purified from RAH were evaluated.The results revealed that RSP-4 had the highest ABTS radical-scavenging activity(TEAC value=0.24)and ACE-inhibiting capacity(IC50=0.19 mg/mL)compared to other fractions.Moreover,RSP-4 was identified as PFDSYFVC(977 D)by electrospray ionization(ESI)mass spectrometry and tandem mass spectrometry(MS/MS).©2013 Beijing Academy of Food Sciences.Production and hosting by Elsevier B.V.All rights reserved.

超声辅助酶法制备菜籽肽及其组成、物理特性及结构分析

为提高低温压榨菜籽饼的附加值和应用价值,采用石油醚对低温压榨菜籽饼进行脱脂,然后利用超声预处理分别辅助木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶直接酶解制备菜籽肽,通过单因素试验探究超声功率、超声时间及酶添加量对菜籽肽得率的影响,通过响应面法优化超声辅助酶解工艺条件,并对所得菜籽肽的组成、物理特性以及结构进行分析。结果表明:碱性蛋白酶酶解的菜籽肽得率高于木瓜蛋白酶的;最佳超声辅助碱性蛋白酶酶解工艺条件为酶添加量12 289.79 U/g、超声时间21.82 min、超声功率306.56 W,该条件下菜籽肽得率为55.19%;最佳条件下所得菜籽肽的分子质量范围为88.02~1 290.00 Da,其中98.40%的菜籽肽分子质量小于500 Da,相较于未超声辅助酶解,所制备的菜籽肽氨基酸含量增加,粒径变小,Zeta电位绝对值变大,二级结构中α-螺旋和β-折叠含量增加,β-转角含量减少,二级结构更有序、稳定。综上,超声辅助酶法不使用有机溶剂,环境友好,且产品品质较好,可以用于高效提取菜籽肽。

超微粉碎辅助制备菜籽饼活性肽工艺优化及其抗氧化活性分析

本文引入超微粉碎前处理技术,以菜籽饼超微粉为原料直接酶解制备活性肽,利用单因素实验和响应面试验优化其制备工艺,酶解液经膜分离和Sephadex G-15凝胶分离后获得活性肽,并对其抗氧化活性和结构进行分析研究。结果表明,菜籽饼活性肽的最佳制备条件为:超微粉碎处理30 min、料液比1:20、加酶量6300 U/g、酶解pH2.94、酶解温度55℃、酶解时间2.25 h,此条件下活性肽得率为83.28%;菜籽饼酶解液中分子量低于1000 Da的F-2组分具有较好的抗氧化活性,1 mg/mL下对ABTS+自由基的清除率为71.62%,从中鉴定出PF、SF、TF、IAIPF和PLDLL五条预测活性最高的肽段。本研究结果可为以菜籽饼为原料直接开发活性肽提供一定的理论依据。

菜籽肽清除自由基作用的研究

双酶分步水解的菜籽清蛋白粗品肽(RSP-R)经SephadexG-25凝胶层析柱分离纯化,得到分子量依次降低的三个级分(RSP-1,RSP-2和RSP-3)。离体实验结果表明,菜籽肽具有较强的还原能力及抑制·OH的作用;RSP-R和RSP-1对活性氧的产生有抑制作用,抑制效果的最佳浓度为0.5mg/mL。

菜籽肽抗氧化活性的研究

用分光光度法测定大鼠红细胞溶血程度,用丙二醛(MDA)试剂盒测定MDA。结果显示,通过腹膜注射菜籽肽,可以使小鼠血清中MDA含量显著减少。高剂量组[100 mg/(kg.d)]与对照组相比,MDA的降低达到极显著水平(P<0.01)。离体实验结果显示,菜籽肽粗品及各级分对体外温育和H2O2诱导的小鼠肝组织匀浆MDA生成有较强的抑制作用,其中粗品RSP-R和级分RSP-1的作用最好,且有量效关系,而对Fe2+诱导的MDA生成的抑制作用稍差。另外,RSP-R还可抑制大鼠红细胞氧化溶血程度。以上结果表明,菜籽肽在体内外均具有明显的抗氧化作用。

菜籽多糖的抗氧化作用与机理研究

研究菜籽多糖粗品的抗氧化作用与机理。用K3[Fe(CN)6]与TCA体系、脂肪氧合酶评价菜籽多糖的还原能力及抑制脂肪氧合酶的能力,用丙二醛(MDA)及活性氧(ROS)试剂盒测定MDA及ROS含量,用分光光度法测定小鼠肝线粒体肿胀度。结果显示,在化学模拟体系中,菜籽多糖具有还原能力,2.00mg·ml-1菜籽多糖的抗活性氧单位为94.03,对脂肪氧合酶的抑制率达22.8%。在体外,2.00mg·ml-1菜籽多糖使自由基诱导的小鼠肝线粒体肿胀度低于非诱导组,对自由基诱导的小鼠肝线粒体MDA生成抑制率达30.3%,对肝组织匀浆MDA生成抑制率分别为54.7%(非诱导组)、32.0%(Fe2+诱导组)及84.5%(H2O2诱导组)。10.00mg·ml-1菜籽多糖使小鼠血清抗活性氧单位达1340.13。在体内,腹膜注射菜籽多糖组小鼠(400mg·kg-1bw·d-1,12d)与对照组相比,肝匀浆MDA的降低达到极显著水平(P<0.01)。以上结果表明,菜籽多糖在体内外均具有明显的抗氧化作用,菜籽多糖具有还原能力及抑制与氧化有关的酶的活性可能是其抗氧化的机理。

菜籽肽的制备及其对大鼠血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)活性的影响(英文)

目的:分离菜籽清蛋白水解物并研究混合肽及级分对大鼠血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)活性的影响。方法:采用葡聚糖凝胶过滤色谱(SephadexG-25)分离菜籽肽;离体培养检测血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)活性。结果:菜籽肽(RSP-R)及分离的三个级分(RSP-Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ)对高血压大鼠ACE活性均有明显抑制作用,其中级分Ⅲ抑制能力最强。结论:菜籽清蛋白水解多肽具有抑制ACE活性能力,这一结果有助于菜籽清蛋白的广泛应用。

菜籽多糖对S_(180)小鼠肉瘤及其免疫能力的影响

研究菜籽多糖的抑瘤作用及其机理。通过接种S_(180)细胞复制荷S_(180)瘤小鼠模型,分别腹膜注射生理盐水、环磷酰胺、菜籽多糖,测定各组小鼠肿瘤重量与脏器指数、免疫能力、抗氧化能力、乳酸脱氢酶活力等指标。结果表明:50～200mg/kg·d的RSPS抑瘤率在20．66%～34．710%之间;RSPS能显著提高荷瘤小鼠脾脏指数、腹腔巨噬细胞吞噬率与吞噬指数、迟发性超敏反应、小鼠血清溶血素含量与脾细胞抗体形成等指标,显著抑制荷S_(?)小鼠血清LDH的活性,提高红细胞CAT活性,降低血清中MDA含量。以上结果表明RSPS在小鼠体内具有抑制S_(180)肉瘤的作用,能增进荷瘤小鼠免疫力、清除自由基与抑制LDH活性可能是其抑制肿瘤的机理。

混菌固态发酵菜籽粕制备菜籽肽的菌种筛选

通过平板培养和混菌发酵相结合的方法筛选固态发酵菜籽粕制备菜籽肽的最佳菌种,以硫苷降解率为指标评价其硫苷降解效果。结果表明:枯草芽孢杆菌与雅致放射毛霉混菌发酵效果最好,发酵后所产生的低分子量菜籽肽含量高于其他混菌,适合混菌发酵生产菜籽蛋白肽;枯草芽孢杆菌与宇佐美曲霉混菌发酵的硫苷降解效果较好,可进行后续脱毒实验的研究。

菜籽抗氧化肽WDHHAPQLR的环境稳定性研究

本实验以DPPH·自由基清除活性、Fe 2+-螯合金属离子能力为指标来考察温度、酸碱度、食品配料成分、金属离子、防腐剂和人工胃肠液等环境因素对菜籽抗氧化肽(WDHHAPQLR)稳定性的影响。结果表明:随着温度的升高,抗氧化肽的活性逐渐降低,但还是保持在较高水平,但是当温度高于60 ℃时,菜籽抗氧化肽的活性显著降低,温度为100 ℃时,Fe 2+-螯合金属离子能力活性保持率仅在30%左右。强酸和强碱环境对抗氧化肽的稳定性影响较大,当溶液的pH 值在6.0~8.0范围内时,活性较为稳定。抗氧化肽溶液的活性随着食盐浓度的增大而有所降低,当食盐的浓度达到8%时,抗氧化肽的活性保持率为86.33%。蔗糖质量分数在2%~8%范围内时,菜籽抗氧化肽的活性随蔗糖含量的增加而显著下降,在蔗糖质量分数达到8%,活性保持率在80%以上。在0.02%~0.16%质量分数范围内,柠檬酸对菜籽抗氧化肽的活性影响不大,其活性保持率均在90%以上。常见的金属离子对菜籽抗氧化肽的稳定性影响不一,Cu 2+和Zn +对菜籽抗氧化肽的DPPH·自由基清除活性和亚铁离子螯合能力的影响最为显著。苯甲酸钠和山梨酸钾对抗氧化肽的稳定性影响不明显,可以在多肽产品中作为防腐剂使用;菜籽抗氧化肽溶液经过胃蛋白酶消化后抗氧化活性显著增加,再经过胰蛋白酶消化后活性大幅度下降。

菜籽清蛋白小分子肽的制备

本文利用Alcalase和Flavourzyme双酶对菜籽清蛋白进行分步水解,将水解度由单酶的14.72%提高至28.10%。粗品肽(RSP-R)经SephadexG-25凝胶层析柱分离纯化,得到分子量大致分别为大于5000D的RSP-1,1050D的RSP-2和560D的RSP-3三个级分。RSP-2为主要成分,其蛋白质含量是79.23%,总糖含量是13.88%。这些为后续研究小分子菜籽肽活性功能提供了理想的原料和理论依据。

菜籽多糖对四氧嘧啶致糖尿病小鼠降血糖作用的研究

研究菜籽多糖(RSPS)在四氧嘧啶致糖尿病小鼠体内的降血糖作用。腹膜注射200mg/kg四氧嘧啶造小鼠糖尿病模型,腹膜注射给药12d。测定给药前后小鼠血糖值、小鼠体重与免疫器官重量、血清抗活性氧单位与肝匀浆MDA含量。75mg/kg·d与400mg/kg·d RSPS可使糖尿病小鼠血糖分别下降18.38%与24.62%,能显著增加糖尿病小鼠胸腺与脾脏指数,提高血清抗活性氧单位,降低肝匀浆MDA含量。400mg/kg·dRSPS对正常小鼠血糖无显著影响。研究结果表明RSPS在糖尿病小鼠体内具有降血糖、增进免疫与抗氧化作用。

菜籽肽对S_(180)肿瘤细胞体外生长影响的研究

目的: 研究菜籽蛋白经酶水解产生菜籽肽(RSP),抑制体外S180肿瘤细胞的生长及对其细胞膜的影响。方法: 采用体外培养S180肿瘤细胞为模型,观察肿瘤细胞的增殖、细胞膜上脂肪酸和唾液酸含量的变化,以及细胞膜流动性的改变。结果: 菜籽肽对S180肿瘤细胞的增殖有抑制作用,同时能够影响肿瘤细胞的细胞膜。结论: 菜籽肽具有抑制肿瘤生长的潜力,具有进一步研究意义。

微生物发酵改善菜籽粕品质的研究

采用实验室筛选的菌种混合固态发酵菜籽粕,比较菜籽粕发酵前后硫甙、粗蛋白质、菜籽肽、乳酸含量以及蛋白质体外消化率的变化。结果表明,菜籽粕中的硫甙降解率为53.4%,粗蛋白质含量从39.99%提高到45.84%,菜籽肽含量由2.48%提高到10.58%,氨基酸的组成和含量也有一定的变化和提高,蛋白质的快速体外消化率提高了1.94%,有益代谢产物乳酸的含量由1.03%提高到2.53%。

油菜籽脱皮冷榨制备菜籽多肽的研究

油菜籽经脱皮冷榨得到冷榨饼,再经低温浸出脱溶得到低温粕,对低温粕提取菜籽蛋白,然后用中性蛋白酶AS1.398水解菜籽蛋白得到菜籽多肽。通过正交实验得到的最佳酶解条件是:pH7.2、温度45℃、加酶量5%(酶与原料液的质量比)、酶解时间2 h,酶解后有75%左右的蛋白质转化为可溶性肽,所得到的菜籽多肽流动性好,黏度低,热稳定性较好。

油菜籽饼粕中蛋白和肽的制取

选用碱提酸沉方法制备菜籽蛋白,通过对各种因素的分析得到菜籽蛋白的制备条件是在pH 12的条件下提取菜籽蛋白,物料比为1∶15,菜籽蛋白的沉淀分两步进行,首先在pH 6.0条件下进行沉淀,离心之后在pH 3.6条件下再进行沉淀,收集两次的沉淀干燥即可得到菜籽蛋白。按照此工艺生产菜籽蛋白,提取率为40.7%。以菜籽粕为原料,以水解度为衡量指标,对碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶的酶解作用进行比较,即不同的水解时间、水解温度,不同pH的酶解液和不同底物浓度的作用进行比较,最终确定用碱性蛋白酶进行酶解,水解时间为7 h,温度为50℃,酶解液pH 8.0,底物浓度为3%时,其菜籽分离蛋白水解度达32.19%。

超声处理对菜籽蛋白酶解效果的影响

以双低菜籽饼粕蛋白为原料,以常规酶解为对照,以酶解产物的抑制活性为指标,分别考察了超声预处理蛋白酶、超声预处理蛋白原料和酶解过程前期施加超声3种超声处理方式对双低菜籽蛋白酶解制备ACEI活性肽效果的影响。结果表明,3种超声辅助方式都能有效地促进菜籽饼粕蛋白的酶解,提高产物的ACE抑制活性,其中超声预处理蛋白原料效果最为明显。这种方式的最佳参数为:超声频率20kHz、超声时间30min、超声功率1250W、作用时间4s、间歇时间2s,该条件下酶解产物对ACE的抑制率从对照组的70.83%提高到92.97%,肽得率从29.6%提高到41.4%,半抑制浓度IC50从3.57mg/mL降到2.48mg/mL。这表明脉冲超声辅助酶解法是一种高效制备双低菜籽ACEI肽的方法。

菜籽肽抑制肿瘤作用和对免疫功能的影响

以小鼠S180实体瘤模型为研究对象,通过观察小鼠的肿瘤重量、淋巴细胞转化能力、脾细胞抗体形成及血清溶血素含量的变化。研究了菜籽清蛋白经酶水解产生菜籽肽(RSP)抑制小鼠体内S180肉瘤的生长和对小鼠免疫功能的影响。结果表明,与环磷酰胺比,菜籽肽对S180肉瘤生长有抑制作用,同时明显增强小鼠免疫能力。

离子交换色谱和凝胶过滤分离纯化菜籽抗氧化肽

为获得高纯度并具有高抗氧化活性的肽组分,本文依次采用离子交换色谱和凝胶过滤纯化水酶法提油工艺获得的菜籽粗肽(RP55)。由离子交换色谱分离可得到3个肽组分:RP55-E1、RP55-E2和RP55-E3,总回收率约为62%。和RP55相比,3个组分均色泽变浅,糖和单宁含量显著降低,其中RP55-E2蛋白质含量最高(75.18%),其清除DPPH.的ED50为0.159 mg/mL。通过凝胶过滤进一步分离RP55-E2得到5个肽组分,总回收率约为42%,其中组分RP55-E2-G5蛋白质含量最高(86.26%),清除DPPH.的ED50为0.083 mg/mL,比RP55-E2抗氧化活性有显著提高。

菜籽肽的制取及生物活性研究进展

菜籽肽是由菜籽蛋白水解得到的一种多肽,具有独特的理化特性与生物学活性。对菜籽肽的制取、分离和纯化工艺进行了介绍,并系统阐述了菜籽肽的生物活性。菜籽肽虽然具有抗氧化、抗肿瘤、抗高血压和抗艾滋病等生物活性,但是对于菜籽肽的应用研究在国内还是空白。因此,菜籽肽相关产品的开发和应用将是下一步研究的重点。