16个Y-STR基因座快速复合扩增体系的构建研究

为了构建一套16个Y-STR基因座的快速复合扩增体系,用于满足公安的实战时效性需求,文中选择DYS19、DYS385a/b、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS438、DYS439、DYS437、DYS448、DYS456、DYS458、DYS635、Y_GATA H4和DYS447共16个基因座,将Roche FastStart Taq DNA Polymerase体系与ProPlex热循环仪结合,以法医DNA标准品9948为实验模板,从扩增条件、扩增体积、缓冲液选择、DNA聚合酶用量、基因座间的平衡性调整、快速扩增程序的优化等方面进行一系列复合扩增实验,比较不同条件下等位基因的丢失、峰高、基因座间峰的均衡性及非特异峰。结果发现,该快速体系30 min即可获得样本全部16个Y-STR基因座分型,且各等位基因间均衡性良好,无非特异性峰。以上信息初步表明建立的16个Y-STR基因座的快速复合扩增体系可明显提高样品检测效率,对实战中一些时效性案件具有一定的实际意义。

Validation of a multiplex amplification system of 19 autosomal STRs and 27 Y-STRs

This article describes a newly devised autosomal short tandem repeat(STR)multiplex polymer-ase chain reaction(PCR)system for 19 autosomal loci(D12S391,D13S317,D16S539,D18S51,D19S433,D2S1338,D21S11,D3S1358,D5S818,D6S1043,D7S820,D8S1179,CSF1PO,FGA,TH01,TPOX,vWA,Penta D and Penta E),27 Y-chromosome STR loci(DYS19,DYS385,DYS3891,DYS38911,DYS390,DYS391,DYS392,DYS393,DYS437,DYS438,DYS439,DYS448,DYS449,DYS456,DYS458,DYS460,DYS481,DYS518,DYS533,DYS570,DYS576,DYS635,DYS627,YGATAH4 and DYF387S1)and amelogenin with six-colour fluorescent labelling.Various parameters were evaluated,such as its accuracy,sensitivity,specificity,stability,ability to ana-lysis of mixtures and effects of changes in the PCR-based procedures.All of the 47 selected STR loci were accurately and robustly amplified from 282 bloodstain samples.The species-spe-cificity was high and some ability to inhibit Hematin was identified.The lowest detectable DNA amount was ≥0.125 ng.All of the male loci of the secondary component were revealed precisely when the control DNA was mixed at male/female and male/male ratios of 1:4 or more.We conclude that the present 19-plex autosomal STR and 27 Y-STR assay is both accur-ate and sensitive.It constitutes an additional powerful tool for forensic applications.

胎儿染色体异常快速产前检测方法的研究进展

快速产前检测方法是产前诊断的重要组成部分,包括细胞和分子遗传学和超声诊断。由于细胞和分子遗传学检测技术的介入,胎儿染色体非整倍体的快速检出及某些染色体结构异常的鉴别能力,得到了很大的提高。目前临床上较常用的细胞和分子遗传技术包括荧光原位杂交技术(FISH)、荧光定量PCR(QF-PCR)、多重连接探针扩增技术(MLPA)和微阵列比较基因组杂交技术(array-CGH)。在怀孕的第1和第2个"3个月"阶段进行有效的超声检查,常见的染色体异常都可以被检测出来。因此,将细胞和分子遗传技术与超声检测相结合,可以提高胎儿染色体非整倍体的检出率和产前诊断的准确性,以减少缺陷婴儿的出生。

应用MLPA分析技术快速产前诊断21-三体综合征

目的探讨应用MLPA技术快速产前诊断21一三体综合征的可行性。方法对181例羊水样本进行MLPA实验及羊水细胞染色体G显带核型分析，将MLPA实验结果与染色体核型分析结果进行比较。结果180例羊水样本均应用MLPA技术一次检测成功，1例样本因DNA浓度问题需二次检测，羊水标本MLPA检测的24h检出率达到99．4％。从样本中检测出4例染色体异常（3例2l一三体，1例X单体），检测结果与羊水细胞培养染色体G显带核型分析结果一致。结论羊水MLPA分析技术可用于快速产前诊断21-三体综合征。