补肾调泡法联合维生素D对多囊卵巢模型大鼠卵巢抗苗勒氏管激素Ⅱ型受体表达的影响研究

目的 探讨补肾调泡法联合维生素D对多囊卵巢(PCOS)模型大鼠卵巢抗苗勒氏管激素Ⅱ型受体表达的影响。方法 30只SD雌性大鼠随机选取6只作为空白组,剩余24只采用来曲唑-羧甲基纤维素钠溶液灌胃法构建PCOS大鼠模型,并在成功后设立模型组、中药组(补肾调泡法)、维生素D组、联合组(补肾调泡法+维生素D),每组6只。实验33d后处死大鼠收集血标本及卵巢组织,测定血清激素水平、AGEs、25(OH)D、钙、磷、AMH,并对卵巢组织行HE染色,检测卵巢AMH及AMHRⅡ表达。结果 联合组、维生素D组、中药组的LH、FSH、T、AMH水平均低于模型组,且联合组各项指标低于维生素D组、中药组,维生素D组、中药组各项指标高于空白组,维生素D组E2明显升高,中药组的AGEs水平较高(P<0.05),但联合组与空白组相当(P>0.05);联合组、维生素D组、中药组的卵巢AMH、AMHRⅡ低于模型组(P<0.05),但联合组与空白组相当(P>0.05);联合组、维生素D组、中药组的25(OH)D、钙、磷水平高于模型组(P<0.05),但联合组与空白组相当(P>0.05)。结论 补肾调泡法联合维生素D对PCOS模型大鼠卵巢AMHRⅡ表达有抑制作用,通过抑制AMH信号通路,提高25(OH)D水平,调节性激素水平,降低AGEs,可促进卵泡发育和成熟,改善卵巢功能。

补肾调周法对多囊卵巢大鼠血清胰岛素和抵抗素的影响

目的:探讨补肾调周法(模拟大鼠动情周期序贯应用补肾Ⅰ号方和补肾Ⅱ号方)与单独应用补肾Ⅰ号方、补肾Ⅱ号方对多囊卵巢(PCO)大鼠糖代谢的作用机理。方法:采用孕激素加HCG建立PCO大鼠模型。用药16天后,检测体重,放射免疫法测定各组大鼠血清胰岛素含量,ELLSA法测定各组大鼠血清抵抗素,并对卵巢作病理组织学观察。结果:在降低体重及血清胰岛素、抵抗素方面,补肾调周组优于补肾Ⅰ号组、补肾2号组。补肾调周组、补肾Ⅰ号组、补肾Ⅱ号组与模型对照组比较,其颗粒细胞层数明显增多,黄体组织数量显著增加。结论:应用补肾调周法可对PCO大鼠糖代谢进行良性调节,这可能是临床治疗PCOS高胰岛素血症的机制之一。

补肾养血法对超促排卵未孕大鼠子宫内膜微环境的影响

目的探讨中医补肾养血法对超促排卵未孕大鼠子宫内膜微环境的影响。方法建立大鼠超促排卵模型,以补肾养血方干预未孕大鼠,分析其子宫内膜形态、微血管密度、子宫容受性分子标志物的改变。结果超促排卵可减小子宫内膜厚度,增加腺上皮高度使腺体密集,降低白血病抑制因子(LIF)蛋白及整合素α4蛋白的表达,改变子宫内膜微环境;补肾养血法可改善未孕超促排卵大鼠子宫内膜形态,升高整合素α4和LIF表达水平。结论补肾养血法可以改善子宫内膜微环境,提高子宫内膜容受性,从而保证早期的妊娠稳定。

不同浓度补肾健脾方对卵巢颗粒细胞增殖作用的影响

目的:观察不同浓度补肾健脾方含药血清对原代培养的卵巢颗粒细胞增殖作用的影响以及不同浓度补肾健脾方对小鼠卵巢组织卵泡颗粒细胞层增殖的影响。方法:采用机械分离法结合胰蛋白酶消化法体外原代培养大鼠卵巢颗粒细胞,通过HE染色法进行细胞形态鉴定。采用MTT法检测,分别观察含质量分数5%、10%、20%补肾健脾方含药血清对卵巢颗粒细胞增殖作用的影响。体内实验通过给雌性小鼠灌胃不同浓度的补肾健脾方,连续灌胃4周,取卵巢组织做病理形态学观察。结果:质量分数20%、10%、5%的补肾健脾方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖作用各不相同,质量分数20%、10%的含药血清、20%的空白血清对卵巢颗粒细胞的增殖作用最明显,与正常组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。补肾健脾方大剂量、中剂量、小剂量对卵巢卵泡颗粒细胞层的厚度呈现一定的增高趋势。结论:补肾健脾方对小鼠的卵巢颗粒细胞具有一定的增殖作用。

人促卵泡激素体外生物学活性测定方法的建立

目的:建立人促卵泡激素(FSH)体外生物学活性检测方法,并对方法进行验证。方法:以人卵巢颗粒细胞KGN为基质细胞,用不同浓度的FSH与KGN细胞表面的FSH受体结合,刺激细胞产生不同浓度的孕酮,通过测定细胞培养上清中的孕酮含量来评价FSH的生物学活性,结果用国际标准品进行校正;对方法的专属性、线性与范围、回收率、精密度、耐用性进行验证;对市售FSH产品进行检测,并与传统动物体内活性检测结果进行比较。结果:KGN细胞对FSH有很好的剂量反应关系,方法专属性符合要求;线性范围为0.1~200 ng/m L,相关系数R2≥0.99;回收率为80%~120%;经3次重复测定,3批市售样品和3批自制样品的活性分别为(13.4±0.4)^(13.5±0.8)和(12.9±0.7)^(14.3±1.2)IU/μg,变异系数在15%之内;结果显示该方法有很好的耐用性。测定3批市售重组人FSH产品和1批尿源FSH国家标准品,其体外活性测定结果与传统动物体内活性测定结果一致。结论:建立并验证了一种利用KGN细胞体外测定FSH生物学活性的方法,有望代替传统的动物体内活性测定方法,可用于FSH的生物学活性评价和质量控制。

促卵泡激素体内生物活性测定及其各国药典方法比较

目的：基于长期大量实验数据，对各国药典促卵泡激素（FSH）生物活性测定方法进行梳理、比较。方法：对中国药典2010年版（ChP2010）FSH生物测定法优化，测定国内外多批重组人促卵泡激素（rhFSH）、尿源FSH及复方rhFSH—rhLH产品的体内生物活性，并就动物数、大鼠体重、溶媒中HCG含量、给药剂量、反应值等与EP7．0和USP35-NF30的FSH的生物测定方法进行对比，梳理其异同。结果：ChP2010每组8只动物与EP7．0和USP35-NF30每组5只动物，计算效价结果总平均偏差率为2．3％，总平均可信限率由21．2％升至28．7％，都在生物测定误差允许范围内。ChP2010规定雌大鼠出生19～23d，体重36。50g，体重偏小，实验灵敏度差，体重36～40g的大鼠卵巢增重明显小于40—50g的空白组卵巢增重（P〈0．05）；溶媒中HCG含量也偏低；给药剂量与EP7．0和USP35-NF30相近；卵巢重作为反应值与EP7．0和USP35-NF30器官系数作为反应值不同，两者测定结果间差异无显著性意义。结论：每组5只大鼠即可满足实验要求，减少实验动物用量（3R原则）。大鼠出生21—23d，体重应为40—60g（最大相差10g内），溶媒中HCG含量适当增加至25～30Iu·mL^-1为最佳FSH生物测定实验条件，优化ChP2010的FSH生物测定法。