不同酸碱性稀释液联合一水肌酸对猪X、Y精子分离效果的研究

旨在探究调整猪精液稀释液酸碱性联合一水肌酸(ceatine monohydrate,CMH)对猪X、Y精子的分离效果。本研究使用8头2~4岁健康的杜洛克公猪采集精液,通过调整精液稀释液Beltsville(BTS)的pH,使用精子计算机辅助分析系统(CASA)检测精子活率和运动轨迹确定X、Y精子分选体系最适pH,利用CASA检测精子运动性能确定一水肌酸最适添加浓度。通过免疫荧光染色和流式细胞术评估X、Y精子分选效果,利用荧光标记法、精子活性氧MitoSOX Red染色等方法检测精子顶体、质膜完整性、活性氧含量等精子质量指标。结果表明,当稀释液pH为6.4和7.1时,孵育60 min对精子活率无显著影响(P>0.05),上层精子前向性运动占比极显著高于下层(P<0.01)。稀释液中添加750μmol·L^(-1)一水肌酸孵育60 min时显著提高了精子活力、直线运动速率、曲线运动速率和摆动性(P<0.05)。使用酸性稀释液联合一水肌酸分选猪X、Y精子,分选后上层精液X精子占比达63.32%;碱性稀释液联合一水肌酸分选猪X、Y精子,分选后上层精液Y精子占比达到67.19%。进一步研究发现,分选后顶体完整性、质膜完整性和ROS水平同对照组相比无显著差异(P>0.05),ATP水平、线粒体膜电位和运动性能显著高于对照组(P<0.05)。综上,本研究通过调整稀释液酸碱性并联合一水肌酸建立了一种简便、价廉和快捷的猪X、Y精子分选体系,该方法不影响分选后精子质量并提高精子运动性能,进一步为猪性控精液新技术研发提供试验依据。

水牛精液中X和Y精子比率的鉴定

利用流式细胞仪分析水牛分离和未分离精液中精子的DNA含量,所得的直方图用高斯曲线拟合,分析计算出样本中X和Y精子的比率。结果表明:未分离的水牛精液中X精子的比率为50%,与正常水牛后代性别比率没有显著差异;而水牛的分离X精液样本中X精子占93%,分离Y精液样本中Y精子占89%。实验结果显示了流式细胞仪DNA分析法鉴定水牛精液中X和Y精子比率的可靠性,而流式细胞仪分离精子程序和方法在水牛上的应用是可靠而有效的。

S-HPM辐射致牛X,Y精子的损伤差异研究

目的探讨S-HPM辐射致X、Y精子的损伤及其差异。方法经流式分选得到高纯度的牛X、Y精子,经30 mW/cm2和100 mW/cm2的S-HPM辐射4 min,通过精子动态分析系统检测辐射后1 h、2 h、4 h、6 h、12 h和24 h的X精子和Y精子的活动度的差别;吖啶橙/溴化乙啶(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)染色检测辐射后1 h、6 h、12 h和24 h的X精子和Y精子凋亡率的变化。透射电镜观察100 mW/cm2S-HPM辐射后4 h X、Y精子超微结构损伤程度的差异。顶体酸性磷酸酶染色检测辐射后1 h、6 h和12 h顶体功能的变化差异。结果经30 mW/cm2和100 mW/cm2的S-HPM辐射后,精子活动度均随时间延长呈降低趋势,X、Y精子活动度的降低未见显著性差别(P>0.05)。S-HPM辐射可致X、Y精子凋亡率增加,呈现Y精子重于X精子,100 mW/cm2重于30 mW/cm2的趋势,其中早期具有显著性差异(P<0.05)。超微结构显示S-HPM辐射后精子以头部病变为主,尾部病变不明显,Y精子损伤重于X精子。S-HPM辐射后精子顶体酸性磷酸酶含量降低,Y精子重于X精子,100 mW/cm2重于30 mW/cm2(P<0.05,P<0.01)。结论 S-HPM辐射后X、Y精子均发生损伤,以精子头部病变为主,精子顶体酸性磷酸酶含量降低,Y精子的损伤重于X精子。

乳牛精子细胞核可被精确地分成类似于X,Y精子的两个群体

由于哺乳动物雄性配子(精子)有性染色体的差异,使哺乳动物X、Y精子在质量或密度上存在着微小的差别。因此,长期以来人们试图将两性精子分开,以人的意志控制动物性别,按人类的需要进行畜牧业生产。但是由于精于之间发育上的差异所引起的质量差掩盖了染色质的微弱差异,从而难以达到理想的分离效果。本实验先将两性精子共有的顶体和尾部去掉,以突出X、Y染色质的质量差异,再将精子细胞核在氯化铯密度梯度离心下分成两个核群区带。该实验为X、Y精于分离效果的鉴定提供了一种有效的方法。

Sry基因探针FISH检测奶牛XY精子纯度

为探讨荧光原位杂交技术(FISH)在评价奶牛精子纯度方面的应用价值,制备地高辛标记Sry基因探针,对分选X、Y精子及常规精子标本进行RNA水平的精子荧光原位杂交分析。结果显示,荧光原位杂交测定分选X、Y精子及常规精子纯度分别为94.6%、93.3%、50.3%,与对应精子纯度比较差异不显著(P>0.05),杂交信号多出现在精子尾部中段。可见:建立的Sry基因探针FISH方法评价奶牛精子纯度鉴定结果准确可靠,为其他精子纯度评价方法提供可靠的技术支持。

性控奶山羊精液X和Y精子分离比例检测方法的建立

旨在建立可以定量计算奶山羊精液中X、Y精子数量的双重TaqMan荧光定量PCR方法,用以检测经过分离的奶山羊精液X和Y精子的数量和比例,为性控技术的开发和生产应用提供技术支撑。本研究选择X、Y染色体中特异基因F9及ZFY片段设计引物,建立标准曲线,优化荧光定量PCR反应体系和条件。通过对阳性标准品梯度稀释以及对60支已知纯度的性控精液进行测定(3次重复)来检验方法的敏感性和可靠性。结果显示,所建立的双重TaqMan荧光定量PCR方法特异性和重复性好,X和Y精子检测灵敏性分别为47和51 copies·μL~(-1);利用该方法对商品化的奶山羊性控冷冻精液中X和Y精子的数量和比例进行计算,其结果与销售公司提供的X和Y精子的纯度无显著差异(P>0.05),表明该方法结果可靠。本研究建立的计算奶山羊X、Y精子数量的双重TaqMan荧光定量PCR方法特异性和重复性好,灵敏度高,结果可靠,为计算奶山羊精液分离后X、Y精子数量及比例提供了快速可靠的方法。

三维f-x,y域随机噪音衰减

本文提出一种新的三维去噪法方──三维随机噪音衰减（3－DRNA）。该法假设反射波同相轴在局部为平面，因而在f-x，y域空间的所有方向上，同一频率成分的信号均具有可预测的特点。这样便可以采用多道复数最小平方原理，求出一个矩形预测滤波算子，达到去噪的目的。通过理论试验及实际资料的处理，表明这种三维去噪方法明显好于常规二维f-x域预测去噪（2－DRNA）方法。因为该法能充分利用三线信息、完整地保留构造形态，去噪能力更有效。去噪后，断点清晰、波形自然、无相干蚯蚓化等现象。

低剂量梅花鹿XY精子马花杂交人工授精试验

采用流式细胞分离仪分离的梅花鹿X和Y型冷冻精液与常规冻精对62头3组同期化处理的马鹿进行直肠把握人工授精。结果表明,0.25 mL/支含106个有效精子的X和Y型冻精产仔率分别为43%和37%,而0.25 mL/支含107个有效精子的常规冻精产仔率为55%,X、Y型冻精与常规冻精组间差异显著(P<0.05),所产后代性别比率分别为0∶10,9∶0和5∶6,X、Y型冻精与常规冻精组间差异显著(P<0.05),X、Y型冻精与常规冻精所产后代出生及60 d时的体重差异不显著(P>0.05)。

牛X与Y精子差异蛋白质组学研究

本研究旨在利用蛋白质组学技术探究牛X、Y精子的差异蛋白质,为X、Y精子免疫分离技术的开发与优化提供一定的理论基础。冷冻保存的安格斯牛X和Y精子样品各三组进行非标定量蛋白质组学研究,共鉴定到1139个蛋白质,其中X精子鉴定到1023个蛋白质,Y精子鉴定到1022个蛋白质。X与Y精子间具有极显著差异(P<0.01)的蛋白质有40个,其中X精子高表达蛋白质7个,Y精子高表达蛋白质33个,Y精子单独鉴定到的蛋白质31个。X与Y精子差异蛋白质集中在代谢过程,大部分具有催化活性,主要位于线粒体内膜;Y精子高表达蛋白质主要参与各类氨基酸代谢及能量物质代谢过程,X精子高表达蛋白质主要参与氧化磷酸化途径。X、Y精子差异表达蛋白说明X与Y精子在运动能力、抵抗氧化应激及能量代谢等方面存在差异。

多级梯度离心后X/Y精子浓度分析

目的在辅助生殖中,利用多层密度梯度离心的方法来分选X/Y精子,以检验常规IVF-ET中,X/Y精子比例是否失衡.方法使用Sperm Grad TM(Vitrolife,Sweden)与Sperm Rinse TM(Vitrolife,Sweden)配制10层梯度液,分别为100%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%.在离心管中制成多层梯度后,每层梯度间分界明显.选择液化正常、浓度约50×106/mL、活动率约50%,畸形率正常的5人精液混合后,去除个体差异取3 mL进行梯度离心.分别收集每层梯度底部精子,利用双色X/Y FISH探针(Vysis)进行FISH检测,统计X/Y精子比例.结果 100%、95%、90%、85%、80%五层梯度中X精子含量比例分别为:51.41%、51.41%、52.19%、50.99%、54.10%.结论每层梯度液中X/Y精子含量比例虽有不同,但差异并不明显.现在辅助生殖技术中,利用商品化精子梯度分离液,即使使用多层梯度进行离心分离,也不会造成性别比例失衡.

奶牛X性控冻精应用研究

利用SX—MOFLO精子分离设备分离奶牛XY精子，将分离后的奶牛X精子冷冻保存。探讨奶牛X性控冻精解冻后存活时间、不同方法进行人工授精的受胎率，为奶牛X性控冻精的大规模推广应用提供依据。方法与结果：（1）取不同种公牛、不同批次的X性控冻精及普通冻精解冻后倒人5ml。试管内摇匀，至37℃水浴锅中，每2h检测一次精子活力，4h后每小时检测一次精子活力，直至无运动精子。结果奶牛X性控冻精存活时间为5～12h，比同种普通精于的存活时间短2～10h。（2）应用奶牛X性控冻精人工授精的母牛的情期受胎率（59．4％=342／576）与普通冻精的情期受胎率（60．6％=129／213）相比，无显著差异（P〉0．05）。奶牛X性控冻精母犊出生准确率93．3％（319／342），极显著地高于普通冻精48．8％（63／129）的母犊率（P〈0．001）。且应用奶牛X性控冻精人工授精后的青年牛的情期受胎率（65．6％=240／366）极显著的高于经产牛的情期受胎率（48．6％=102／210）（P〈0．001）。（3）在母牛发情结束后6～8h左右进行人工授精，其情期受胎率为67．1％（116／173），显著地高于在母牛发情开始后8～12h进行人工授精56．1％（226／403）的情期受胎率（P〈0．01）。（4）在准确判断母牛卵巢上卵泡发育状态的前提下，将精液全部输至发育侧子宫角大弯处，其情期受胎率62．7％（289／461），高于母牛每侧子宫角输1／2支X性控冻精46．1％（53／115）的情期受胎率，但二者之间差异不显著（P〈0．05）。研究结果表明应用奶牛X性控冻精进行人工授精，其受胎率与奶牛的经产与否、授精时间和输精部位有关。

冷拉减面率对C形环用Inconel X-750丝材组织性能的影响

文章通过冷拉拔加工制备减面率为0%、30%、60%的Inconel X-750丝材,分别在650℃、730℃、810℃下时效处理16h,研究冷拉减面率对X-750合金组织性能的影响,特别是减面率对γ′相形状、分布、数量及尺寸的影响。经定量分析,增大冷拉减面率除了有细化晶粒的作用外,还能一定程度地增加γ′相析出的颗粒数量及体积分数,减小γ′相尺寸,进一步加强沉淀强化的作用。时效温度对X-750丝材的晶粒尺寸没有明显影响,对γ′相的数量、尺寸及形状影响较大。采用730℃时效处理16h的标准工艺制备的X-750丝材,经加工为弹簧后制造成金属C形密封环,其回弹量及泄漏率均满足要求,实验条件下密封性能良好。

动物性别控制技术研究进展

性别控制是通过人为干预使雌性动物生产出特定性别后代的一项技术。鉴于X精子和Y精子的分离是实现动物性别控制的技术基础,本文基于X精子和Y精子在物理和化学上的特性差异总结和比较了受精前分离精子的新技术,包括流式细胞分离法、免疫学分离法、pH分离法、微流体和纳米技术。免疫学分离法中R848(雷西莫特)激活TLR7/8信号通路是精子分离的潜在方法,旨在为动物性别控制技术提供理论依据。

绵、山羊性控精液的制作技术与应用研究进展

绵、山羊性控精液的生产与应用大大提高了群体扩繁的效率,推动了羊产业快速发展。自性控精液技术发展以来,研究者们虽取得了一定的科研成果,但在羊生产中的应用仍然十分有限。本文系统综述了羊性控精液分离技术的发展及不同因素(包括品种、个体差异、稀释液配方、冷冻程序、饲养管理)对绵、山羊性控精液制作的影响,并阐述了羊性控精液的推广应用及前景展望,为绵、山羊性控精液高效分选、输精技术的研发及推广应用提供参考。

家畜性别决定的机制及其控制的研究进展

家畜性别决定的分子机理以及通过实施精子分离和早期胚胎性别鉴定来进行性别控制的研究进展

哺乳动物性控DNA疫苗研究现状和构想

介绍了DNA疫苗的定义、组成、机理、应用策略,综述了X、Y精子间蛋白和mRNA的研究现状,指出X、Y精子间基因表达差异的存在,利用mRNA差异显示技术可对X、Y精子构建性别差异表达的消减cDNA文库,大规模筛选性别差异表达基因,在此基础上应用DNA疫苗技术,既避开蛋白质水平寻找X、Y精子弱差异蛋白这个困难,又能够特异性地抑制X或Y精子,更经济地实现对性别的控制。性控DNA疫苗是新的研究方向。

乳牛精子细胞核的两性分离试验

由于雄性配子（精子）有性染色体的差异，哺乳动物Ｘ、Ｙ精子在质量或密度上存在着微小的差别。为了突出这微小的质量差，实验先将两性精子共有的顶体和尾部都去掉，然后再将精子细胞核在氯化铯密度梯度条件下离心，成功地将乳牛精子细胞核分成明显的两个区带。

性别控制技术研究进展

性别控制是指通过人为干预动物的正常生殖过程,使雌性动物生产出人们所期望的性别后代的技术。在畜牧生产过程中,某些经济性状的表现与动物的性别间有着直接或间接的联系,因此研究高效、准确的性别控制技术对提高畜牧业生产效益具有重要意义。本文通过对性别分化的调控机制、性别反转调控以及X、Y精子分离技术进行综述,旨在为畜牧业生产中性别控制的相关研究提供参考。

拉布拉多犬低剂量性控冻精的人工授精试验研究

为了评估拉布拉多犬低剂量性控冻精的人工授精效果,试验采用经流式细胞仪分离的拉布拉多犬X冻精和Y冻精,开展低剂量性控冻精的人工授精技术方法研究。结果表明:X冻精后代性别控制准确率为83.33%,Y冻精后代性别控制准确率为82.35%;自然交配母犬情期受胎率为84.00%,显著高于性控冻精母犬受胎率71.43%(P<0.05);平均窝产仔数、仔犬成活率差异均不显著(P>0.05);性控精液与自然交配所产后代初生、1月龄、2月龄、3月龄、4月龄的体重和1~4月龄的体尺差异不显著(P>0.05)。

性别控制技术在畜牧业中的应用研究现状与发展

随着生活水平的提高,人们对肉、奶等畜禽产品的需求也不断提高,因此畜禽繁育工作就显得尤为重要,而性别控制技术是加快畜禽繁育工作的重要环节,其是一类通过人为干预方式来控制畜禽后代性别以满足市场需求的技术。目前生命科学领域发展迅速,已经有多种相对成熟的性别控制技术,如流式细胞仪分选法、免疫学分离法、改变精子生存环境法、基因编辑法、磁性细胞分选(magnetic activated cell sorting,MACS)法等,笔者对上述性别控制技术进行综述,以期为性别控制技术在畜牧业中的应用提供参考。