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烟草rbcS启动子的克隆与活性鉴定 被引量:5
1
作者 孙家利 闫晓红 +2 位作者 王力军 时向东 魏文辉 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 2010年第3期80-85,共6页
为了有效启动外源基因在烟草叶部特异性表达并改良烟叶品质,采用PCR技术从烟草栽培种NC89基因组中分离了rbcS启动子序列,扩增片段长度979bp。PlantCARE序列分析表明,该序列中含有启动子特征的保守序列及十几种光应答元件,与已报道序列... 为了有效启动外源基因在烟草叶部特异性表达并改良烟叶品质,采用PCR技术从烟草栽培种NC89基因组中分离了rbcS启动子序列,扩增片段长度979bp。PlantCARE序列分析表明,该序列中含有启动子特征的保守序列及十几种光应答元件,与已报道序列的相应区域同源性达99%。将其与GUS融合蛋白基因串连,构建了植物表达载体prbcS-121,通过根癌农杆菌介导的烟草叶盘转化法,将pBI121及prbcS-121转化烟草。对转基因烟草植株中GUS活性测定结果表明,烟草rbcS启动子具有叶部组织特异性,且在叶部启动基因表达能力较CaMV35S启动能力强,从而为外源基因在转基因烟草叶片中的高效表达提供了新的工具,为后续目的基因能在烟草叶部发生组织特异性和光诱导性表达奠定了基础。 展开更多
关键词 烟草 rbcs启动子 rbcs-GUS融合基因 GUS活性 转基因烟草
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水稻rbcS启动子控制的外源基因在转基因水稻中的特异性表达 被引量:23
2
作者 刘巧泉 于恒秀 +2 位作者 张文娟 王红梅 顾铭洪 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期247-253,共7页
为将不同启动子用于转基因水稻的研究,从武运粳8号水稻中克隆了Rubisco小亚基基因(rbcS)的5'上游调控区,构建了由rbcS启动子引导的GUS融合基因,并经农杆菌介导导入到水稻中。对转基因水稻植株中GUS活性的定性与定量测定结果表明,rbc... 为将不同启动子用于转基因水稻的研究,从武运粳8号水稻中克隆了Rubisco小亚基基因(rbcS)的5'上游调控区,构建了由rbcS启动子引导的GUS融合基因,并经农杆菌介导导入到水稻中。对转基因水稻植株中GUS活性的定性与定量测定结果表明,rbcS启动子可驱动GUS报告基因在转基因水稻植株叶片和叶鞘内的叶肉细胞中特异性高效表达,而在茎、根和种子等器官中不表达或表达活性极弱,表现出明显的组织与细胞特异性。结果还表明,光诱导处理可明显提高rbcS启动子启动的外源基因的表达量。 展开更多
关键词 水稻rbcs启动子 转基因水稻 基因表达 GUS活性 光诱导
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低温胁迫对转新疆雪莲sikRbcs2基因烟草光合作用的影响 被引量:8
3
作者 杨晶 祝建波 +3 位作者 张亚敏 李曹龙 王海霞 王爱英 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第23期7868-7877,共10页
研究分布于新疆的雪莲(Saussurea involucrata)中的sikRbcs2基因在低温条件下对植物光合作用的影响,以16、10、6、4℃温度梯度处理非转基因型和转sikRbcs2基因型烟草,每个温度处理72 h,比较研究其叶绿素荧光特性和光合特性。实验分析结... 研究分布于新疆的雪莲(Saussurea involucrata)中的sikRbcs2基因在低温条件下对植物光合作用的影响,以16、10、6、4℃温度梯度处理非转基因型和转sikRbcs2基因型烟草,每个温度处理72 h,比较研究其叶绿素荧光特性和光合特性。实验分析结果:低温胁迫下,转基因型烟草叶片叶绿素a(Chla)、叶绿素b(Chlb)、叶绿素a+b(Chla+Chlb)、类胡萝卜素(Car)含量都显著高于非转基因型烟草。叶绿素荧光参数分析:低温胁迫下,转基因烟草PSⅡ最大光化学效率(Fv/Fm)、q P(光化学猝灭系数)、ETR(电子传递效率)都显著或极显著高于非转基因型,光合参数测定:随着低温胁迫程度的加剧,转基因烟草和非转基因型烟草净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)、胞间CO_2浓度(Ci)总体都呈下降趋势,但转基因烟草的净光合速率有一个明显的动态变化,先急剧下降后有一个稳定上升的趋势。通过对生长指标的测定发现:在低温处理后和恢复后转基因烟草生物量的积累都显著高于非转基因型烟草。研究结果表明:转新疆雪莲sikRbcs2基因的烟草在低温条件下具有较高的Fv/Fm、q P、ETR,对光合机构的损伤小,降低了低温胁迫效应,提高了烟草在低温胁迫条件下的耐受性。 展开更多
关键词 低温胁迫 叶绿素荧光 光合作用 rbcs
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紫萍P143品系植物rbcS基因的cDNA克隆与表达 被引量:5
4
作者 刘翠敏 熊延 +2 位作者 王淑芳 王宁宁 王勇 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期221-224,共4页
紫萍P14 3品系离体半叶状体在黑暗下培养 4d以后 ,rbcS基因的表达比完整植株显著降低 ;半叶状体在黑暗下培养 10d ,后再转移到长日照条件下培养 。
关键词 紫萍 P143品系 植物rbcs基因 CDNA 克隆 表达 植物衰老
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栽培大豆Rubisco小亚基基因(rbcS)全长cDNA的克隆及原核表达 被引量:8
5
作者 崔喜艳 董雅致 +1 位作者 刘晓庆 张治安 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期329-333,共5页
根据NCBI中发表的大豆Rubisco小亚基基因(rbcS)序列(AF303939-1)设计特异引物,以吉农13大豆为实验材料,采用Trizol法提取叶片总RNA,通过RT-PCR克隆大豆rbcS的cDNA。将该基因与原核表达载体pET-30a(+)连接,转化大肠杆菌E.coli BL21感受... 根据NCBI中发表的大豆Rubisco小亚基基因(rbcS)序列(AF303939-1)设计特异引物,以吉农13大豆为实验材料,采用Trizol法提取叶片总RNA,通过RT-PCR克隆大豆rbcS的cDNA。将该基因与原核表达载体pET-30a(+)连接,转化大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞,双酶切鉴定后筛选阳性克隆,测序结果显示:rbcS全长696bp,其中开放阅读框为537bp,编码178个氨基酸;选择含大豆rbcS cDNA阳性克隆菌液IPTG诱导,经SDSPAGE分析,诱导表达出分子量为29.1kDa的融合蛋白,表达产物大小与预计理论值相符。诱导7h蛋白表达量最高,为64.15%。 展开更多
关键词 栽培大豆 rbcs 基因克隆 原核表达
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大豆rbcS基因启动子的克隆及在转基因烟草中的功能缺失分析 被引量:6
6
作者 崔喜艳 陈众峰 +4 位作者 范贝 韩琳 刘晓庆 董雅致 张治安 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2015年第5期114-121 128,共9页
【目的】进一步验证栽培大豆rbcS基因启动子功能,为植物基因工程相关研究提供启动子资源。【方法】从栽培大豆中克隆了rbcS基因5′端上游1 538bp的DNA序列,根据光诱导表达调控元件及顺式作用功能元件所在的位置,设计含1 089,712和190bp ... 【目的】进一步验证栽培大豆rbcS基因启动子功能,为植物基因工程相关研究提供启动子资源。【方法】从栽培大豆中克隆了rbcS基因5′端上游1 538bp的DNA序列,根据光诱导表达调控元件及顺式作用功能元件所在的位置,设计含1 089,712和190bp 3个5′端缺失体,并将rbcS基因启动子(1 538bp)及3个5′端系列缺失体序列分别与gus基因融合,构建植物表达载体并命名为pGmrbcS、pA、pB和pC,用农杆菌介导法转化烟草,通过gus基因活性变化检测不同缺失体的表达特性。【结果】克隆了1 538bp的大豆rbcS基因启动子序列及1 089,712和190bp的5′端缺失体启动子片段。GUS活性检测表明,在pGmrbcS转基因烟草的叶中GUS活性最高,且与pCAMBIA1301转基因烟草叶片中CaMV35S启动子驱使gus基因的表达量相当,而茎、根中GUS活性较低。GUS定量分析表明,T1代转基因烟草光下培养时,3种缺失体启动子叶片中的GUS表达活性均与CaMV35S启动子相当,其中pB活性最高,是CaMV35S启动子活性的1.4倍,pA、pC活性低于pB,分别为pB活性的84%和71%;含pA的转基因烟草于黑暗中萌发的幼苗叶片gus基因不表达,光下萌发幼苗叶片有gus基因表达,而含有pB、pC的转基因烟草,在黑暗和光下萌发的幼苗叶片中均有gus基因表达,且表达量以pB最高。【结论】含有长度为1 089bp(pA)光诱导元件的rbcS基因缺失体启动子具有光诱导和组织特异表达特性,长度为712bp(pB)的缺失体启动子的启动活性最高。 展开更多
关键词 栽培大豆 rbcs基因启动子 转基因烟草 功能缺失
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杜氏盐藻rbcS启动子的克隆和功能分析 被引量:8
7
作者 柴玉荣 田芳 +2 位作者 刘红涛 李杰 薛乐勋 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期47-52,共6页
为提高转基因盐藻的表达效率,利用基因组步行方法和巢式PCR,从盐藻中克隆了1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(rubisco)的小亚基基因rbcS的5′上游调控序列,并对其进行序列分析和转基因功能分析。采用DraI、EcoR V、PvuII和StuI4种平端限... 为提高转基因盐藻的表达效率,利用基因组步行方法和巢式PCR,从盐藻中克隆了1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(rubisco)的小亚基基因rbcS的5′上游调控序列,并对其进行序列分析和转基因功能分析。采用DraI、EcoR V、PvuII和StuI4种平端限制内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建基因组步行文库GWL1、GWL2、GWL3和GWL4;设计特异引物从这4种文库中扩增rbcS基因的5′上游调控序列。在GWL1、GWL4中分别扩增出约1.2kb的片段。对该序列的分析表明,它的3′端与已知盐藻rbcScDNA的5′端序列完全一致,说明是该基因的5′端上游区,并且包含多个与转录调控有关的保守序列(如TATA-box,CAAT-box),富含GT的重复序列。此序列EcoR I下游的片段与除草剂抗性基因bar相融合,构建表达载体,电击法转化盐藻。通过对转化藻株的抗性筛选以及PCR和Southern blot检测,表明该区域能驱动外源基因bar在转基因盐藻中的表达,推断是盐藻rbcS基因的启动子调控区。 展开更多
关键词 盐藻 I 5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶 rbcs 启动子
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2种PCR方法扩增大豆rbcS启动子5′侧翼序列比较 被引量:6
8
作者 刘晓庆 丁志鑫 +1 位作者 刘晶 崔喜艳 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期511-517,共7页
比较了扩增已知序列5′侧翼序列的2种PCR方法。方法一是反向PCR(IPCR),以大豆基因组酶切后的DNA片段自身环化产物做模板,用2对特异引物反向扩增大豆rbcS启动子5′侧翼序列。方法二是热不对称交错PCR(TAIL-PCR),以大豆基因组DNA为模板,用... 比较了扩增已知序列5′侧翼序列的2种PCR方法。方法一是反向PCR(IPCR),以大豆基因组酶切后的DNA片段自身环化产物做模板,用2对特异引物反向扩增大豆rbcS启动子5′侧翼序列。方法二是热不对称交错PCR(TAIL-PCR),以大豆基因组DNA为模板,用3个巢式特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环。IPCR和TAIL-PCR 2种试验方法分别扩增获得438 bp和867 bp特异产物。经测序发现:2片段两侧均含有设计的引物,其部分序列均与已知序列相一致,两者也有部分序列完全相同,但TAIL-PCR技术简单,重复性好,能够在短时间内获得目标片段,TAIL-PCR技术在克隆侧翼序列时优于IPCR。 展开更多
关键词 反向PCR 热不对称交错PCR 大豆 rbcs启动子
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番茄rbcS3A启动子控制的GUS融合基因在转基因水稻中的表达 被引量:6
9
作者 刘巧泉 于恒秀 +2 位作者 张文娟 龚志云 顾铭洪 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期251-257,共7页
为研究不同启动子用于转基因水稻,克隆了番茄Rubisco小亚基rbcS3A基因的5′上游调控区,构建了由rbcS3A启动子引导的GUS嵌合基因,并经农杆菌介导导入到水稻中。对转基因水稻植株中GUS活性的定性与定量测定结果表明,rbcS3A启动子可驱动GU... 为研究不同启动子用于转基因水稻,克隆了番茄Rubisco小亚基rbcS3A基因的5′上游调控区,构建了由rbcS3A启动子引导的GUS嵌合基因,并经农杆菌介导导入到水稻中。对转基因水稻植株中GUS活性的定性与定量测定结果表明,rbcS3A启动子可驱动GUS报告基因在转基因水稻植株茎和叶组织中高效表达,而在根和种子等器官中不表达或表达活性极弱,表现出一定的组织特异性。在转基因水稻中,番茄rbcS3A启动子驱动外源基因的表达不受光诱导。 展开更多
关键词 番茄rbcs3A启动子 转基因水稻 基因表达 GUS活性
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水稻rbcS启动子的克隆及其在转基因水稻中的特异性表达 被引量:7
10
作者 卢碧霞 张改生 +1 位作者 夏勉 马守才 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第1期96-100,105,共6页
为将高效特异的启动子用于转基因水稻研究,利用PCR技术从水稻‘中花11’基因组DNA中克隆了rbcS启动子,序列分析表明,扩增片段(2 746 bp)与已报道的该基因序列相应区域的同源性达99.2%。将rbcS启动子与GUS报告基因融合构建了由rbcS启动... 为将高效特异的启动子用于转基因水稻研究,利用PCR技术从水稻‘中花11’基因组DNA中克隆了rbcS启动子,序列分析表明,扩增片段(2 746 bp)与已报道的该基因序列相应区域的同源性达99.2%。将rbcS启动子与GUS报告基因融合构建了由rbcS启动子引导GUS基因的植物表达载体,经农杆菌介导法导入到水稻中。对转基因水稻植株中GU S活性的定性与定量测定结果表明,rbcS启动子可驱动GUS报告基因在转基因水稻植株叶片中的特异性表达,其表达水平高于C aMV 35S组成型启动子,而在转基因水稻植株根和种子等器官中不表达或表达活性极弱,表现出明显的组织特异性。 展开更多
关键词 水稻rbcs启动子 转基因水稻 基因表达 GUS活性
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盐藻rbcS基因克隆及其原核表达(英文) 被引量:3
11
作者 柴玉荣 王亚锋 +4 位作者 王天云 侯卫红 王宁 王建民 薛乐勋 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期818-821,共4页
1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Ribulose1,5-bisphosphatecarboxylase/oxygenase,E.C.4.1.1.39简称RuBisCO)是光合作用中的关键酶,作者应用RT-PCR技术从一种极其耐盐的生物—杜氏盐藻的总RNA中克隆RuBisCO的小亚基(rbcS)的cDNA,它的开... 1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Ribulose1,5-bisphosphatecarboxylase/oxygenase,E.C.4.1.1.39简称RuBisCO)是光合作用中的关键酶,作者应用RT-PCR技术从一种极其耐盐的生物—杜氏盐藻的总RNA中克隆RuBisCO的小亚基(rbcS)的cDNA,它的开放读码框为570bp,编码190个氨基酸.将此cDNA定向克隆于原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组质粒pET-rbcS,经IPTG诱导,在大肠杆菌株BL21中表达.SDS-PAGE电泳表明,rbcS融合蛋白分子量约为26kDa. 展开更多
关键词 盐藻 1 5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶 rbcs 原核表达
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野生大豆rbcS基因的克隆及结构分析 被引量:5
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作者 曹凯鸣 袁卫明 +2 位作者 詹树萱 顾其敏 徐豹 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1996年第9期753-756,共4页
About 1 kb fragment of rbcS (ribulose 1,5 bisphosphate carboxylase small subunit) gene in wild soybean (Glycine soja, Ji 50017) was amplified from total DNA by PCR assay. Sequence analysis of the fragment indicated th... About 1 kb fragment of rbcS (ribulose 1,5 bisphosphate carboxylase small subunit) gene in wild soybean (Glycine soja, Ji 50017) was amplified from total DNA by PCR assay. Sequence analysis of the fragment indicated that 1089 bp sequenced included the whole coding region for Rubisco small subunit. The rbcS gene in wild soybean encoded a precursor composed of a transit peptide of 55 amino acids and a mature protein of 123 amino acids. There were two introns found in the rbcS gene as other dicotyledonous species previously sequenced.Comparison of DNA sequences showed high degree homology of rbcS genes between wild soybean and cultivated soybean (Glycine max var. wayne). Some changes of amino acids emerged from the diverse nucleotides did not affect the function of the small subunit. These results may contribute some basic data in molecular biology to study the origin and evolution of soybean. 展开更多
关键词 大豆 野生大豆 rbcs基因 克隆 结构分析
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rbcS启动子的克隆及活性鉴定 被引量:4
13
作者 王旺田 张金文 +1 位作者 刘玲玲 陈正华 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第3期255-260,共6页
利用PCR技术从豌豆(Pisum satium Linn)基因组DNA中分离了rbcS基因启动子及叶绿体定位信号编码序列。序列分析表明,扩增片段(1256bp)与已报道序列的相应区域同源性达98.41 %。将其与绿色荧光蛋白基因(GFP)串连在一起,构建了植物表达载体... 利用PCR技术从豌豆(Pisum satium Linn)基因组DNA中分离了rbcS基因启动子及叶绿体定位信号编码序列。序列分析表明,扩增片段(1256bp)与已报道序列的相应区域同源性达98.41 %。将其与绿色荧光蛋白基因(GFP)串连在一起,构建了植物表达载体,通过基因枪介导法转化烟草叶片及洋葱表皮细胞。结果表明这一表达系统增强了绿色荧光蛋白基因的瞬时表达,从而为外源基因在转基因植物中的高效表达提供了新的工具,可以实现目的基因的组织特异性和光诱导性表达。 展开更多
关键词 rbcs 基因启动子 绿色荧光蛋白基因 植物表达载体 活性鉴定
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杜氏盐藻RbcS基因cDNA片段的克隆和序列分析 被引量:2
14
作者 柴玉荣 陈华艳 +4 位作者 王天云 侯卫红 袁保梅 王建民 薛乐勋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第2期248-250,共3页
目的:克隆杜氏盐藻1,5 -二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)小亚基RbcScDNA片段。方法:根据 莱茵衣藻、团藻、玉米等真核生物的RuBisCO小亚基RbcS氨基酸的高度保守序列ETRSYLPP和MNKLPMFG,设计 一对简并引物,采用RT PCR方法及该简... 目的:克隆杜氏盐藻1,5 -二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)小亚基RbcScDNA片段。方法:根据 莱茵衣藻、团藻、玉米等真核生物的RuBisCO小亚基RbcS氨基酸的高度保守序列ETRSYLPP和MNKLPMFG,设计 一对简并引物,采用RT PCR方法及该简并引物克隆杜氏盐藻RbcScDNA。PCR产物经T A克隆与T vector相连, 转化大肠杆菌JM109,随机挑取数个菌落,筛选鉴定,对阳性克隆进行测序分析。将测序结果推导成氨基酸序列进 行同源性比较。结果:得到的cDNA长度为209bp,编码69个氨基酸。推导的氨基酸序列与团藻、Chloromonassp. ANT3、衣藻、伞藻、菠菜、玉米的RbcS相比较,同源性分别为85%、84%、82%、76%、70%、69%。结论:所克隆的序 列为杜氏盐藻RbcScDNA片段。 展开更多
关键词 杜氏盐藻 1 5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶 rbcs 简并引物
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胞外钙调素对转基因烟草rbcs基因表达的调控 被引量:2
15
作者 周君莉 崔素娟 +2 位作者 郭毅 马力耕 孙大业 《河北师范大学学报(自然科学版)》 CAS 1997年第3期309-310,313,共3页
胞外钙调素对转基因烟草rbcs基因表达的调控(快报)周君莉崔素娟郭毅马力耕孙大业(河北师范大学生物系,050016,石家庄;第一作者24岁,女,研究生)关键词细胞外钙调素;rbcs;基因表达;转基因烟草分类号Q942... 胞外钙调素对转基因烟草rbcs基因表达的调控(快报)周君莉崔素娟郭毅马力耕孙大业(河北师范大学生物系,050016,石家庄;第一作者24岁,女,研究生)关键词细胞外钙调素;rbcs;基因表达;转基因烟草分类号Q942二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rub... 展开更多
关键词 细胞外钙调素 因素表达 转基因烟草 rbcs基因
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天山雪莲rbcS基因启动子的克隆及序列分析 被引量:2
16
作者 张亚敏 杨晶 +1 位作者 王爱英 祝建波 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期146-152,共7页
以天山雪莲(S.involucrata Kar.et Kir.)为材料,根据已获得的天山雪莲1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基基因组序列设计引物,采用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)和高效TAIL-PCR(hiTAIL-PCR)扩增到rbcS基因5′上游启动子序列,长为1 668bp。... 以天山雪莲(S.involucrata Kar.et Kir.)为材料,根据已获得的天山雪莲1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基基因组序列设计引物,采用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)和高效TAIL-PCR(hiTAIL-PCR)扩增到rbcS基因5′上游启动子序列,长为1 668bp。用PlantCare和PLACE软件序列分析表明,该序列具有启动子的基本元件TATA-box、CA AT-box,包含多个胁迫诱导元件,如光诱导元件、赤霉素、低温诱导元件,昼夜节律调控元件等。构建pBI-PsikrbcS-GUS植物表达载体,并成功将其转化进入农杆菌。sikrbcS基因启动子的克隆与分析为进一步研究雪莲1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基基因的表达调控奠定了基础。 展开更多
关键词 天山雪莲 rbcs 热不对称交错PCR 高效TAIL-PCR 启动子 序列分析
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基于RBCS模型的公共政策风险对策系统 被引量:5
17
作者 陈伟珂 王亦虹 《中国软科学》 CSSCI 北大核心 2004年第1期142-146,共5页
本文从公共政策制定和组织实施的主体的角度,针对公共政策制定和实施过程的风险特征,设计相应的风险分析和处理方案。对公共政策风险处置利用RBCS(风险分解与控制系统)模型建立从工作程序、规章制度和应急处理等方面的风险对策系统。
关键词 公共政策 风险估测 风险对策 rbcs模型
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重组的马铃薯X病毒载体诱导烟草rbcS基因沉默 被引量:1
18
作者 周晓馥 朱筱娟 +2 位作者 刘文波 王仁厚 王兴智 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第2期197-201,共5页
用重组马铃薯病毒X (potatovirusX ,PVX)载体侵染烟草植株 (Nicotianabenthamiana) ,该载体带有与RubisCO小亚基 (ribulosebisphosphatecarboxylasesmallsubunit ,rbcS)基因同源的 5 0 0个核苷酸的cDNA片段。 2~ 3周后 ,烟草植株出现... 用重组马铃薯病毒X (potatovirusX ,PVX)载体侵染烟草植株 (Nicotianabenthamiana) ,该载体带有与RubisCO小亚基 (ribulosebisphosphatecarboxylasesmallsubunit ,rbcS)基因同源的 5 0 0个核苷酸的cDNA片段。 2~ 3周后 ,烟草植株出现退绿的rbcS基因沉默的明显症状。利用烟草叶片总RNA ,进行Northern杂交检测内源rbcS的表达和病毒复制的情况表明 ,受病毒侵染的植株内源rbcS基因的表达受到了明显的抑制 ,而病毒的复制并没有受到影响 ,重组的病毒载体上与内源基因同源的核苷酸序列诱导了内源rbcS基因的沉默。 展开更多
关键词 重组马铃薯X病毒 烟草 rbcs基因 病毒诱导基因沉默 RNA沉默 RubisCO酶 光合作用
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病毒载体诱导转录后基因沉默系统的建立及烟草(Nicotiana bentha miana)rbcs基因功能的研究 被引量:3
19
作者 周晓馥 王兴智 《分子植物育种》 CAS CSCD 2003年第3期423-424,共2页
RNA沉默是一种序列特异性的RNA降解过程 ,主要作用于同源性较高的转录产物 ,它广泛存在于各种生物中 ,在植物中称转录后基因沉默 (Post TranscriptionalGeneSilencing ,PTGS)、动物中称为RNA干扰(RNAinterference ,RNAi)、真菌中被称为... RNA沉默是一种序列特异性的RNA降解过程 ,主要作用于同源性较高的转录产物 ,它广泛存在于各种生物中 ,在植物中称转录后基因沉默 (Post TranscriptionalGeneSilencing ,PTGS)、动物中称为RNA干扰(RNAinterference ,RNAi)、真菌中被称为RNA压制 (RNAquelling)。病毒诱导转录后基因沉默是由携带基因片段的病毒载体感染植物引起相应的寄主基因沉默的现象 ,是一种典型的RNA沉默现象。本论文建立了病毒载体诱导转录后基因沉默系统 ,并运用该体系研究烟草 (Nicotianabenthamiana)的 1,5二磷酸核酮糖羧化酶 /加氧酶小亚基 (Ribulose - 1,5 -bisphosphate (RuBP)carboxylase/oxylasesmallsubunit,rbcS)基因的部分功能。具体包括以下内容 :1、分别用携带与 1,5二磷酸核酮糖羧化酶 /加氧酶小亚基 (rbcS)基因同源的cDNA片段的烟草脆裂病毒载体 (pTV rbcS)和马铃薯X病毒载体 (pgR10 7 rbcS)侵染烟草 (Nico tianabenthamiana) ,诱导内源rbcS基因沉默 ;2、分别用携带与八氢番茄红素脱氢酶 (phytoenedesat urase ,PDS)基因同源的cDNA片段的烟草脆裂病毒载体 (pTV PDS)和马铃薯X病毒载体 (pgR10 7 PDS)侵染烟草 (Nicotianabenthamiana) ,诱导内源PDS基因沉默 ;3、利用携带与绿色荧光蛋白 (GFP)同源的cDNA片段的烟草脆裂? 展开更多
关键词 RNA沉默 转录后基因沉默 病毒诱导 核酮糖1 5二磷酸羧化酶/加氧酶小亚基 rbcs基因 烟草脆裂病毒载体
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浮萍中一个新rbcS基因启动子的克隆及分析 被引量:5
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作者 王友如 《分子植物育种》 CAS CSCD 2010年第1期41-44,共4页
为了分离组织特异性、诱导性的启动子,本研究根据新克隆的浮萍rbcS基因序列设计引物,采用改进的5'walking技术从浮萍基因组中克隆了一个新的rbcS基因启动子,命名为SSU5C基因启动子。序列分析表明:SSU5C基因启动子长度为1543bp,含有... 为了分离组织特异性、诱导性的启动子,本研究根据新克隆的浮萍rbcS基因序列设计引物,采用改进的5'walking技术从浮萍基因组中克隆了一个新的rbcS基因启动子,命名为SSU5C基因启动子。序列分析表明:SSU5C基因启动子长度为1543bp,含有保守性元件TATA和CAATbox,并且含有水杨酸、脱落酸、赤霉素、茉莉酸甲酯等植物激素和葡萄糖等的保守顺式作用元件。Insilico分析初步推测SSU5C基因启动子受多种信号途径的协调调控。 展开更多
关键词 浮萍(Lemna gibba) rbcs基因 启动子 克隆
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