天津沿岸海水中创伤弧菌的PCR检测和定量

采用普通PCR方法和SYBRGreen实时定量PCR方法，根据刨伤弧菌16SrDNA和23SrDNA基因间隔序列（internal transcribed spacer，ITS）设计引物，对渤海湾天津沿岸海水中的创伤弧菌进行了定性和定量检测。8个样品采集白天津市汉沽区沿岸海水，采集时间分别为2008年7月、10月和2009年3月、5月。PCR检测结果表明，这些样品都能扩增出276hp的ITS序列，这些序列和GenBank上的同源序列（DQ462478）的相似性为96％一98％。用SYBRGreen实时定量PCR方法测定了8个海水样品，样品中创伤弧菌的浓度为7．12×10^3-8．40×10^5个／L，表明天津沿岸海水存在严重的创伤弧菌污染。

肉牛黄体期和卵泡期阴道菌群结构的比较研究

为了研究生殖激素对阴道菌群的影响,选取7头健康肉牛,分别采集黄体期和卵泡期阴道分泌物,提取细菌总DNA,根据DGGE克隆测序结果,选择5种特异性细菌,利用荧光定量PCR技术检测各细菌数量。结果表明,总菌、大肠杆菌、鞘氨醇单胞菌和睡眠嗜血杆菌菌群数量在两组间无显著差异(P>0.05),但黄体期链球菌属数量显著高于卵泡期(P<0.01),卵泡期乳杆菌属数量显著高于黄体期(P<0.05)。结果提示,肉牛黄体期与卵泡期的阴道菌群结构存在显著差异。

一种新的T细胞相关分子IBP表达水平定量检测方法的建立

目的建立一种定量检测IBP表达水平的方法,为研究IBP在免疫细胞分化以及在免疫性疾病当中的作用奠定基础。方法利用反转录PCR和PCR技术获得目的基因和内参基因片段,构建重组质粒,以重组质粒为标准品,建立实时PCR标准曲线;测定外周血白细胞IBP和β-actin表达水平。以β-actin为内参照,均一化检测结果。结果重组质粒的阳性克隆经PCR扩增,0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定,目的基因片段插入载体内;建立起实时PCR标准曲线。检测20例正常人全血标本,得到比较稳定的检测结果。结论成功建立了用实时PCR定量检测IBPmRNA表达水平方法,为进一步研究IBP奠定了基础。

miR-21在白血病发病过程中的作用研究

目的本实验旨在研究miR-21在白血病细胞中表达情况,探讨miR-21基因与白血病发病的关系。方法提取组织中的小于200 bp的RNA,用poly(A)聚合酶在其3′末端加尾,再用5′带40 nt延伸序列的单碱基锚定Olig-dT引物进行反转录,然后用特异引物进行real-time PCR扩增,从而检测部分miRNAs在白血病细胞株K562中的表达,并与正常人骨髓表达情况相对比。结果通过real-time PCR分析,癌基因miR-21在K562细胞中的表达量约为(1.73±0.24)×105个拷贝,明显高于正常人骨髓组织中miR-21的表达(P<0.01)。结论本研究表明miR-21在K562细胞中的表达量增高,可能在白血病的发生过程中起重要作用。

ALK基因在肺腺癌中的临床病理特征及其与患者预后的相关性研究

目的:探讨肺腺癌患者中间变性淋巴瘤激酶(ALK)基因的表达及其与患者预后的相关性。方法:用常规免疫组织化学法(IHC)及实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测256例经石蜡包埋的肺腺癌标本的ALK基因表达情况,分析比较阳性组与阴性组患者在临床病理特征及预后的差异性。结果:ALK基因表达率在≤60岁组患者中表达率较>60岁组高(χ2=6.117,P<0.05);在不吸烟组患者中表达率较吸烟组患者高(χ2=12.124,P<0.05);而与性别无相关性(χ2=2.950,P>0.05),与TNM分期无相关性(χ2=3.563,P>0.05),与淋巴结转移亦无相关性(χ2=0.737,P>0.05)。ALK基因阳性组患者3年生存率低于阴性组(43.5%VS 71.6%,χ2=7.552,P<0.05)。经KaplanMeier生存分析显示,ALK基因阳性组患者总生存期(OS)低于阴性组。阳性组患者中位生存期同样低于阴性组(33.5个月VS 49.1个月,P<0.05)。结论:ALK基因在年轻、无吸烟史的肺腺癌患者中的表达率较高;ALK基因阳性可能是影响肺腺癌患者预后不良的独立危险因素之一。

被动游泳运动对小鼠抑郁样行为及其肠道菌群组成的影响

被动游泳运动可诱发小鼠抑郁样行为,游泳环境的改变已成为抑郁样行为严重程度影响因素之一。观察不同水质、水温及持续时间对被动游泳小鼠抑郁样行为的影响,并初步探讨肠道菌群组成与抑郁样行为的关系。通过不同条件下的被动游泳运动建立抑郁样行为小鼠模型。采用糖水偏好实验及强迫游泳实验评价其行为学变化;采用16S rDNA高通量测序技术及实时荧光定量PCR技术对小鼠肠道菌群进行分子生态学分析。被动游泳16周后,各模型组小鼠体质量及糖水偏爱度均较正常对照组降低,而不动时间则有所延长。其中,室温海水游泳15 min小鼠体质量及糖水偏爱度降低程度最大,不动时间最长,与正常对照组比较,均具有显著性差异(P<0.05)。各模型组小鼠肠道菌群Chao指数、Shannon指数及PCoA分析均较正常对照组具有显著性差异(P<0.05),其从门水平到属水平的丰度也发生不同程度改变。其中,室温海水游泳15 min小鼠肠道菌群组成变化程度最大,并发生拟杆菌属、普氏菌属等多个菌属的富集以及乳杆菌属丰度的减少,实时荧光定量PCR实验也得到了较为一致的结果(P<0.05)。以上结果表明,被动游泳运动可导致小鼠抑郁样行为的发生,其肠道菌群组成也发生明显改变;同时,菌群组成的改变会随着抑郁样行为的严重程度而有所变化。