基于多层酶/纳米金固定甲胎蛋白免疫传感器的研究

利用自组装技术和静电吸附作用,将甲胎蛋白抗体(anti-AFP)固定在多层辣根过氧化物酶/纳米金及L-半胱胺酸修饰的金电极表面,制备出用于检测甲胎蛋白抗原(AFP)的无试剂型免疫传感器.通过交流阻抗技术、循环伏安法和计时电流法考察了电极的电化学特性,并对该免疫传感器的作用机理及性能进行了详细的研究.用计时电流法测得AFP的线性范围为1.0～10.0和10～200ng?mL-1,检出限为0.5ng?mL-1.实验结果表明,该方法提高了抗体的固定量,增强了传感器的灵敏度和稳定性,且该传感器响应迅速、选择性好,血清中常见抗原不干扰测定.将其用于临床血清检验,与放射免疫测定法(RIA)的符合率为86.7%.

基于抗体包被纳米金和铜配合物共固定修饰电极的癌胚抗原安培免疫传感器研究

研制了基于抗体包被化学镀纳米金（AuNPs）和[Cu（bpy）2（ONO）]NO3配合物（CuL）共固定修饰玻碳电极（GCE）的安培免疫传感器,并用于血清中癌胚抗原（CEA）的检测。首先将GCE电极表面氧化形成羧基,进而键合上乙二胺。将此胺化电极浸泡在CuL和化学镀金溶液后,CuL可通过π-π堆积作用吸附到GCE表面,并在电极表面还原成30~50nm的纳米金层（GCE｜CuL/AuNPs）。将上述电极浸泡在CEA抗体（anti CEA）溶液中,利用AuNPs固定anti CEA,并通过辣根过氧化物酶（HRP）封闭剩余的AuNPs位点,由此构建了一类快速检测CEA的无试剂安培免疫传感器（GCE｜CuL-AuNPs/anti CEA-HRP）。其中CuL作为电子媒介体对过氧化脲（CP）有催化还原作用,而且HRP可增强这种作用。当该传感器在37℃下,含CEA的pH6.5PBS溶液中温育30min后,随着温育液中CEA浓度的增加,电极表面形成的免疫复合物也增加,导致CuL对CP的催化电流下降。电流下降百分比1%与CEA浓度在0.1~80ng/mL之间成线性关系,检测限为0.052ng/mL（3σ）。由于采用化学镀法可以方便地在GCE表面制备纳米金膜进而包被抗体,并通过π-π堆积作用吸附CuL作为电子媒介体,故该免疫电极制备简单;采用可催化CP还原的HRP封闭AuNPs层多余位点,大大提高了电极灵敏度,有望用血清中痕量CEA分析。

基于包被包膜糖蛋白抗体纳米金磁性微粒的无试剂安培免疫传感器

在玻碳电极(GCE)表面固定对H2O2有催化还原活性的富马酸二甲酯联吡啶铜(GCE|CuL);再在GCE|CuL表面修饰一层金磁微粒-壳聚糖复合膜(nanoAu/Fe3O4/Chit),进而固定艾滋病毒(HIV)诊断标志物——包膜糖蛋白(gp160)抗体(antigp160),由此构建了一类快速检测gp160的无试剂安培免疫传感器。当该传感器在含gp160溶液中37℃下温育30min后,传感器表面生成的免疫复合物随gp160浓度的增大而增加,导致CuL对H2O2电催化还原效果降低,催化电流呈现下降趋势。在PBS溶液(pH7.0)和-300mV下,催化电流的降低值ΔIo与gp160浓度在1～400μg/L呈线性关系;检出限为0.5μg/L(3σ)。研制的免疫传感器检测gp160时,一步免疫反应即可得结果,较相同条件下包被gp160抗体的纳米金单分子层修饰电极灵敏度更高,检测范围更宽,有望用于艾滋病人血清标志物gp160快速筛测。