靶向于TNF-α和RANKL的人源化抗体对DBA/1小鼠单关节炎的保护作用

目的制备同时拮抗肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和核因子κB受体活化因子配体(re-ceptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的人源化单克隆抗体(h8G12),通过单关节炎小鼠模型,评估h8G12在抑制TNF-α引起的炎症反应和拮抗RANKL引起的骨破坏中的保护作用。方法培养稳定表达h8G12的CHO细胞株,观察细胞生长状态,用间接ELISA检测细胞培养上清中h8G12的表达水平。纯化的h8G12经SDS-PAGE、West-ern blot分析及鉴定,用间接ELISA观察其亲和力。通过向DBA/1小鼠膝关节腔注射人TNF-α重组蛋白和人RANKL重组蛋白,建立单关节炎小鼠模型。用组织学评估观察不同给药方案[阴性对照组、阳性对照组、阿达木单抗(adalimumab,ADA)组和h8G12组]对小鼠单关节炎引起的炎症浸润、软骨侵蚀、膝关节腔内破骨细胞分化的保护作用。结果 CHO细胞株培养96 h时细胞生长状态良好,可稳定分泌h8G12;纯化的h8G12纯度可达90%,Western blot可见特异性条带,且可与rh TNF-α和rh RANKL结合。在单关节炎小鼠模型中,苏木精-伊红染色显示,h8G12组关节腔、周围软组织及骨髓腔内炎性细胞浸润明显少于阳性对照组,炎症评分降低了50%,治疗效果与ADA相似。甲苯胺蓝染色显示,h8G12组病理评分出现显著下降,h8G12治疗后小鼠关节结构相对完好,关节软骨厚度接近正常水平。抗酒石酸酸性磷酸酶染色显示,h8G12组关节腔内破骨细胞明显减少。结论 h8G12可有效抑制TNF-α引起的炎症反应和拮抗RANKL引起的骨破坏,为类风湿关节炎的治疗提供了新方法。

补肾通络方抑制NF-κB/RANK/RANKL通路减轻胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠骨破坏

目的探讨补肾通络方(BSTL)对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠模型骨破坏的改善作用以及对核因子κB/核因子κB受体激活蛋白/核因子κB受体激活蛋白配体(NF-κB/RANK/RANKL)信号通路的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、CIA模型组、1 mg/kg甲氨喋呤(MTX)处理组、(0.5、2)g/kgBSTL处理组,每组10只。除空白对照组外,其余大鼠采用含有卡介苗的完全Freund佐剂和牛Ⅱ型胶原蛋白(Col2)混合乳液免疫刺激,建立CIA模型。建模15 d后(第0天)根据关节炎指数(AI)评价造模是否成功。自第0天起,连续给予MTX或BSTL处理28 d,免疫组织化学染色法检测滑膜组织NF-κB p65的表达,ELISA检测大鼠血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、抗总Col2抗体及亚型(Col2-IgG、Col2-IgG1、Col2-IgG2a)水平,Western blot法检测滑膜组织RANKL、RANK、护骨因子(OPG)蛋白表达。结果与CIA模型组相比,2 g/kg BSTL处理28 d的大鼠足容积、AI值降低,血清IL-1β、IL-18、TNF-α、Col2-IgG、Col2-IgG2a以及RANK和RANKL水平均降低,OPG水平升高;大鼠滑膜组织中NF-κB p65、RANK和RANKL蛋白表达均降低,OPG蛋白表达增加。结论BSTL可通过抑制全身炎症反应,降低滑膜组织中NF-κB p65、RANK、RANKL蛋白的表达,上调OPG蛋白表达,缓解CIA模型大鼠关节炎症和肿胀。

桂枝芍药知母汤对免疫性关节炎大鼠TNF-α与RANKL表达的影响

目的:观察桂枝芍药知母汤对免疫性关节炎大鼠血清中TNF-α与关节滑膜组织RANKL表达的影响,并初步探讨其治疗机制。方法:以弗氏完全佐剂诱导产生免疫性关节炎模型,用不同剂量桂枝芍药知母汤(GSZ汤20.6 g/kg、10.3 g/kg)给模型动物灌胃用药,观察用药后动物血清TNF-α水平与致炎对侧膝关节滑膜组织RANKL表达。结果:桂枝芍药知母汤用药4周后,可明显增加模型大鼠体重增长速度,减轻关节肿胀程度(P<0.05 orP<0.01);使模型大鼠血清TNF-α水平降低(P<0.01)以及滑膜组织RANKL表达下降(P<0.01),本实验条件下,GSZ汤20.6g/kg剂量时的疗效与MTX相当。结论:桂枝芍药知母汤对免疫性关节炎大鼠有治疗作用,其机制可能与抑制TNF-α分泌,降低RANKL表达有关。

趋化因子CXCL13对TNF-α诱导的人骨关节滑膜细胞RANKL表达的影响

目的探讨趋化因子CXCL13对TNF-α诱导的人骨关节滑膜细胞调控细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。方法 (1)体外培养人骨关节滑膜细胞,并给予10μg/m L TNF-α处理,分别在培养0、6、12、24 h时采用免疫荧光法检测CXCL13表达。(2)人滑膜细胞给予10μg/m L TNF-α处理24 h,将培养液更换为含0、5、10、25 ng/m L CXCL13的培养液继续培养24 h,或将培养液更换为含25 ng/m L CXCL13的培养液分别作用0、1、3、6、24 h;以不加TNF-α及CXCL13处理的常规培养细胞作为对照细胞。收集各浓度、各时间点细胞,采用Western blotting法检测RANKL蛋白相对表达量。结果 (1)TNF-α作用0、6、12、24 h时细胞CXCL13相对表达量(荧光强度)分别为0.907±0.350、0.823±0.730、0.710±0.660、0.653±0.850,组间比较P均<0.05。(2)对照细胞RANKL蛋白相对表达量为0.956±0.014,25 ng/m L CXCL13处理0、1、3、6、24 h时RANKL蛋白相对表达量分别为1.543±0.047、1.366±0.026、0.883±0.026、0.367±0.034、0.246±0.015;0、5、10、25 ng/m L CXCL13作用24 h时RANKL蛋白相对表达量分别为0.287±0.007、0.189±0.008、0.069±0.004、0.022±0.002;上述各组、各时间及各浓度细胞比较P均<0.05。结论趋化因子CXCL13能够在一定浓度和时间内抑制TNF-α诱导的人骨关节滑膜细胞RANKL蛋白表达。

参芪调肾方通过OPG/RANKL/NF-κB/MMP-9通路抑制慢阻肺炎症介导的骨吸收

目的:研究参芪调肾方对香烟烟雾(CS)暴露法建立的慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠的炎症抑制、肺组织病理及骨组织内破骨细胞介导的骨吸收的改善作用机制。方法:将40只小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、参芪调肾方8.53、17.06、34.11 g/kg组,每组8只,除正常对照组外,其余4组采用CS暴露法造模24 w,第12 w-24 w各组灌胃给予相应药物或生理盐水,连续12 w;ELISA法检测肺组织、外周血、骨组织内炎症因子白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;HE染色观察肺组织病理学改变;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察骨组织内破骨细胞;免疫组化法观察骨组织内骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、核因子κB p65(NF-κB p65)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白在小鼠胫骨组织中的定位表达;Western blot法检测肺组织NF-κB p65、p-NF-κB p65、MMP-9及胫骨OPG、RANKL、NF-κB p65、p-NF-κB p65、MMP-9、组织蛋白酶K(CTSK)蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组肺组织损伤明显,管腔内、管壁及周围见大量炎症细胞聚集;肺组织、外周血及骨组织内炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著升高(P<0.01);骨组织内破骨细胞数量、RANKL、NF-κB p65、MMP-9、CTSK、TRAP蛋白表达显著升高(P<0.01),OPG蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型对照组比较,参芪调肾方各剂量组可不同程度改善小鼠支气管壁增厚、肺气肿形成等病理改变,减轻炎性细胞浸润,参芪调肾方34.11 g/kg组可显著下调肺组织内NF-κB p65、p-NF-κB p65、MMP-9蛋白表达(P<0.01)、降低炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量(P<0.01);明显降低骨组织内破骨细胞数量以及下调RANKL、NF-κB p65、p-NF-κB p65、MMP-9、CTSK、TRAP蛋白表达(P<0.05或P<0.01),显著升高OPG蛋白阳性表达(P<0.01)。结论:参芪调肾方对COPD模型小鼠合并骨质疏松(OP)有一定防治作用,可能是通过调控OPG/RANKL/NF-κB/MMP-9信号通路,改善COPD模型小鼠肺组织病理,降低肺、外周血、骨组织炎症反应,抑制破骨细胞过度活化。

Er,Cr:YSGG激光治疗对高糖环境下微螺钉周围炎症及对RANK/RANKL信号通路的影响

目的:探讨铒铬铱钪镓石榴石(Er,Cr:YSGG)激光治疗对高糖环境下微螺钉周围炎症治疗的疗效,并分析与RANK/RANKL信号通路的关系。方法:20只正常健康雄性新西兰兔随机分为A组(微螺钉周健康组)、B组(微螺钉周围炎症组)、C组(微螺钉周围炎症激光治疗组),皮下注射2%四氧嘧啶建立糖尿病模型,下颌双侧无牙区植入微螺钉种植体,3个月后,A组进行菌斑控制,B组、C组用丝线拴结于微螺钉种植体颈部基台处引入炎症,C组予以Er,Cr:YSGG激光治疗。记录菌斑指数、探诊深度、牙龈指数和龈沟液量;ELISA检测龈沟液炎性细胞白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;CBCT检查微螺钉种植体周围炎周围骨吸收状态;Western blot检测牙龈组织中核因子κB(NF-κB)/NF-κB受体性活化因子(RANK)/NF-κB受体活化因子配体(RANKL)通路相关蛋白表达。结果:CBCT检查显示与A组比较,B组微螺钉种植体周围牙槽骨有明显的炎性吸收,微螺钉种植体-骨界面愈合差,骨附着不足;与B组比较,C组一侧牙槽骨有少量新生纤维成骨。与A组比较,B组PI、PD、GI水平较高,龈沟液量较多,龈沟液中IL-1β、TNF-α和IL-6水平较高,牙龈中NF-κBp65、RANK、RANKL蛋白表达水平较高(P<0.05);与B组比较,C组PI、PD、GI水平较低,龈沟液量较少,龈沟液中IL-1β、TNF-α和IL-6水平较低,牙龈中NF-κBp65、RANK、RANKL蛋白表达水平较低(P<0.05)。结论:Er,Cr:YSGG激光治疗糖尿病兔颌骨微螺钉种植体周围炎的疗效显著,且在NF-κB/RANK/RANKL通路表达调控上可能发挥一定作用。

补骨脂素对成骨细胞核因子-κB受体激活配体和骨保护素表达的影响

目的研究补骨脂素(psoralen,PSO)对体外培养的小鼠成骨细胞(OB)分化及核因子-κB受体激活配体(receptor activator of nuclearfactor-κB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法取第1代BALB/c小鼠颅盖骨成骨细胞,将PSO以0.1、1、10μmol/L3种浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,MTT法观察各组药物对成骨细胞的增殖作用并绘制细胞生长曲线;用PNPP法测定成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;RT-PCR法检测成骨细胞OPG和RANKL的转录水平。结果细胞生长曲线显示各组成骨细胞数量均随时间延长而增加,中、高浓度PSO能显著提高成骨细胞的ALP活性,促进OPG、RANKL的表达(P<0.05),OPG/RANKL升高(P<0.05)。结论低浓度PSO(0.1μmol/L)对骨更新作用不明显,而中、高浓度PSO(1、10μmol/L)能通过上调OPG、RANKL mRNA表达及OPG/RANKL比例,促进成骨细胞的生成功能,增强骨更新。

巴戟天含药血清对成骨-破骨细胞共育体系OPGmRNA、RANKLmRNA表达的影响

目的探讨不同浓度巴戟天含药血清对体外成骨-破骨细胞共育体系OPG、RANKLmRNA表达的影响方法取健康5周龄SD大鼠12只,体重165-172 g。随机分4组,分别予生理盐水及低中高三种浓度巴戟天溶液灌胃,分离血清。取健康5周龄SD大鼠6只,体重165-172 g,取四肢长骨骨髓基质细胞,诱导培养破骨细胞;用24 h内新生SD乳鼠4只,体重5~6 g,头盖骨分离体外培养成骨细胞。将成骨细胞加入含有培养5 d的破骨细胞中,共育2 d后分别改用不同浓度巴戟天含药血清与不含药血清的培养基培养,设低、中、高浓度组及对照组,培养3d后提取各组总RNA,应用RT-PCR检测各组OPGmRNA、RANKLmRNA表达。结果 RT-PCR结果示,中、高浓度组RANKLmRNA表达量均低于对照组（P〈0.05）,而OPGmRNA表达量显著高于对照组（P〈0.001）。结论巴戟天含药血清可上调共育体系中OPGmRNA表达,并下调RANKLmRNA表达,从而降低破骨细胞分化成熟及骨吸收活性。

B淋巴细胞对牙周致病菌免疫反应及骨细收因子RANKL表达的影响

目的:通过评价B淋巴细胞与牙周致病菌——伴放线放线杆菌(Aa)发生免疫反应过程中核因子-КB受体活化配体(RANKL)的表达,探讨B淋巴细胞是否参与Aa引起的牙周骨吸收。方法:采用RT-PCR方法测定大鼠脾细胞中第1和7d细胞因子的mRNA转录水平,采用流式细胞技术测定大鼠脾细胞中B细胞表达RANKL IgG阳性细胞的百分数,应用TRAP法评价B淋巴细胞对破骨细胞分化的诱导潜力。实验结果采用SPSS 10.0软件包进行分析。结果:在无Aa抗原刺激的条件下,大鼠脾细胞培养1d和7d的TNF-α及IL-4表达水平均升高,IL-10、RANKL的表达水平无明显变化;加入Aa组培养1d时,TNF-α的表达显著增加,7d后,IL-4、IL-10及RANKL的mRNA转录水平显著增加;B细胞的百分数以及表达RANKL的IgG阳性细胞百分数与不加Aa组相比显著增加;Aa免疫组加入Aa培养后,表达RANKL的IgG阳性细胞百分数增加显著高于非免疫组。Aa免疫组的B淋巴细胞与RAW 264.7细胞共同培养后,TRAP染色阳性细胞显著增加(P<0.01);加入人OPG-Fc培养,可显著抑制TRAP阳性细胞的形成(P<0.05)。结论:B淋巴细胞经特异性抗原Aa活化后,通过上调RANKL的表达,增加对破骨细胞分化的诱导潜力,参与牙周骨吸收。

流体剪切力对MC3T3-E1细胞OPG、RANKL蛋白表达的实验研究

目的探讨流体剪切力(fluid shear stress,FSS)作用下,两种调节骨骼重建的重要分子骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的蛋白表达情况。方法采用体外模型对MC3T3-E1细胞加载流体剪切力,细胞经不同时间加力后(0,30,60,90,120min),对细胞分别进行染色和裂解,运用免疫荧光和蛋白印迹法对OPG和RANKL的蛋白表达水平进行定量分析。结果 FSS作用30,60,90,120min后能够显著增加OPG的蛋白表达(P<0.05),减少RANKL的蛋白表达(P<0.05)。两者共同作用使得OPG/RANKL值显著增高(P<0.05)。结论流体剪切力刺激提示OPG/RANKL的比值可能在成骨细胞和破骨细胞联合调节骨骼形成和吸收的过程中起着重要的调节作用。

二膦酸盐对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞中OPG/RANKL表达的影响

目的研究二膦酸盐作用于人骨肉瘤细胞株MG-63细胞后,对细胞中成骨细胞护骨素(OPG)及细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。方法人骨肉瘤细胞株MG-63细胞培养、传代后分为:二膦酸盐10μmol/L组、二膦酸盐50μmol/L组和阴性对照组3组,保温72 h后,应用RT-PCR和Western blot检测干预后OPG和RANKL mRNA和蛋白水平的表达。结果二膦酸盐作用于人骨肉瘤细胞株MG-63细胞后,细胞中OPG mRNA和蛋白水平表达升高,RANKL mRNA及蛋白水平则降低(均P<0.05)。结论二膦酸盐可能通过调节人骨肉瘤细胞株MG-63细胞OPG/RANKL轴的表达,抑制骨肉瘤的溶骨性破坏,对治疗人骨肉瘤有潜在价值。

白细胞介素-10对人牙囊细胞RANKL表达的影响

目的:研究人牙囊细胞白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)蛋白的表达及其对破骨细胞分化因子(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)表达的影响。方法:采用组织块加胶原酶消化法培养人牙囊细胞,进行IL-10免疫组化染色。25ng/mlIL-10作用于牙囊细胞0、1、3、6 h,用RT-PCR检测RANKL mRNA表达的变化。结果:人牙囊细胞IL-10表达阳性。25ng/ml IL-10降低人牙囊细胞RANKL的表达,且具有时间依赖性。结论:人牙囊细胞表达IL-10,IL-10通过降低人牙囊细胞RANKL的表达,在牙齿萌出过程中起重要的调控作用。

辐射对RANKL诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化中CBFα1表达水平的影响

为了研究辐射对于破骨细胞中Notch通路的影响,进一步了解辐射诱发骨损伤的机理,本研究采用核因子κB受体活化因子配体(Receptor activator of nuclear Factor-B Ligand,RANKL)诱导RAW264.7细胞系生成的破骨细胞,经2 Gy 137Csγ射线照射后应用实时定量聚合酶链反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)方法,检测其Notch通路重要靶位启动子C结合因子α1(C Promoter-Binding Factorα1,CBFα1)表达的变化情况。实验结果表明,在2 Gy 137Csγ射线照射后,CBFα1在RANKL作用下生成的破骨细胞中表达明显增高。辐射诱发的Notch通路中CBFα1表达增高,可能是由于辐射增强了Notch通路对破骨细胞分化的促进作用,增加了破骨细胞的数量,增强了其活性,从而导致骨损伤、骨质疏松、甚至骨折的发病率增高。

补肾活血固齿方对牙周炎大鼠牙周膜OPG和RANKL影响的研究

目的观察补肾活血固齿方对牙周炎大鼠牙周组织及牙周膜骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响,探讨补肾活血固齿方治疗牙周炎的作用机制。方法将24只雄性SD大鼠随机分为空白组、牙周炎组、补肾活血固齿方组,每组8只。牙周炎组和补肾活血固齿方组大鼠采用牙周结扎联合喂食黏软食物和高糖水的方法建立牙周炎模型。造模成功后,补肾活血固齿方组给予补肾活血固齿方灌胃,空白组、牙周炎组给予等量生理盐水灌胃。连续灌胃4周后,切取各组大鼠上颌骨第一磨牙牙体牙周组织制作组织切片,HE染色观察牙周组织病理形态,免疫组化染色观察牙周膜组织中OPG和RANKL阳性表达情况。结果HE染色显示:空白组大鼠牙周组织结构比较完整,牙龈组织无明显炎症细胞浸润,结合上皮无根方移位,破骨细胞少见,无牙槽骨吸收;牙周炎组大鼠牙龈上皮内炎症细胞增多,毛细血管扩张,牙龈结合上皮向根方移位,形成牙周袋,破骨细胞增多,牙槽骨有吸收;与牙周炎组比较,补肾活血固齿方组大鼠炎症细胞浸润减少,牙龈结合上皮部分恢复,牙周袋变浅,牙槽骨边缘破骨细胞数减少,有成骨细胞产生。补肾活血固齿方组OPG平均光密度值明显高于空白组和牙周炎组(P均<0.05),牙周炎组RANKL平均光密度值明显高于空白组和补肾活血固齿方组(P均<0.05)。结论补肾活血固齿方可上调牙周炎大鼠牙周膜中OPG的表达,下调牙周膜中RANKL的表达,从而抑制旧骨吸收,促进新骨形成,有利于牙槽骨的重建。

RANKL-OPG在口腔中表达的研究进展

破骨细胞生成因子(RANKL)/骨保护素(OPG)系统是影响破骨细胞分化、发育、调节的重要信号通路,也是全身因子和局部因子调节骨代谢的共同通路[1]。在口腔医学领域中,RANKL/OPG系统也起到相当重要的作用,本文就RANKL/OPG系统在口腔中表达的研究进展作一综述。

基于“肾主骨”理论探讨金匮肾气丸调控AGEs/RANKL/NF-κB信号通路对糖尿病性骨质疏松症小鼠的影响

目的:基于“肾主骨”理论研究金匮肾气丸通过调控晚期糖基化终产物(AGEs)/核转录因子-κB(NF-κB)受体激活剂(RANKL)/NF-κB信号通路对糖尿病性骨质疏松症(DOP)小鼠的影响。方法:选取40只6周龄骨骼肌特异性胰岛素样生长因子-1受体功能缺失(MKR)小鼠,雌雄各半,高脂饲料喂养8周建立DOP模型,将造模成功的小鼠随机分成模型组、金匮肾气丸低、高剂量组(1.3、2.6 g·kg^(-1))和阿仑膦酸钠组(0.01 g·kg^(-1)),每组10只;另取10只同龄FVB/N小鼠为正常组。各给药组分别予以相应药物灌胃,每日1次,连续4周。给药结束后,各组小鼠行空腹血糖(FBG)检测和口服糖耐量实验(OGTT);检测小鼠肾功能和肾指数;采用苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察肾脏组织病理学变化;免疫组化检测小鼠肾脏组织AGEs、磷酸化核转录因子-κB(p-NF-κB)和RANKL蛋白表达水平;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾脏组织AGEs/RANKL/NF-κB信号通路相关蛋白和股骨组织中骨保护素(OPG)、Runt相关转录因子2(RUNX2)蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠FBG显著升高(P<0.01),骨小梁退变,骨形态参数指标异常,OGTT的曲线下面积(AUC)显著升高(P<0.01),肾脏体积增大,肾功能指标、肾指数显著升高(P<0.01),肾小球、肾小管结构紊乱,肾脏组织AGEs、RANKL表达和p-NF-κB/NF-κB值明显升高(P<0.05),股骨组织中OPG和RUNX2表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,金匮肾气丸各剂量组小鼠OGTT的AUC显著降低(P<0.01),组织病理分析显示,肾小球和肾小管的结构病变缓解,肾脏组织AGEs、RANKL的表达和p-NF-κB/NF-κB值明显降低(P<0.05,P<0.01),股骨组织中RUNX2和OPG表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:金匮肾气丸可通过改善肾功能,下调AGEs/RANKL/NF-κB信号通路抑制炎性反应,进而缓解DOP小鼠骨质疏松症状,起到从肾论治DOP的作用。

RANKL/RANK/OPG通路在口腔相关领域的应用研究

核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of Nuclear factor-kappa B Ligand,RANKL)、核因子-κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor-kappa B,RANK)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)作为肿瘤坏死因子家族的成员,通过RANKL/RANK/OPG信号通路调节破骨细胞发生及成熟,调控骨代谢,其表达水平直接影响骨质代谢与重塑,现被广泛研究。RANKL/RANK/OPG通路在口腔颌面部形成及改建过程中发挥了关键作用,直接或间接反映出口腔骨破坏类疾病的发生与发展状态。该通路的失衡往往伴随RANKL的增加和(或)OPG的减少,RANKL/OPG的比值影响破骨细胞的成熟及功能,但部分疾病中相关因子的表达水平存在争议,且尚无能应用于临床疾病诊疗的阈值。本文就RANKL/RANK/OPG信号通路调节机制及其在牙周炎、种植、牙齿发育、正畸、颌面部骨缺损修复与再生等口腔相关领域的研究现状进行综述,以进一步探讨口腔中骨代谢及骨破坏类疾病的调节机制,并评价相关因子作为生物标志物的诊断和预后潜力,以期指导临床诊疗及探寻可能的免疫调节靶点。

绝经后骨质疏松症TNF-α通过激活NF-κB促进RANKL诱导的破骨细胞形成

本研究检测了绝经后骨质疏松症妇女的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和雌激素水平,并探讨了TNF-α对破骨前体细胞RAW264.7中破骨细胞标志物核因子κB受体激活因子(nuclear factor kappa-B, RANK)、组织蛋白酶K (Cathepsin K, CTSK)和凝血酶受体激活肽(thrombin receptor activating peptide, TRAP)以及核因子-κB (NF-κB)亚基(p65)和NF-κB抑制蛋白(IκBα)的影响。研究结果表明,绝经后骨质疏松症患者的TNF-α水平显著升高,而雌二醇水平显著降低。核因子κB受体激活因子配体(receptor activator for NF-κBligand, RANKL)处理1周后,破骨前体细胞RAW264.7中破骨细胞标志物RANK、CTSK和TRAP的mRNA和蛋白高度表达。与RANKL对照组相比,TNF-α处理可上调RANK、CTSK和TRAP m RNA的表达。但是,仅TNF-α不能诱导培养的RAW264.7细胞分化为破骨细胞成。TNF-α以剂量依赖性方式诱导NF-κB亚基p65和IκBα磷酸化,而NF-κB抑制剂处理则有效降低了RANK和TRAP的表达。本研究结论表明,绝经后骨质疏松症中TNF-α通过激活NF-κB来促进RANKL诱导的破骨细胞形成。

细胞核因子κB受体活化因子配基在强直性脊柱炎的表达及意义

目的 检测细胞核因子κB受体活化因子配基 (RANKL)在强直性脊柱炎 (AS)患者脊柱外关节滑膜组织中的表达 ,并以类风湿关节炎 (RA)、骨关节炎 (OA)患者和健康者外周关节滑膜组织为对照 ,了解RANKL表达在AS患者关节炎症病理机制中的意义。方法 应用单克隆抗体 ,通过免疫组织化学方法检测 1 3例AS、1 6例RA、1 7例OA及 6例健康对照关节滑膜组织中RANKL、CD6 8蛋白表达及分布情况 ,通过计算机辅助图像分析系统和半定量分析方法确定RANKL在各滑膜组织中的表达水平 ,分析RANKL的表达与炎性指标及关节X线分期之间的相关性。结果 AS和RA患者组滑膜组织RANKL表达水平明显升高 ,阳性细胞主要见于滑膜组织衬里层和滑膜软骨交界区 ,OA患者组和健康对照组滑膜组织中则未见阳性表达信号。AS和RA患者滑膜组织中RANKL表达水平与关节X线分期呈正相关(相关系数r分别为 0 4 1、0 73,P值分别为 0 0 2 1、0 0 0 3)。结论 RANKL在AS患者骨质破坏的病理机制中具有重要作用 ,其表达量的多少在一定程度上可反映AS患者骨质破坏程度 ,AS患者滑膜组织中RANKL表达模式与RA相似 。

OPG/RANKL/RANK系统参与牙槽骨吸收及重建过程作用初探

目的初步探讨护骨素OPG、核因子κB受体活化因子配体RANKL、核因子κB活化因子RANK在牙周炎牙槽骨吸收及骨重建过程中的作用。方法对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞株RAW264.7实验组进行体外诱导培养,对照组为完全培养基培养;小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1实验组采用前期实验收集的骨吸收上清处理,对照组采用完全培养基培养;以免疫荧光等方法检测细胞OPG、RANKL、RANK的表达。30只8周龄雄性SD大鼠建立实验性牙槽骨吸收模型,研究其吸收重建规律。以免疫组化S-P法检测OPG、RANKL、RANK的表达情况。结果实验组MC3T3-E细胞经骨吸收上清处理7 d后,OPG蛋白平均荧光强度为(29.636±5.652),对照组为(15.568±1.229),表达显著上调(P<0.01);但实验组RANKL蛋白平均荧光强度为(6.806±1.738),对照组为(18.082±2.732),表达被显著抑制(P<0.01),OPG/RANKL比值在上清处理后高于对照组(P<0.05)。采用大肠杆菌内毒素E-LPS注射法成功制备大鼠牙槽骨吸收模型。在牙槽骨吸收区域OPG水平较无骨吸收区域有所降低,RANKL的表达则相反。结论 OPG、RANKL、RANK参与了大鼠实验性骨吸收活动;破骨细胞骨吸收上清可能通过改变OPG与RANKL的比值,从而影响骨重建中骨形成与骨吸收的动态平衡。