益心酮调控细胞膜钙通道的实验研究

目的 :观察中药益心酮片调控细胞膜钙通道的特性 ,从细胞和亚细胞水平探讨其改善心肌缺血再灌注损伤的作用机理。方法 :采用大鼠主动脉平滑肌细胞模型 ,用放射性4 5Ca跨膜流动测定技术分别观察益心酮片对溢流钙通道 (LC)、受体调控钙通道 (ROC)和电压依赖钙通道 (PDC)Ca2 + 内流的影响。结果 :益心酮片对LCCa2 + 内流无明显影响 ,对ROC和PDCCa2 + 内流有明显抑制作用。结论 :益心酮可以抑制慢通道Ca2 + 内流 。

TRPC1/STIM1复合体调节人脐静脉内皮细胞钙池操纵性钙通道和受体操纵性钙通道介导的钙内流和NO生成

目的研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)/基质交联分子1(STIM1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)钙池操纵性钙通道(SOCC)和受体操纵性钙通道(ROCC)介导的钙内流和NO生成中的作用。方法取2~3代HUVEC,将构建的TRPC1和STIM1干扰质粒分别转染HUVEC,观察细胞转染效果的同时采用real-time PCR和Western blot检测TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白的表达。将细胞分别与钙敏感受体(CaR)激动剂精胺、ROCC模拟剂(TPA)+CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育后,用荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO生成的变化;随后用TRPC1和STIM1干扰质粒同时转染HUVEC,与精胺孵育后检测[Ca2+]i和NO生成,免疫共沉淀法检测TRPC1和STIM1的相互作用。结果与Control组相比,TRPC1转染组和STIM1转染组TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05);在四种不同处理作用下,TRPC1转染组和STIM1转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);与Control组、TRPC1转染组及STIM1转染组相比,TRPC1和STIM1共转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);TRPC1与STIM1相互作用形成复合体,且在CaR激动剂的剌激下作用增强。结论 TRPC1/STIM1复合体共同调节CaR经SOCC和ROCC激活介导的钙内流和NO生成。

蛋白质酪氨酸磷酸化和氯通道参与瞬时受体电位蛋白介导钙池耗竭引起的钙内流

目的 探讨蛋白质酪氨酸磷酸化与Cl-通道对瞬时受体电位 (TRP)蛋白参与的Ca2 + 池耗竭引起的Ca2 + 内流(SOC)的调控作用。方法 采用脂质体转染和Fura 2 /AM荧光光度法 ,测定胞浆游离Ca2 +浓度 ( [Ca2 + ]i) ,比较转染人源性TRP1 (hTRP1 )和人源性TRP3 (hTRP3 )cDNA对毒胡罗卜素 (TG)引起的Ca2 + 内流的作用 ,并观察酪氨酸激酶抑制剂染料木黄酮、Cl-通道阻断剂呋塞米和 4,4 二异硫氰基芪 2 ,2 二磺酸 (DIDS)对其的影响。结果 HEK2 93细胞转染hTRP1cDNA后 ,TG引起的Ca2 + 内流显著增加 ;转染hTRP3cDNA则无明显影响。 5～ 3 0 μmol·L-1染料木黄酮、1～ 8μmol·L-1呋塞米、0 .5～ 1μmol·L-1DIDS对转染hTRP1cDNA细胞的TG诱发的Ca2 + 内流均有抑制作用。结论 hTRP1蛋白可能是HEK2 93细胞SOC的物质基础 ;酪氨酸激酶和Cl-通道均参与HEK2 93细胞SOC的调控 。

使用^(45)Ca研究中药钙拮抗剂对细胞膜钙通道的影响

通过45Ca跨膜流动的测定方法,研究中药对大鼠胸主动脉Ca2+跨膜内流的影响.结果:中药化痰愈梗汤和丹参、党参叶不影响静息状态下Ca2+的内流,但能够抑制去甲肾上腺素(NE)和氯化钾(KCl)引起的Ca2+的内流,抑制能力随其浓度增加而加强,说明此中药能阻滞细胞膜外Ca2+通过受体操纵钙通道(ROC)和电压依赖钙通道(PDC)

海洋硫酸多糖DPS对大鼠主动脉平滑肌细胞膜电压依赖性Ca^(2+)通道和受体活化性Ca^(2+)通道的影响

本文观察了海洋硫酸多糖DPS对去甲肾上腺素（NA）和氯化钾（KCl）所致大鼠主动脉环收缩反应的影响。结果表明,DPS 1mg·L-1能抑制NA和KCl所致大鼠主动脉环收缩,使量效反应曲线非平行性右移,压低最大反应曲线,显示DPS对NA和KCl所致大鼠主动脉环收缩具有非竞争性拮抗作用。提示,DPS有抑制电压依赖性Ca2+通道和受体活化性Ca2+通道的作用。

瞬时感受器电位香草酸受体1在低氧诱导肺动脉平滑肌细胞内钙升高中的作用

目的观察记录低氧条件培养的人肺动脉平滑肌细胞中瞬时感受器电位香草酸受体1(transient potential vanilloid receptor1,TRPV1)对细胞内Ca2+浓度(用340nm/380nm的荧光强度比值表示)的影响,探讨TRPV1在低氧性肺动脉平滑肌细胞增生中的作用。方法应用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色、流式细胞周期测定以及细胞内Ca2+浓度测定的方法检测细胞增生及细胞内Ca2+浓度变化。结果低氧能明显促进人肺动脉平滑肌细胞的增生,升高人肺动脉平滑肌细胞内静息Ca2+浓度,显著加强环并偶氮酸(cyclopiazonic acid,CPA)诱发的库容性Ca2+内流(capacitative Ca2+entry,CCE),上述效应均可被TRPV1阻断剂Capsazepine(CPZ)所抑制。结论在人肺动脉平滑肌细胞中,TRPV1可能是低氧所致细胞内Ca2+浓度增加、CCE增强和细胞过度增生的重要途径或调制因素。

三七叶总甙对细胞内钙和外钙的影响

三七叶总甙（Ｔｏｔａｌｓａｐｏｎｉｎｅｓｏｆ Ｌｅａｆ ｏｆ ｐａｆｌａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ，ｐＮＬＴＳ）０．５～１ｍｇ／Ｌ抑制异丙肾上腺素加快豚鼠右心房自发频率的作用，能使量效反应曲线右移。ｐＮＬＴＳ１ｍｇ／Ｌ也能抑制大鼠主动脉螺旋来由高Ｋ＋去极化和去甲肾上腺素３０ｎｍｏｌ／Ｌ诱发收缩张力增加的作用。ｐＮＬＴＳＩｍｇ／Ｌ与哌克昔林３７．５ｕｍｏｌ／Ｌ作用相似，都有拮抗作用，能拮抗受体控制性钙通道（ＲＯＣ）和电位依赖性钙通道（ＰＤＣ），并证明ＰＮＬＴＳ与派克昔林对内Ｃａ２＋，释放和外Ｃａ２＋内流诱发主动脉螺旋条的收缩都有抑制作用。

心喘灵舒血管作用的研究

心喘灵(XC-1)抑制异丙肾上腺素加快大鼠有心房自发性频率的作用,能使量—效反应曲线右移,XC-1也能抑制大鼠主动脉螺旋条由高K^+去极化和去甲肾上腺素诱发收缩张力增加的作用。XC-1与沛心达(perhexiline)作用相似,都有钙拮抗作用,能拮抗受体控制性钙通道(ROC)和电位依赖性钙通道(PDC);并证明XC-1与沛心达对内Ca^(2+)释放和外源性Ca^(2+)诱发主动脉螺旋条的收缩都有抑制作用。

芍药和甘草对大鼠肠道平滑肌^(45)Ca内流机制的实验研究

用 ^(45)Ca 示踪方法研究芍药和甘草对离体大鼠肠道 Ca^(2+)跨膜流动影响的机理。结果表明:芍药和甘草对大鼠肠道平滑肌静息^(45)Ca 内流均无抑制作用。但能呈浓度依赖性的抑制去甲肾上腺素引起的^(45)Ca 内流增多,同时芍药尚有抑制高钾去极化引起的^(45)Ca 内流增多的作用。提示芍药和甘草主要通过阻断肾上腺素能α-受体减少细胞外钙的内流。

细胞中钙离子的电场效应

超低频电磁场生物效应的机理涉及到原生质膜离子通道Ca2 +传输的变化情况。研讨了在Vi=30sin10 0πt(mV)作用下HL 60细胞中Ca2 +的感应流量。在信号激励或假激励后 ,细胞内钙水平的响应不仅随活化剂浓度而异 。

钙库活化的钙通道和受体活化的钙通道参与人脐静脉内皮细胞钙敏感受体介导的钙内流和NO生成

为了探讨钙库活化的钙通道(store-operated calcium channels,SOC)和受体活化的钙通道(receptor-operated calcium channels,ROC)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)钙敏感受体(Ca^(2+)-sensing receptor,CaR)介导的钙内流及NO生成中的作用和机制,本实验通过分别或联合使用SOC阻断剂、非选择性的阳离子通道阻断剂、ROC激动剂和ROC阻断剂,采用Fura-2/AM检测细胞内钙离子浓度(intracellular Ca^(2+)concentration,[Ca^(2+)]_i)变化,NO荧光探针DAF-FM DA测定细胞内内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)活性和NO生成的变化。结果显示,与对照组(Spermine+Ca^(2+)组,激活CaR)相比,单独阻断SOC或ROC,HUVEC中[Ca^(2+)]_i、eNOS活性和NO含量均降低(P<0.05),而ROC激动剂可部分取消ROC阻断剂的阻断作用(P<0.05),SOC和ROC联合阻断可进一步加强上述抑制作用(P<0.05)。上述结果表明,在Spermine刺激激活CaR介导[Ca^(2+)]_i、eNOS活性和NO的生成过程中,SOC和ROC以协同的方式参与了CaR介导的钙内流及NO生成。

玉郎伞对大鼠主动脉条收缩的影响

目的:通过观察玉郎伞水提物对大鼠胸主动脉条收缩的影响研究其降压机制。方法:制备大鼠胸主动脉螺旋条,观察玉郎伞对去甲肾上腺素(NE)、氯化钾(KCl)和氯化钙(Ca Cl2)引起的主动脉条收缩的影响。结果:玉郎伞水提物6g生药/L、12g生药/L可使NE、KCl和Ca Cl2引起的大鼠胸主动脉条量-效收缩曲线右移,最大效应降低。其效应与维拉帕米相似,可选择性地阻断电压依赖性钙通道,而对受体控制性钙通道无影响。结论:玉郎伞的降压机制可能与其钙通道阻滞作用有关。

电针水沟穴对脑梗死模型大鼠脑血管平滑肌中L型钙通道α1C亚基及TRPC6亚基mRNA表达的影响

目的观察电针水沟穴对脑梗死模型大鼠脑血管平滑肌中细胞膜电压依赖性钙通道(VDCC)L型钙通道α1C亚基及受体门控钙通道(ROCC)瞬时受体电位通道6(TRPC6)亚基m RNA表达的影响。方法将130只SPF级雄性Wistar大鼠采用随机数字表法分为空白组(10只)、假手术组(40只)、模型组(40只)、电针组(40只)4组,除空白组外,其余3组又随机分为术后3 h、6 h、12 h、24 h 4个时相,每个时相10只。以线栓法复制大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠模型。电针组在造模后即刻针刺水沟穴,以韩氏电针仪刺激20 min。各组大鼠分别于相应时间处死,在外科显微镜下分别分离、剪取梗死侧的大脑前动脉、中动脉、后动脉各8 mm,通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组不同时相大鼠脑血管平滑肌中L型钙通道α1C亚基及TRPC6亚基m RNA的相对表达量。结果与空白组和假手术组比较,模型组各时相大鼠脑血管平滑肌中L型钙通道α1C亚基及TRPC6亚基m RNA相对表达量均明显上调,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,电针组各时相大鼠脑血管平滑肌中L型钙通道α1C亚基及TRPC6亚基m RNA相对表达量均明显下调,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论电针干预能显著抑制MCAO模型大鼠脑血管平滑肌中VDCC L型钙通道α1C亚基及ROCC TRPC6亚基m RNA表达的上调,从而抑制缺血后血管平滑肌痉挛,增加脑梗死区周围血流灌注。

Ca^2+在低氧性肺血管收缩中的作用

急性接触低氧环境时,肺血管收缩并分布血流到通气较好的区域,以保持肺内通气/血流比值充分匹配,这一过程称为低氧性肺血管收缩(HPV)。持续低氧状态下,肺血管可发生不可逆性重塑,表现为肺动脉中层平滑肌细胞以及外层纤维细胞增生,导致管腔狭窄,进而引发肺动脉高压(PAH),造成心室后负荷增加,严重者可以引发右心衰竭。肺动脉平滑肌细胞(PASMC)内Ca^2+浓度升高是其收缩、迁移和增殖的重要刺激因素。本文对近年来有关Ca^2+促进HPV方面的研究进行汇总,以期为临床预防低氧和治疗性PAH提供依据。

木犀草素对大鼠肠系膜上动脉舒张作用的影响

目的观察木犀草素对大鼠肠系膜上动脉的舒张作用并探讨其作用机制。方法采用离体血管环实验方法,1×10^(-6.1)、1×10^(-5.6)、1×10^(-5.1)、1×10^(-4.6)、1×10^(-4.1)、1×10^(-3.6)、1×10^(-3).1mol·L^(-1)木犀草素加药组为实验组,同时设立等体积累加生理盐水组为对照组。使用Myograph动态描记系统分别记录高K+、苯肾上腺素(PE)对大鼠离体血管环的收缩作用;观察不同浓度木犀草素对高K^(+)、PE预收缩血管环的舒张作用;同时采用多种工具药干预,探讨木犀草素舒张血管作用与内皮、钾通道及钙通道的相关性。结果木犀草素对高K+和PE预收缩的内皮完整的微动脉血管最大舒张率分别为(42.75±3.13)%和(82.64±1.80)%;其对去内皮微动脉血管环的最大舒张率为(94.52±0.76)%;在灌注压力存在的条件下,其对高K+和PE预收缩的微动脉舒张外径分别为(160.0±3.2)和(280.0±2.2)μm;当用浓度为1×10-4.6和1×10^(-4).1mol·L^(-1)的木犀草素孵育微动脉环后,PE累积添加浓度为1×10-5mol·L^(-1)时,PE最大收缩率降低,分别为(92.36±6.33)%和(63.76±12.79)%;实验组的上述数据与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论木犀草素对高K+和PE引起的血管收缩有浓度依赖性的舒张作用,其舒血管的机制与受体操纵性钙通道(ROCC)和电压依赖性钙通道(VDCC)有关。

Orai1-STIM1-TRPC1功能复合体在帕金森病中的研究进展

帕金森病(PD)是世界上第二常见的神经退行性疾病,它的发病机制与线粒体功能障碍、氧化应激反应以及钙稳态失衡有关。近年来,PD与Ca^(2+)的关系成为研究热点,钙稳态失衡可通过不同的途径导致PD。细胞内Ca^(2+)水平取决于钙库操纵性钙内流(SOCE),而SOCE由钙释放激活钙通道调节分子1(Orai1)、基质相互作用分子1(STIM1)及瞬时受体电位通道1(TRPC1)相互作用组成的功能复合体调节。常见的PD神经毒素可通过降低Orai1-STIM1-TRPC1复合体功能,损伤SOCE及其下游的信号通路选择性损伤多巴胺能神经元,并且Orai1-STIM1-TRPC1复合体可能通过作用于小胶质细胞以及内质网调控神经炎症、自噬现象以影响PD的发生发展。因此恢复Orai1-STIM1-TRPC1复合体表达及功能,维持钙稳态可能成为PD的有效治疗靶点。