Construction of Saccharomyces cerevisiae Strain Stably Expressing a Fusion Protein Containing Ten Tandem Recombinant Human Glucagon-like Peptide-1 Analogues

The recombinant Saccharomyces cerevisiae strain stably expressing recombinant human glucagon-like peptide-l（rhGLP-1） analogue, as a potential oral drug delivery system for diabetes type II treatment, was successfully constructed by the homologous recombination between chromosomal DNA and yeast and integrating vector pNK-GLP containing yeast ribosomal DNA fragments. The amount of rhGLP-I analogue fusion protein in transformant SG2 reached ca. 0.84 mg per gram of packed cells when SG2 was grown for 24 h in the YPD medium with a inoculum and medium ratio of 1：1. Oral administration of 5 g lyophilized SG2/kg to hyperglycemic rats decreased serum glucose from （24.8±1.40） to （21.2±1.36） mmol/L.

人α2a干扰素酵母工程菌高产培养条件的研究

研究了摇瓶培养条件对人α2 a干扰素酵母工程菌生长及表达的影响 ,结果表明 ,当基础料中腺嘌呤含量为 2 0μg/m L,在发酵进行至 1 2 h时再加入 2 0μg/m L腺嘌呤时 ,IFN-α2 a生物活性及比活分别达到了 7.3× 1 0 6IU/m L及 6 .77× 1 0 7IU/mg。发酵过程中后期补入适量葡萄糖 ,且维持低糖水平 ,有利表达。维持总碳源含量不变 ,使培养基中葡萄糖与蔗糖比例为 1∶ 0 .1 ,结果 IFN- α2 a生物活性及比活分别比对照增加了一倍以上。在发酵进行至 1 2 h时 ,加入 2 g/L谷氨酸 ,IFN-α2 a生物活性及比活分别比对照提高了 1 .76倍及 1 .94倍 ,而添加 0 .2 5～ 1 .0 g/L赖氨酸也能显著提高表达水平。培养基初始 p H对产物表达有较大影响 ,初始 p H为 6 .5时 ,对表达最有利。利用上述摇瓶培养优化条件 ,在 2 .6 L 生物反应器中进行补料分批培养 ,人 α2 a干扰素生物活性达到了1 .3× 1 0 7IU/m L,为原工艺的 3倍。

糖化酵母及酿酒酵母原生质体制备中若干条件的探索

本文意谷从糖化酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ）菌株５１０１－７Ｃ、５２０６－１Ｂ、５３０１－１４Ｄ及酿酒酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）菌株ＨＵ－ＴＹ－１Ａ出发，按Ｌ８（２＾７）正交表设计实验，进一步探索酵母原生质体制备条件。

三种微生物试验工业废水遗传毒性的比较

本研究应用Ames致突变试验、SOS/Umu测试法和酿酒酵母基因转变试验,对武汉市易家墩工业区三条排污渠水的遗传毒性进行检测,并对三种方法进行比较。初步结果表明,Ames试验与酿酒酵母基因转变试验对水样的测试结果基本一致,而SOS/Umu测试法的结果则与另两种试验结果不相符。此结果提示SOS/Umu测试法在对水中混合有机污染物遗传毒性的检测中尚不能代替Ames试验;而酿酒酵母检测系统可作为Ames试验的重要补充。

酿酒酵母重组人α2a干扰素补料分批培养

在 2 .6L全自动发酵罐中对人 α2 a干扰素重组酵母的补料分批培养过程作了初步研究。结果表明 ,培养过程中待葡萄糖耗尽时流加葡萄糖 ,并维持低糖浓度 ;在培养 1 0 h～ 2 0 h时 ,恒速流加 2 0 mg/L的腺嘌呤 ,能较大幅度提高表达水平 ,生物活性从原工艺的 3.1× 1 0 9IU/L提高至1 .3× 1 0 10 IU/L。表达期 p H值对生产水平有很大影响 ,宜控制在 5.0～ 5.

固定化混合菌利用戊糖和己糖共发酵制备乙醇

为研究固定化混合菌种对戊糖和己糖同步发酵生产燃料乙醇的影响,以海藻酸钙为固定化载体,采用包埋法固定化休哈塔假丝酵母(Candida shehatae)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)混合菌发酵生产燃料乙醇,并对固定化混合菌种的发酵条件进行优化。结果表明:固定化混合菌种发酵可以快速利用葡萄糖,解除葡萄糖代谢对木糖代谢的抑制作用,提高发酵效率,发酵时间从固定化单菌发酵的24 h缩短至20 h,发酵时间缩短16.67%。乙醇产量从13.28 g/L增加至14.89 g/L,升高了12.12%。固定化混合菌种的优化条件为:混合糖(葡萄糖和木糖)质量浓度为45 g/L,发酵温度为30℃,摇床转速为170 r/min,休哈塔假丝酵母和酿酒酵母菌体的比例为4∶1。在此条件下得到最佳乙醇产量为15.21 g/L,较优化前(13.74 g/L)提高了10.70%。本研究结果可为固定化混合菌发酵生产燃料乙醇的工业化提供理论依据。

导入酵母NDI1基因减少鱼藤酮诱导的分化型帕金森病细胞模型的损伤

目的探讨导入酵母NDI1基因能否替代人功能缺陷的线粒体复合体Ⅰ,为复合体Ⅰ功能障碍所致散发型帕金森病(PD)的基因治疗提供研究基础。方法将表达酵母NDI1的重组腺相关病毒(rAAV-NDI1)感染鱼藤酮诱导的分化型帕金森病细胞模型。设DMSO+空载、鱼藤酮+空载、鱼藤酮+NDI1共3组。用Western blot、免疫荧光染色、氧耗测定、ATP含量测定、ROS测定等方法检测细胞病理学、线粒体功能方面指标。结果鱼藤酮+NDI1组较鱼藤酮+空载组,细胞形态明显改善,细胞存活率显著上升(P<0.05),pS129α-突触核蛋白、全细胞自噬显著下降(P<0.05,P<0.001);复合体Ⅰ依赖性氧耗显著升高(P<0.01),细胞总ATP合成、线粒体氧化磷酸化偶联的ATP合成显著上升(P<0.01),线粒体ROS、线粒体自噬显著降低(P<0.01,P<0.001)。结论导入酵母NDI1基因可以在鱼藤酮诱导的分化型帕金森病细胞模型中,替代性弥补复合体Ⅰ的功能缺陷,对细胞病理学、线粒体功能的损伤具有改善作用。

重组DNA技术在酿酒酵母遗传操作中的应用

在传统的食品和酿造工业中，酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）占有十分重要的地位。如今，这种简单的单细胞真核生物已成为遗传研究的一种模式。本文简要综述了重组DNA技术应用于酿酒酵母遗传操作的研究进展，并指出了重组DNA技术作为新的遗传操作的手段，其应用性明显优于经典的遗传操作方法.

THE THEORY AND PRACTICE OF INSTAN-TANEOUS SPECIFIC GROWTH RATE DEPENDENT FED-BATCH REGIME FOR BAKER'S YEAST CULTURE

The fed-batch method for baker’s yeast culture is fundamental for compressed and activedry yeast making. As a technical know-how it has not been published hitherto. The pub-lication of our own fed-batch regime, in principle and in practice, may serve the biologistsas well as engineers to get better results in microbial production.

上海市新生儿重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)免疫持久性效果研究

目的探讨重组乙型肝炎(乙肝)疫苗(酿酒酵母)(Hepatitis B Vaccine Made by Recombinant DeoxyribonucleicAcid Techniques in Saccharomyces Cerevisiae Yeast,HepB-SCY)对新生儿的免疫效果和持久性。方法采用分层随机抽样方法,抽取上海市4个区1997～2008年出生的、有全程HepB-SCY接种史的儿童2356人作为调查对象,按免疫后不同时间分12个组,进行问卷调查,并采集静脉血进行抗乙肝病毒表面抗原抗体[Antibody toHepatitis B Virus(HBV)Surface Antigen(HBsAg),Anti-HBs]定量、HBsAg与抗乙肝病毒核心抗原抗体(Antibodyto HBV Core Antigen,Anti-HBc)检测。结果 Anti-HBs阳性率和几何平均浓度均随免疫时间延长而下降,免疫后1年分别为92.44%和392.61毫国际单位/毫升(mIU/ml),12年分别降至32.19%和55.52mIU/ml。调查对象的平均HBsAg阳性率为0.25%,Anti-HBc阳性率为1.61%,未出现随免疫后时间延长而上升的趋势。疫苗的保护率为88.25%。多因素Logistic回归分析显示:性别、年龄组、母亲怀孕时HBsAg状况、共用毛巾,是儿童乙肝保护性抗体应答的影响因素。结论新生儿使用HepB-SCY免疫有较好的持久性和保护效果,免疫后12年无需加强免疫。

乙型肝炎疫苗长期免疫效果评价及免疫持久性研究

目的评价我国新生儿乙型肝炎（乙肝）疫苗免疫后的长期保护效果，为乙肝防控和乙肝疫苗HepB免疫策略提供参考。方法用横断面调查和分层整群抽样的方法，在乙肝疫苗免疫效果观察监测点收集1987--1996年出生（13～22岁）、全程接种乙肝血源疫苗的人群，以及1997—2008年出生（1～12岁）、全程接种乙肝重组酵母疫苗人群的血清样本和资料；用微粒子酶免疫法检测HBV感染指标，结合本底资料和乙肝疫苗免疫史进行分析。结果在河北正定、广西隆安、上海黄浦、青海同德和湖南湘潭5个监测点共收集1～12岁重组酵母疫苗免疫人群样本8133例，13～22岁血源疫苗免疫人群样本4848例，5个监测点的HBsAg平均阳性率均显著低于本底值，疫苗总体保护效果分别为86．04％～96．14％；河北正定、青海同德和湖南湘潭的年龄分布差异无统计学意义，广西隆安和上海黄浦的结果显示19～22岁人群HBsAg阳性率偏高；Anti-HBs阳性率随免疫年龄增长而下降，重组疫苗免疫人群从1～2岁组的86．84％下降至11～12岁组的46．40％，17～18岁组的Anti．HBs阳性率处于较低水平，而19～22岁组出现升高；几何平均浓度（GMC）〈10mIU／ml（Anti．HBs阴性）的比例随着年龄增长逐渐升高，100～999．99mlU／ml和≥1000mlU／ml的比例随着年龄的增长呈现下降趋势。结论血源疫苗免疫后13—22年、重组酵母疫苗免疫后1～12年的总体保护效果良好；不必开展加强免疫，建议加强监测18岁以上人群的Anti-HBs水平，对GMC〈10mlU／ml者开展加强免疫。

重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)免疫12年保护效果及持久性分析

目的了解重组乙型肝炎(乙肝)疫苗(酿酒酵母)[Hepatitis B Vaccine(HepB)Made by Recombinant Deoxyribonucleic Acid(DNA)Techniques in Saccharomyces Cerevisiae Yeast,HepB-SCY]对新生儿的长期免疫效果和免疫持久性,为预防控制乙肝和HepB免疫策略提供参考。方法用横断面调查和分层整群抽样的方法,在HepB免疫效果长期监测点收集1997～2008年出生、全程接种HepB-SCY人群的血清样本和资料;用微粒子酶免疫法检测乙肝病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染指标,结合HepB免疫史进行分析。结果收集免疫人群样本9343例,乙肝病毒表面抗原(HBV Surface Antigen,HBsAg)平均阳性率为0.98%,抗乙肝病毒核心抗原抗体(Antibody to HBV Core Antigen,Anti-HBc)阳性率为3.16%,HBV感染率为3.37%;抗乙肝病毒表面抗原抗体(Antibody to HBsAg,Anti-HBs)平均阳性率为63.78%,从免疫后1年的91.16%逐渐下降至免疫后12年的50.53%;HepB首剂(HepB1)及时接种人群的HBsAg阳性率为0.89%,显著低于未及时接种人群的2.73%。结论 HepB-SCY免疫人群的HBsAg阳性率显著下降,免疫12年后保护效果良好,无证据表明需要进行再免疫。HepB1及时接种对预防HBV传播至关重要,提高HepB1及时接种率是预防控制乙肝的关键措施之一。

重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)免疫后15年的持久性效果研究

目的探讨重组乙型肝炎(乙肝)疫苗(酿酒酵母)[Hepatitis B Vaccine Made by Recombinant Deoxyribonucleic Acid Techniquesin Saccharomyces Cerevisiae Yeast,HepB-SCY]新生儿免疫的持久性效果,为制订HepB免疫策略提供参考。方法对1995年出生、HepB-SCY全程免疫的儿童采集血清样本,检测乙肝病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染指标,追踪观察其免疫15年后的持久性效果。结果抗乙肝病毒表面抗原抗体[Antibody to HBV Surface Antigen(HBsAg),Anti-HBs]阳性[≥2.1毫国际单位/毫升(mIU/ml)]率、有效阳性(≥10mIU/ml)率及几何平均浓度随免疫年限的延长逐年下降,分别由基础免疫后1年时的92.08%、84.16%和29.2lmIU/ml,降为15年后的65.66%、40.40%和5.24mIU/ml;年均递减率分别为2.23%、4.78%和10.82%。Anti-HBs阳性率的下降速率较慢,而有效阳性率则较快,并显示各项指标的年均递减率随免疫后年限的延长呈明显缓慢的趋势,免疫的低阳性率状态可维持较长时间。HBsAg均阴性。结论儿童HepB-SCY免疫15年后,HBsAg皆阴性,Anti-HBs的低阳性率状态可存在较长时间,12～15年内暂不考虑Anti-HBs监测和再免疫。

成人接种20微克重组乙型肝炎疫苗免疫应答及其影响因素的比较研究

目的比较成人接种20微克(g)重组乙型肝炎(乙肝)疫苗(中国仓鼠卵巢细胞)[Hepatitis B Vaccine(HepB)Made by Recombinant Deoxyribonucleic Acid(DNA)Techniquesin Chinese Hamster Ovary(CHO)Cell,HepB-CHO]和20g重组乙肝疫苗(酿酒酵母)(HepB Made by Recombinant DNA Techniquesin Saccharomyces Cerevisiae Yeast,HepB-SCY)的抗体应答及其影响因素。方法在山东省章丘市选择研究现场,筛选出乙肝病毒表面抗原[Hepatitis B Virus(HBV)Surface Antigen,HBsAg]、抗乙肝病毒表面抗原抗体(Antibody to HBsAg,Anti-HBs)和抗乙肝病毒核心抗原抗体全阴性者作为研究对象,随机分为两组,按照0、l、6个月免疫程序分别接种20g HepB-SCY和20g HepB-CHO。所有研究对象进行问卷调查并采集静脉血,采用化学发光微粒子免疫分析法(Chemiluminescence Microparticle Imunoassay,CMIA)定量检测Anti-HBs。比较不同HepB初次免疫后的抗体应答率和抗体水平,采用多因素分析方法确定排除其他因素影响后,HepB种类对抗体应答的影响。结果 HepB-SCY和HepB-CHO分别接种2011人和2290人。HepB-SCY无应答[<l0毫国际单位/毫升(mIU/m1)]率、低应答[10mIU/ml～99mIU/ml]率、正常应答[100mIU/ml～999mIU/m1]率、高应答[≥1000mIU/ml]率分别为14.22%、15.57%、29.09%和41.12%,HepB-CHO分别为9.35%、19.08%、33.97%和37.60%,两组四项指标间差异均有统计学意义(x2=5.44～23.11,P<0.01)。HepB-SCY组和HepB-CHO组Anti-HBs几何平均浓度(Geometric Mean Concentration,GMC)分别为270.39mIU/ml[95%可信区间(Confidence Interval,CI):233.33mIU/ml～3l3.32mIU/m1]和312.67mIU/ml(95%CI;278.28mIU/ml～351.32mIU/ml),差异无统计学意义(U=I.52,P=0.13)。多因素分析显示,排除性别、年龄、体重指数、吸烟史、饮酒史等因素影响后,无应答率与疫苗种类有关。结论成人接种20g HepB-SCY和20gHepB-CHO均可以获得较好的抗体应答,20g HepB-SCY无应答率略高于20g HepB-CHO。

新生儿5微克重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)无应答者不同剂次和剂量再免疫血清学效果研究

目的评价新生儿接种5微克(μg)重组乙型肝炎(乙肝)疫苗(酿酒酵母)[Hepatitis B Vaccine(HepB)Made by Recombinant Deoxyribonucleic Acid Techniques in Saccharomyces Cerevisiae Yeast,HepB-SCY]后无应答者,使用不同剂次、剂量HepB再免疫后的血清学效果。方法抽取上海、山东、江苏、广西等省(自治区、直辖市)完成5μg HepBSCY全程免疫后的7~12月龄婴儿8945人,将其中的无应答者随机分为2组,分别采用5μg HepB-SCY和10μg HepB(汉逊酵母)(Hansenula Polymorpha Yeast,HPY),按0、1、6个月程序进行再免疫,于再免疫第1、3剂后各1个月采血检测抗乙肝病毒表面抗原抗体(Antibody to Hepatitis B Virus Surface Antigen Anti-HBs)。结果 5μg HepBSCY组再免疫第1、3剂后,Anti-HBs阳转率分别为78.95%(60/76)和91.67%(66/72),差异有统计学意义(χ2=4.73,P=0.03)。10μg HepB-HPY组再免疫第1、3剂后,Anti-HBs阳转率分别为92.65%(63/68)和100.00%(64/64),差异无统计学意义[费希尔(Fisher)精确检验法,P=0.06]。5μg HepB-SCY组再免疫第1、3剂后,Anti-HBs的几何平均浓度(Geometric Mean Concentration,GMC)分别为45.79毫国际单位/毫升(mIU/ml)和193.83mIU/ml,差异有统计学意义(t=3.55,P=0.001)。10μg HepB-HPY组再免疫第1、3剂后,GMC分别上升为107.71 mIU/ml和302.54mIU/ml,差异有统计学意义(t=3.52,P=0.001)。再免疫第1剂后,10μg HepB-HPY组Anti-HBs的GMC高于5μg HepB-SCY组,差异有统计学意义(t=-2.10,P=0.037)。结论对5μg HepB-SCY初次免疫后无应答婴儿使用5μg HepB-SCY再免疫3剂,或10μg HepB-HPY再免疫1剂,能获得较理想的免疫应答;再免疫3剂比1剂可获得更高的抗体水平。

新生儿接种5微克重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)的免疫应答及其影响因素研究

目的了解新生儿常规接种5微克(μg)重组乙型肝炎(乙肝)疫苗(酿酒酵母)[Hepatitis B Vaccine Made by Recombinant Dexyribonucleic Acid(DNA)Techniques inSaccharomyces CerevisiaeYeast,HepB-SCY]后,抗乙肝病毒表面抗原抗体[Antibody to Hepatitis B Virus(HBV)Surface Antigen(HBsAg),Anti-HBs]的应答状况,并分析其影响因素。方法在山东省4个市选取7～12月龄、已按0、1、6个月免疫程序接种3剂5μg HepB-SCY的健康婴儿4147人,对其进行问卷调查并采集静脉血,采用化学发光微粒子免疫分析法定量检测Anti-HBs,计算抗体应答率和抗体水平,分析与抗体应答有关的因素。结果新生儿常规接种3剂5μgHepB-SCY后,Anti-HBs无应答[<10毫国际单位/毫升(mIU/ml)、且HBsAg及HBV-DNA(脱氧核糖核酸)均阴性]率为1.91%,低应答(≥10mIU/ml、但<100mIU/ml)率为17.31%,正常应答(≥100mIU/ml、但<1000mIU/ml)率为63.75%,高应答(≥1000mIU/ml)率为17.04%;Anti-HBs平均浓度为303.30mIU/ml。多因素分析表明,采血月龄延后、低出生体重、在乡级医院出生、母亲分娩前HBsAg阳性与新生儿低/无应答发生有关。结论新生儿采用5μg HepB-SCY初免后,可获得较好的Anti-HBs应答,新生儿HepB免疫应答受多种因素影响。

接种重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)后1～12年免疫效果分析

目的了解1997～2008年出生儿童接种重组乙型肝炎(乙肝)疫苗(酿酒酵母)(Hepatitis B Vaccine Made by Recombinant Deoxyribonucleic Acid Techniquesin Saccharomyces Cerevisiae Yeast,HepB-SCY)后的抗体水平,评价HepB-SCY的免疫持久性及保护效果。方法在西宁市城西区、大通县和海南藏族自治州同德县,选择1997～2008年出生、有明确HepB-SCY免疫史的特定人群,每个年龄段100人左右,采集静脉血5ml,分离血清,检测乙肝病毒(Hepatitis B Virus,HBV)表面抗原、抗乙肝病毒表面抗原抗体、抗乙肝病毒核心抗原抗体三项血清学指标。结果接种HepB-SCY后1～12年抗体阳性率保持在较高水平,抗体几何平均浓度则呈现随免疫年限延长而逐渐下降趋势。免疫人群HBV感染率为4.82%,较实施免疫前明显下降。结论 HepB-SCY免疫后效果较持久,可有效预防接种人群HBV感染。

≥16岁健康人群接种20微克/毫升重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)的安全性和免疫原性研究

目的评价≥16岁健康人群接种重组乙型肝炎（乙肝）疫苗（酿酒酵母）（Hepatitis B Vaccine Made by Recombinant Deoxyribonucleic Acid Techniques in Saccharomyces Cerevisiae Yeast,Hep B-SCY）20微克/毫升（μg/ml）安全性和免疫原性。方法采用酶联免疫吸附试验和固相放射免疫试验筛选乙肝病毒表面抗原[Hepatitis B Virus（HBV）Surface Antigen,HBsAg]阴性,且抗乙肝病毒表面抗原抗体（Antibody to HBsAg,Anti-HBs）〈10毫国际单位（mⅠU）/ml者,随机分为两组,分别接种20μg/ml Hep B-SCY和10μg/ml Hep B-SCY,按0、1、6个月免疫程序接种3剂,每剂接种后30min和6、24、48、72h以及4-28d进行安全性观察,完成3剂接种后1-2个月采血。采用化学微粒子发光法,对同一观察对象免疫前、后双份血清,同时检测免疫前HBsAg、抗乙肝病毒核心抗原抗体（Antibody to HBV Core Antigen,Anti-HBc）、Anti-HBs和免疫后Anti-HBs,免疫前Anti-HBs〈10mⅠU/ml的、免疫后Anti-HBs≥10mⅠU/ml判定为阳转,Anti-HBs≥100ml U/ml判定为高应答反应。结果 1350名观察对象中,44人报告不良反应,其发生率：Hep B-SCY 20μg/ml组为3.11%,且不高于Hep B-SCY 10μg/ml组（3.41%）,其中1级2.67%,2级0.15%,3级0.30%,无〉3级严重反应;主要症状为局部疼痛、红斑、红肿、瘙痒和轻度体温异常,两组不良反应及其分级间差异均无统计学意义（χ^2=0.0940,P=0.7592;χ^2=1.2095,P=0.2714）。1117名完成全程免疫者,分别按照免疫前对象全数据分析集（Full Analysis Set,FAS）、免疫前HBsAg阴性和Anti-HBs〈10m IU/ml对象符合方案集（Per Protocol Set）1（PPS1）、免疫前HBsAg阴性和Anti-HBs〈10m IU/ml以及Anti-HBc阴性对象符合方案集2（PPS2）进行免疫原性分析。FAS、PPS1、PPS2的Anti-HBs阳转率,20μg/ml组分别为98.25%、98.53%、98.66,10μg/ml组分别为98.53%、99.02%、98.96%,两组间差异均无统计学意义（χ^20.1384,P=0.7099;χ^2=0.5243,P=0.4690;χ^2=0.1834,P=0.6685）;免疫后高应答反应率20μg/ml组分别为90.21%、90.07%、91.40%,分别高于10μg/ml组87.89%、88.26%、89.77%,两组间差异亦均无统计学意义（χ^21.5438,P=0.2141;χ^20.9008,P=0.3426;χ^20.7770,P=0.3781）。FAS、PPS1、PPS2的免疫后Anti-HBs几何平均浓度（Geometric Mean Concentration,GMC）,20μg/ml组分别为1070.50m IU/ml、1048.48m IU/ml、1112.34m IU/ml,10μg/ml组分别为681.14m IU/ml、675.12m IU/ml、718.86m IU/ml,20μg/ml优于10μg/ml（t=22.9581,P〈0.0001;t=19.9813,P〈0.0001;t=19.4190,P〈0.0001）。结论≥16岁健康人群接种20μg/ml和10μg/ml HepB-SCY同样安全有效,且接种20μg/ml HepB-SCY产生的Anti-HBs GMC明显高于10μg/ml HepB-SCY。

重组质粒pYES-GFP mRNA在动物细胞中表达的研究

目的提取重组酿酒酵母mRNA,并对动物细胞进行转染,为进一步探索证明重组酿酒酵母mRNA可以作为基因治疗物质提供依据。方法利用酶法制备重组酿酒酵母的原生质体后提取其总RNA。对提取的总RNA纯化后利用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增,鉴定GFP基因的正确无误后,脂质体转染绿猴肾细胞COS-7。在光显微镜下观察绿色荧光的发生。结果成功制备重组酿酒酵母原生质体,克隆鉴定基因片段正确。转染细胞后有绿色荧光出现,能够表达目标基因。结论成功制备了重组酿酒酵母原生质体,提取的mRNA能够在动物细胞中表达。证实重组酿酒酵母mRNA可以作为基因治疗物质,能达到基因治疗的目的。

拉格啤酒酵母菌物种和株系的快速分子鉴定

近年来的基因组学研究结果已证实拉格啤酒酵母Saccharomycespastorianus是一个由艾尔啤酒酵母S.cerevisiae和真贝氏酿酒酵母S.eubayanus杂交而成的杂交种,并可根据地域传承和染色体倍性分为两个株系,即I型/Saaz系和II型/Frohberg系。前者主要为异源3倍体,后者则主要为异源4倍体。为了探讨中国啤酒酿造酵母菌的物种和菌系归属,我们根据拉格啤酒酵母及其两个菌系的基因组特性,制定了一套基于IntFR片段种特异性扩增和ITS-RFLP分析的精确但简便易行的拉格啤酒酵母菌物种和株系鉴定新方法,并以酿酒酵母属内相关种的模式或权威菌株和部分酒精及面包酵母为参照,对保藏于中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)的41株啤酒酿造酵母菌进行了重新鉴定和分型。这些菌株除1株原定名为贝氏酿酒酵母S. bayanus外,其余菌株的原定名均为S. cerevisiae。研究结果确认了S. bayanus菌株鉴定的正确性,但在其余的40株啤酒酵母菌株中,21株属于S. cerevisiae,1株属于葡萄汁酿酒酵母S. uvarum,18株属于S. pastorianus。菌系鉴定和流式细胞测定结果显示在确认的S. pastorianus菌株中,1株为I型/Saaz系,3倍体;17株为II型/Frohberg系,其中9株为4倍体,两株为3倍体,5株介于3倍至4倍体之间。啤酒酵母物种和株系的确认对优化发酵工艺和菌种选育及遗传改造等具有重要意义。