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RAG基因与B细胞淋巴瘤 被引量:1
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作者 朱威 洪旭林 +2 位作者 余佳伟 付琴 毛峥嵘 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第8期1054-1058,共5页
重组活化基因(RAG)在介导抗原受体决定区复杂多样的DNA重组中发挥着重要作用,并可通过:1)RAG综合体识别和切断BCL-2基因致t(14,18)易位;2)RAG1/2协同诱导激活型胞啶脱氨酶作用引起染色体易位;3)RAG2蛋白降解异常导致V(D)J异常重排;4)EB... 重组活化基因(RAG)在介导抗原受体决定区复杂多样的DNA重组中发挥着重要作用,并可通过:1)RAG综合体识别和切断BCL-2基因致t(14,18)易位;2)RAG1/2协同诱导激活型胞啶脱氨酶作用引起染色体易位;3)RAG2蛋白降解异常导致V(D)J异常重排;4)EB病毒感染导致RAG1/2基因的再表达等方面促进淋巴瘤的发生。 展开更多
关键词 重组活化基因 淋巴瘤 重排 易位 EB病毒
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Expression, purification and bioactivity of human augmenter of liver regeneration 被引量:2
2
作者 Yang-De Zhang Jian Zhou +4 位作者 Jin-Feng Zhao Jian Peng Xiao-Dong Liu Xin-Sheng Liu Ze-Ming Jia 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2006年第27期4401-4405,共5页
瞄准:为肝新生(hALR ) 的原核生物、真核细胞的人的 augmenter 构造表示向量并且学习他们的生物活动。方法:hALRcDNA 克隆从原生质标志 pGEM-T-hALR 被获得,并且 cDNA 是克隆进 prokatyotic 表示向量 pGEX-4T-2 的潜水艇。recombina... 瞄准:为肝新生(hALR ) 的原核生物、真核细胞的人的 augmenter 构造表示向量并且学习他们的生物活动。方法:hALRcDNA 克隆从原生质标志 pGEM-T-hALR 被获得,并且 cDNA 是克隆进 prokatyotic 表示向量 pGEX-4T-2 的潜水艇。recombinant 向量和 pGEX-4T-2hALR 被酶消化并且 DNA 定序识别并且转变了成 E 关口 i JM109。断然选择的克隆被 GST-hALR 熔化蛋白质的表示与 IPTG 导致,然后,熔化蛋白质被 glutathine s-transferase (GST ) 净化 sepharose 4B 亲密关系层析,由测量 H 胸腺嘧啶核甙加入由凝血酵素劈开, hALR 单体被获得并且检测。结果:从原生质标志 pGEM-T-hALR 的 PCR 的产品被 1.5% sepharose 电气泳动检验。特定的带与理论的是重合的。顺序是精确的,酶消化的 pGEX-4T-hALP 与理论的是重合的。顺序是精确的,碎片在积极方向被插入。recombinant 向量被转变成 E 关口 i JM109。SDS 页证明导致的富有表达力的熔化蛋白质与 41 kDa 的分子量给一个单身的乐队看了。产品被净化并且劈开。GST 和 hALR 的分子量是 26 kDa, 15 kDa 分别地。recombinant 熔化蛋白质说明了细菌的溶解产物的 31% 全部的可溶的蛋白质。在主要文化和 HepG2 房间线加到成年老鼠 hepatocytes 的培养基的 HALR 能显著地与相关控制组相比提高 DNA 合成的率(P 【 0.01 ) 。结论:净化的 hALR 有能力刺激 DNA 在主要文化和 HepG2 房间在试管内的成年老鼠 hepatocytes 的合成,和罐头为它的临床的申请提供证据。 展开更多
关键词 净化方法 基因表达 生物活性 肝再生
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Gene editing for corneal disease management
3
作者 Sudhanshu P Raikwar Apoorva S Raikwar +1 位作者 Shyam S Chaurasia Rajiv R Mohan 《World Journal of Translational Medicine》 2016年第1期1-13,共13页
Gene editing has recently emerged as a promising technology to engineer genetic modifications precisely in the genome to achieve long-term relief from corneal disorders.Recent advances in the molecular biology leading... Gene editing has recently emerged as a promising technology to engineer genetic modifications precisely in the genome to achieve long-term relief from corneal disorders.Recent advances in the molecular biology leading to the development of clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPRs) and CRISPR-associated systems,zinc finger nucleases and transcription activator like effector nucleases have ushered in a new era for high throughput in vitro and in vivo genome engineering.Genome editing can be successfully used to decipher complex molecular mechanisms underlying disease pathophysiology,develop innovative next generation gene therapy,stem cell-based regenerative therapy,and personalized medicine for corneal and other ocular diseases.In this review we describe latest developments in the field of genome editing,current challenges,and future prospects for the development of personalized genebased medicine for corneal diseases.The gene editing approach is expected to revolutionize current diagnostic and treatment practices for curing blindness. 展开更多
关键词 ADENO-ASSOCIATED virus Clustered Regularly-Interspaced SHORT Palindromic Repeats associated protein 9 Cornea Clustered regularly interspaced SHORT palindromic repeat Double strand breaks gene EDITING sgRNA gene targeting Homology directed repair Homologous recombination Indels LENTIVIRAL vector Protospacer-adjacent motif Transcription activator like effector NUCLEASES Zinc finger NUCLEASES
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鲤脂蛋白脂肪酶基因特性、表达分布、重组蛋白获得及酶活性比较
4
作者 王钰婧 冯文荣 +4 位作者 徐逾鑫 李建林 苏胜彦 俞菊华 唐永凯 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期208-224,共17页
为研究鲤脂蛋白脂肪酶(CcLPLs)的基因特征、时空表达分布及酶活性,实验利用基因组同源搜索获取鲤CcLPLs同源基因并分析其序列特征;通过荧光定量PCR(qPCR)方法对CcLPLs在不同组织的表达进行分析;采用原核表达系统获取CcLPLs重组蛋白,并... 为研究鲤脂蛋白脂肪酶(CcLPLs)的基因特征、时空表达分布及酶活性,实验利用基因组同源搜索获取鲤CcLPLs同源基因并分析其序列特征;通过荧光定量PCR(qPCR)方法对CcLPLs在不同组织的表达进行分析;采用原核表达系统获取CcLPLs重组蛋白,并使用对硝基苯酚法测定各重组蛋白的酶活性。结果显示,鲤基因组中挖掘到5个CcLPLs基因(CcLPLA1a、CcLPLA1b、CcLPLA2a、CcLPLA2b*和CcLPLBa),经验证,CcLPLA2b*是假基因,共线性分析显示,鱼类特有基因组加倍过程中出现基因丢失的现象,而鲤特有的基因组加倍致使鲤存在5个CcLPLs。CcLPLA1a和CcLPLA1b核苷酸序列和氨基酸序列相同,同源性分析显示,CcLPLBa与CcLPLA1s的同源性为64%,与CcLPLA2a同源性为50.8%。qPCR结果显示,CcLPLs的表达量在肝脏、心脏、脂肪、肌肉、脑、肠道和脾脏中依次降低,在各个组织中,各基因表达量从高到底依次为CcLPLA1s、CcLPLA2a和CcLPLBa。鲤正常投喂、饥饿及再投喂状态下CcLPLA1s和CcLPLA2a在肝脏、肌肉和脂肪组织中的表达结果显示,饥饿状态下,CcLPLA1s和CcLPLA2a在肝脏中的表达量高于正常投喂组,而在肌肉和脂肪中低于正常投喂组;再投喂后,CcLPLA1s和CcLPLA2a在肝脏中表达水平降至正常投喂组,而在肌肉和脂肪中表现为先升高后降低的趋势。通过构建具有促溶效果的原核表达载体,分别获得了原核表达重组蛋白Skp-CcLPLs和SlyDCcLPLs,酶活性测定结果显示,重组蛋白其脂蛋白脂肪酶活性从高到低依次为CcLPLA1a、CcLPLBa和CcLPLA2a,最适pH均为8.0,发挥最大活性的NaCl浓度为0.6 mol/L。本研究探讨了鲤CcLPLs同源基因在进化中的表现,对CcLPLA1s、CcLPLA2a和CcLPLBa的时空表达进行了分析,测定了投喂和饥饿对CcLPLA1s、CcLPLA2a表达的影响,揭示鲤饥饿胁迫下脂质代谢及响应对策,为控制鲤脂肪含量提供靶点,成功进行重组蛋白的原核表达并测定了其酶活性,为鱼类脂蛋白脂肪酶研究提供参考。 展开更多
关键词 脂蛋白脂肪酶 基因表达 原核表达 脂蛋白脂肪酶活性
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罗非鱼无乳链球菌gap基因的原核表达及免疫原性研究
5
作者 杨洋 农源 +5 位作者 陈林 孙彤彤 黄远城 李恭贺 郑喜邦 吴文德 《现代畜牧兽医》 2023年第10期1-5,共5页
试验旨在探究罗非鱼无乳链球菌(GBS)膜蛋白gap的免疫原性。试验提取GBS的DNA,利用PCR扩增出gap基因,并与表达载体pET-28a-SUMO构建重组质粒,转化至大肠杆菌BL21;经IPTG诱导、SDS-PAGE分析和Western blot检测确定其表达效果。采用纯化的... 试验旨在探究罗非鱼无乳链球菌(GBS)膜蛋白gap的免疫原性。试验提取GBS的DNA,利用PCR扩增出gap基因,并与表达载体pET-28a-SUMO构建重组质粒,转化至大肠杆菌BL21;经IPTG诱导、SDS-PAGE分析和Western blot检测确定其表达效果。采用纯化的gap蛋白与弗氏佐剂乳化腹腔注射免疫罗非鱼,以间接ELISA法检测血清效价并使用GBS进行攻毒试验。结果显示,PCR扩增出1011 bp大小的单条带gap基因,与预期一致;重组载体pET-28a-gap在23℃、0.4 mmol/L IPTG、12 h条件下成功表达49.8 ku的可溶性蛋白;ELISA检测显示,重组蛋白gap能够产生较高的血清抗体效价水平,对GBS攻毒后的罗非鱼相对保护率为64.1%。研究表明,重组蛋白gap具有较好的免疫原性,为鱼类的链球菌病的预防提供新的理论依据。 展开更多
关键词 罗非鱼 无乳链球菌 gap基因 原核表达 重组蛋白疫苗 主动免疫
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蚯蚓纤溶酶基因P_(239)的原核表达、纯化及活性测定 被引量:7
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作者 陈飞 孟宪志 +4 位作者 李莉 单风平 吴红艳 桓明辉 陈杰 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期19-21,共3页
通过RT PCR方法从蚯蚓 (Lumbricusbimastus)中获得蚯蚓纤溶酶基因 ,命名为P2 3 9,含有 85 2个核苷酸 ,成熟肽编码 2 3 9个氨基酸 ,通过Genbank序列同源性比较 ,与已知的蚯蚓纤溶酶有一定的同源性 ,为首次获得的新基因。随后构建了 pBV2 ... 通过RT PCR方法从蚯蚓 (Lumbricusbimastus)中获得蚯蚓纤溶酶基因 ,命名为P2 3 9,含有 85 2个核苷酸 ,成熟肽编码 2 3 9个氨基酸 ,通过Genbank序列同源性比较 ,与已知的蚯蚓纤溶酶有一定的同源性 ,为首次获得的新基因。随后构建了 pBV2 2 0 /P2 3 9重组质粒 ,在大肠杆菌DH5α中进行原核表达 ,再经亲和层析柱纯化复性 ,其产物经活性测定 ,确定不仅具有激酶作用 ,而且具有直接溶栓活性。 展开更多
关键词 蚯蚓纤溶酶 基因克隆 重组表达 蛋白纯化 活挂测定
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IKZF1基因在BCR/ABL融合基因阳性急性淋巴细胞白血病中的表达及机制探讨 被引量:3
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作者 刘锋 温静 +3 位作者 李光 戴进前 杜明珠 宋艳萍 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2022年第4期603-607,共5页
目的:探讨IKZF1基因在急性淋巴细胞白血病中的表达特点及可能机制,进一步明确急性淋巴细胞白血病的发病机理。方法:收取80例急性淋巴细胞白血病患者的外周血标本,其中21例BCR/ABL融合基因阳性,均为B细胞急性淋巴细胞白血病。RT-PCR技术... 目的:探讨IKZF1基因在急性淋巴细胞白血病中的表达特点及可能机制,进一步明确急性淋巴细胞白血病的发病机理。方法:收取80例急性淋巴细胞白血病患者的外周血标本,其中21例BCR/ABL融合基因阳性,均为B细胞急性淋巴细胞白血病。RT-PCR技术检测IKZF1基因、RAG1基因及RAG2基因的表达;提取细胞DNA,PCR技术检测IKZF1基因的缺失突变;二代测序了解IKZF1基因断裂点区域的碱基序列。结果:RT-PCR结果显示80例急性淋巴细胞白血病中19例表达IK6亚型,其中17例为BCR/ABL融合基因阳性B细胞急性淋巴细胞白血病,2例为BCR/ABL融合基因阴性B细胞急性淋巴细胞白血病。即IK6亚型的表达主要在B细胞急性淋巴细胞白血病中,且主要与BCR/ABL融合基因有关。PCR实验证实了BCR/ABL融合基因阳性B细胞急性淋巴细胞白血病中IKZF1基因发生了缺失突变。二代测序发现IK6亚型由IKZF1基因2号内含子和6号内含子异常断裂后拼接形成,断裂点处存在重组激活基因蛋白能靶向作用的cRSS序列。结论:IK6亚型的表达主要在B细胞急性淋巴细胞白血病中。IK6亚型的表达在急性淋巴细胞白血病中与BCR/ABL融合基因有关。IK6亚型的表达在BCR/ABL融合基因阳性急性淋巴细胞白血病中与重组激活基因蛋白靶向作用导致IKZF1基因2号和6号内含子断裂可能相关。 展开更多
关键词 急性淋巴细胞白血病 BCR/ABL IKZF1 IK6 cRSS 重组激活基因蛋白
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重组人骨形成蛋白-3羧基端肽在大肠杆菌中表达及其诱骨活性 被引量:15
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作者 崔有宏 陈苏民 +2 位作者 刘新平 陈南春 薛泳涛 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第5期513-519,共7页
以双顺反子表达载体,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达了人骨形成蛋白-3羧基端肽段(hBMP-3C),表达量占菌体总蛋白量的18.5%.目的蛋白为25kD、含hBMP-3C端215个氨基酸残基组成的肽段,包括hBMP-3... 以双顺反子表达载体,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达了人骨形成蛋白-3羧基端肽段(hBMP-3C),表达量占菌体总蛋白量的18.5%.目的蛋白为25kD、含hBMP-3C端215个氨基酸残基组成的肽段,包括hBMP-3成熟肽和一部分前肽.表达产物以包涵体的形式存在,用含TritonX-100的洗涤液和5mol/L以下脲溶液连续洗涤,可获得较高纯度的重组人骨形成蛋白-3C端肽.经复性处理成可溶性蛋白,植入小鼠肌肉内,第14d组织切片显示有软骨细胞和软骨基质形成,第21d可见成骨细胞和骨基质形成.将rhBMP-3C与脱矿去免疫原性异种骨粒复合后作小鼠肌肉植入试验,21d组织切片上可见硬质骨形成.结果表明:大肠杆菌表达的hBMP-3C经复性后具有诱骨活性,糖基化并非BMP-3活性所必需. 展开更多
关键词 人骨形成蛋白 3羧基多肽 基因表达 诱骨活性
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微囊化和基因修饰的肝细胞移植——人肝再生增强因子(hALR)的原核表达、纯化及生物活性研究 被引量:3
9
作者 张阳德 赵劲风 +2 位作者 杨林 刘晓冬 陈伟 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期1-5,9,共6页
目的 :构建人肝再生增强因子原核融合表达载体 ,并对表达产物进行生物活性研究 ,从而为hALR基因修饰的肝细胞移植的细胞来源研究提供实验依据 ,并为人肝再生增强因子的临床应用奠定基础。方法 :以pGEM -T -hALR为模板 ,应用PCR技术扩增... 目的 :构建人肝再生增强因子原核融合表达载体 ,并对表达产物进行生物活性研究 ,从而为hALR基因修饰的肝细胞移植的细胞来源研究提供实验依据 ,并为人肝再生增强因子的临床应用奠定基础。方法 :以pGEM -T -hALR为模板 ,应用PCR技术扩增出hALRcDNA ,克隆入原核融合表达载体pGEX - 4T - 2 ,限制性内切酶酶切及测序证实序列正确 ;转化大肠杆菌JM10 9:挑取阳性克隆以IPTG诱导表达融合蛋白GST -hALR ,融合蛋白通过谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析纯化后进行凝血酶酶切获得hALR单体 ;采用3 H -thymidine渗入法检测hALR单体的生物学活性。结果 :以 pGEM -T -hALR为模板 ,行PCR扩增后 ,产物于1.5 %琼脂糖凝胶电泳分析 ,可见 380bp特异性条带 ,符合hALRcDNA阅读框架的大小。构建融合蛋白GST-hALR的重组表达质粒pGEX - 4T - 2 -hALR ,经限制性内切酶酶切分析 ,与理论值相符 ,测序证明序列正确 ,片段为正向插入。重组表达质粒转化人肠杆菌JM 10 9。SDS -PAGE电泳分析显示重组菌在约 4 1KD处出现一蛋白条带。纯化、酶切后融合蛋白前体谷胱甘肽S -转移酶约 2 6KD ,hALR约 15KD。薄层扫描蛋白电泳结果表明 ,表达的融合蛋白占细菌可溶性蛋白总量的 31%。纯化hALR加入原代鼠肝细胞、HepG2 细胞培基 。 展开更多
关键词 人肝再生增强因子 基因重组 融合蛋白 转化 纯化 生物活性 诱导表达
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人AITRL胞外区基因克隆表达及重组蛋白生物活性分析 被引量:1
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作者 毛朝明 王胜军 +8 位作者 仝佳 马洁 杨敏 许小朋 邱谷风 唐莉 邵启祥 李龙 许化溪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1059-1063,共5页
目的:获得重组人活化诱导的肿瘤坏死因子超家族配体胞外区蛋白(sAITRL),分析AITRL蛋白的生物学功能。方法:从全长质粒AITRL-pMD18-T中扩增sAITRL cDNA,亚克隆至表达载体pQE30;将重组质粒转化至E.coliM15,IPTG诱导蛋白表达;表达蛋白用Ni2... 目的:获得重组人活化诱导的肿瘤坏死因子超家族配体胞外区蛋白(sAITRL),分析AITRL蛋白的生物学功能。方法:从全长质粒AITRL-pMD18-T中扩增sAITRL cDNA,亚克隆至表达载体pQE30;将重组质粒转化至E.coliM15,IPTG诱导蛋白表达;表达蛋白用Ni2+-IMAC柱纯化、复性并Western blot鉴定,流式细胞仪检测sAITRL重组蛋白的结合活性,增殖试验分析sAITRL的生物学活性。结果:成功构建了sAITRL-pQE30原核表达载体;表达相对分子质量约15kD的重组蛋白;sAITRL能与活化淋巴细胞上的天然受体AITR结合,低浓度的sAITRL能促进淋巴细胞的增殖,而在高浓度下则抑制了淋巴细胞的增殖。结论:成功表达了具有生物学活性的sAITRL重组蛋白,AITR-AITRL相互作用在调节淋巴细胞增殖过程中起重要作用。 展开更多
关键词 活化诱导的肿瘤坏死因子超家族配体 基因克隆 原核表达 重组蛋白
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猪肺炎支原体DnaK基因的表达及ELISA方法建立 被引量:8
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作者 刘茂军 丁志勇 +9 位作者 刘冬霞 杜海霞 缪芬芳 甘源 孔猛 冯志新 熊祺琰 白方方 杜改梅 邵国青 《金陵科技学院学报》 2011年第4期79-84,共6页
猪肺炎支原体(Mhp)是猪气喘病的主要病原体。利用Mhp NJ株的DnaK基因通过SOE-PC(splicing withoverlap extension PCR)R扩增和突变,获得了目的片段并插入表达载体pET-28a(+)中,然后转入宿主菌BL21(DE3)。重组质粒经1 mmol/L IPTG在37... 猪肺炎支原体(Mhp)是猪气喘病的主要病原体。利用Mhp NJ株的DnaK基因通过SOE-PC(splicing withoverlap extension PCR)R扩增和突变,获得了目的片段并插入表达载体pET-28a(+)中,然后转入宿主菌BL21(DE3)。重组质粒经1 mmol/L IPTG在37°C温度下诱导5 h,目的蛋白可达到总蛋白的14.1%。Western Blotting证明表达的重组蛋白具有猪肺炎支原体反应原性,用该重组蛋白建立的ELISA方法可检测到猪肺炎支原体抗体。此为该病基因工程疫苗抗原的筛选和ELISA诊断试剂盒的研制奠定基础。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 DNAK 重组蛋白 活性鉴定
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外源性重组激活基因在人类细胞中的表达研究
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作者 曾艳 孙洪海 +5 位作者 王敏 刘旭 严丹丹 孙龙飞 刘志超 韦星呈 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第16期2001-2005,共5页
目的:通过恢复RAG-1、RAG-2分子的表达挽救功能性淋巴细胞的分化、发育,探讨从基因水平上根治RAG-免疫缺陷病的技术方法,为进一步进行基因治疗打下基础。方法:(1)采用RT-PCR方法克隆人类RAG-1、RAG-2编码基因,同时构建RAG-1、RAG-2真核... 目的:通过恢复RAG-1、RAG-2分子的表达挽救功能性淋巴细胞的分化、发育,探讨从基因水平上根治RAG-免疫缺陷病的技术方法,为进一步进行基因治疗打下基础。方法:(1)采用RT-PCR方法克隆人类RAG-1、RAG-2编码基因,同时构建RAG-1、RAG-2真核表达载体;(2)采用转染方法得到转染细胞体,使目的基因在人类细胞得到表达。结果:阳性克隆的测序结果与人类RAG-1、RAG-2基因完全相同,并且分别在获得重组细胞中检测到782 bp的人类RAG-1 mRNA转录产物和378 bp的人类RAG-2 mRNA转录产物,而pcDNA3.1空白对照未检测到任何hRAG-1 mRNA。结论:成功克隆了人类RAG-1、RAG-2基因,并在转染的人类细胞中获得了外源RAG-1、RAG-2的mRNA表达。 展开更多
关键词 重组激活基因-1(rag-1) 重组激活基因-2(rag-2) 真核表达载体 基因表达
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小鼠趋化因子CCL19Ig融合蛋白表达载体的构建、表达及鉴定
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作者 奉友刚 曾甫清 +6 位作者 王光明 李爱玲 郝杰 李翀 袁国红 高翔 谢蜀生 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期331-335,共5页
通过特异引物扩增出去掉终止密码的mCCL19编码序列,经酶切、亚克隆、拼接构建了真核表达载体pcDNA3.1-mCCL19Ig,酶切和测序鉴定插入序列;将重组质粒转染CHO细胞进行体外表达,通过RT-PCR、Western blot鉴定目的基因的表达,利用趋化小室... 通过特异引物扩增出去掉终止密码的mCCL19编码序列,经酶切、亚克隆、拼接构建了真核表达载体pcDNA3.1-mCCL19Ig,酶切和测序鉴定插入序列;将重组质粒转染CHO细胞进行体外表达,通过RT-PCR、Western blot鉴定目的基因的表达,利用趋化小室法测趋化活性。结果测序证实重组表达载体含mCCL19编码序列和人IgG1 Fc段序列,其序列分别与GenBank中公布序列比对一致,IgG1 Fc段读码框未发生改变;Western blot结果证实转染了pcDNA3.1-mCCL19Ig的CHO细胞培养上清中有相对分子质量为38 000的融合蛋白mCCL19Ig表达;体外趋化实验表明融合蛋白mCCL19Ig对小鼠脾细胞有趋化活性,且呈剂量依耐关系。 展开更多
关键词 趋化因子 CCL19 重组融合蛋白 基因表达 趋化活性
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猴源人隐孢子虫P23抗原基因克隆表达及其免疫活性的测定
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作者 徐前明 李国清 +3 位作者 罗锋 程家林 岳彩玲 高振永 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2011年第1期6-10,共5页
为探索隐孢子虫病免疫预防的新途径,本文对猴源人隐孢子虫Cryptosporidium hominis P23抗原基因进行了克隆、表达及其免疫活性的测定.采用RT-PCR方法对猴源C.hominis P23抗原基因进行克隆,构建重组质粒pGEX 4T 1 P23,并用IPTG诱导其在E.... 为探索隐孢子虫病免疫预防的新途径,本文对猴源人隐孢子虫Cryptosporidium hominis P23抗原基因进行了克隆、表达及其免疫活性的测定.采用RT-PCR方法对猴源C.hominis P23抗原基因进行克隆,构建重组质粒pGEX 4T 1 P23,并用IPTG诱导其在E.Coli Rossetta中表达;采用SDS PAGE检测其表达效果;采用Dot ELISA和淋巴细胞转化试验分别检测其与抗体反应特性和淋巴细胞增殖情况.结果表明:所克隆的P23抗原基因大小为342 bp;重组质粒表达蛋白的大小为40 kDa(含26 kDa的融合蛋白GST),以1、5、10 μg剂量的重组蛋白rP23均能刺激鼠脾脏淋巴细胞增殖,并能够与感染猴血清中的抗体明显地发生反应. 展开更多
关键词 人隐孢子虫 P23抗原基因 重组蛋白 免疫活性
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大肠杆菌LTKA63突变体的构建及重组LTKA63免疫佐剂活性机理的研究
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作者 全胜 夏肖萍 胡伟航 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期107-110,共4页
目的 构建大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位(heat-labile enterotoxin subunitA,LTA)基因减毒突变体LTKA63及其原核表达系统,探讨重组LTKA63(rLTKA63)粘膜免疫佐剂活性的机制。方法采用高保真PCR从大肠杆菌44815株基因组DNA中扩增LTA... 目的 构建大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位(heat-labile enterotoxin subunitA,LTA)基因减毒突变体LTKA63及其原核表达系统,探讨重组LTKA63(rLTKA63)粘膜免疫佐剂活性的机制。方法采用高保真PCR从大肠杆菌44815株基因组DNA中扩增LTA基因,利用定位突变技术构建LTKA63突变体,T-A克隆后测序。采用无His-tag的原核表达载体pET-15b。构建LTKA63原核表达系统,通过SDS-PAGE鉴定表达产物。采用三色流式细胞术确定rLTKA63激活T细胞途径。结果从大肠杆菌44815株DNA模板中扩增获得预期大小的LTA基因条带。与报道的LTA序列比较,所克隆的LTA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.03%~99.61%和98.33%~99.22%。LTA基因定位突变后获得序列正确的LT-KA63突变体。rLTKA63表达量占细菌总蛋白的15%左右。rLTKA63作用后Th1和Th2细胞较阴性对照组分别增加21.9%和36.2%。结论本文成功地构建了LTKA63原核表达系统,所表达的rLTKA能同时激活Th1和Th2细胞。 展开更多
关键词 大肠杆菌 LTKA63基因 克隆/表达载体构建 重组蛋白/表达 粘膜免疫/佐剂活性 TH1/TH2
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柞蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂6基因Apserpin-6的克隆及功能分析 被引量:4
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作者 曾军 王国宝 +4 位作者 王德意 周敬林 王勇 杨瑞生 秦利 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期764-772,共9页
昆虫的丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)可以通过抑制丝氨酸蛋白酶的活性调控机体的免疫防御反应。依据柞蚕中肠转录组数据库中一段编码serpin的CDS序列设计正、反向引物,以柞蚕幼虫总c DNA为模板克隆得到一段全长1 239 bp的序列,经序列分析... 昆虫的丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)可以通过抑制丝氨酸蛋白酶的活性调控机体的免疫防御反应。依据柞蚕中肠转录组数据库中一段编码serpin的CDS序列设计正、反向引物,以柞蚕幼虫总c DNA为模板克隆得到一段全长1 239 bp的序列,经序列分析后命名为Apserpin-6(Gen Bank登录号:MF944108)。该基因编码412个氨基酸残基,其中N端第1~17位氨基酸为信号肽序列,在C端第357~391位氨基酸之间有一个反应中心环,第374~375位丝氨酸之间是预测的蛋白质裂解位点。半定量RT-PCR检测Apserpin-6在柞蚕5龄幼虫脂肪体中的表达量最高,在血淋巴和头部组织的表达量次之,在中肠、丝腺和马氏管中的表达量较低。荧光定量PCR检测在受到柞蚕肠球菌(Enterococcus pernyi)、白僵菌(Beauveria bassiana)以及柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus)侵染后的柞蚕幼虫血淋巴中,Apserpin-6的表达量均明显上升。利用在原核表达系统表达的重组Apserpin-6蛋白,对柞蚕幼虫血淋巴中的酚氧化酶原(pro PO)和酚氧化酶(PO)活性进行体外抑制试验,结果显示该重组蛋白能够抑制pro PO的活性,但对PO活性没有影响。试验结果提示,Apserpin-6可能作为一种负调控因子参与调控柞蚕血淋巴对于病原菌的免疫防御反应。 展开更多
关键词 柞蚕 丝氨酸蛋白酶抑制剂 基因克隆 组织表达谱 诱导表达 重组蛋白 酚氧化酶活性
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吸血蝙蝠纤溶酶原激活剂α2的原核表达及抗体制备
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作者 魏昭荣 李刚强 +1 位作者 李校堃 刘德虎 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期294-298,共5页
利用人工合成的吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂α2(DSPAa2)基因,研究了其在细菌中的表达及表达产物的纯化和抗体制备。首先人工合成 DSPAa2基因,并构建原核表达载体转化大肠杆菌。经 IPTG 诱导后,DSPAa2在细菌中得到了高效表达。SDS-PAGE ... 利用人工合成的吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂α2(DSPAa2)基因,研究了其在细菌中的表达及表达产物的纯化和抗体制备。首先人工合成 DSPAa2基因,并构建原核表达载体转化大肠杆菌。经 IPTG 诱导后,DSPAa2在细菌中得到了高效表达。SDS-PAGE 结果显示,以包涵体的形式存在的 DSPAce2重组蛋白占到细菌总蛋白的32%。包涵体裂解后经亲合层析柱纯化,100mL 菌液中能得到2.2mg 纯的重组蛋白。用纯化的 DSPAa2分别免疫大鼠和小鼠,经 ELISA 检测,获得了效价达到1:12800以上的高质量的抗血清。West-ern blot 结果显示抗体能与 DSPAα2特异性地结合。 展开更多
关键词 吸血蝙蝠 纤溶酶原激活剂α2 重组蛋白 基因表达 免疫应答 急性心脑血栓 溶栓类蛋白药物
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半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)CSFR2基因的重组表达及其蛋白纯化与功能分析
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作者 王凯琳 胡乔木 陈松林 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2015年第2期30-36,共7页
通过对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)进行全基因组及转录组测序,预测了一个半滑舌鳎性别相关基因CSFR2,目前已对该基因进行了克隆和表达分析。为进一步研究CSFR2基因的功能,本研究从蛋白层面入手,构建了原核表达载体p ET-32a-CSFR2... 通过对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)进行全基因组及转录组测序,预测了一个半滑舌鳎性别相关基因CSFR2,目前已对该基因进行了克隆和表达分析。为进一步研究CSFR2基因的功能,本研究从蛋白层面入手,构建了原核表达载体p ET-32a-CSFR2,转化到大肠杆菌E.coli进行诱导表达,用His Trap进行蛋白纯化,SDS-PAGE电泳检测诱导及纯化产物,并将表达纯化的CSFR2蛋白注射1龄半滑舌鳎精巢。由于CSFR2是一个性别相关基因,因此无法通过免疫反应来直接检测其蛋白活性,本研究通过不同时间点取样检测半滑舌鳎其他性别相关基因Cyp19a和Foxl2的表达量变化,来间接反应CSFR2蛋白的活性及功能。实验结果显示,重组蛋白能够进入到活体细胞内并发挥一定作用,在6–72 h内对性别相关基因Cyp19a和Foxl2的表达有上调作用,说明CSFR2蛋白具有生物活性,并能调节其他性别相关基因的表达量,间接促进雄激素转化为雌激素。本研究进一步了解CSFR2基因在半滑舌鳎性别决定与分化中的作用,可为半滑舌鳎性别控制提供理论依据,在人工诱导鱼类性逆转方面有重要应用价值。此外,本研究为蛋白活性验证提供了一种新方法。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 性别相关基因 CSFR2 重组蛋白 生物活性
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HBV外膜蛋白2型重组腺相关病毒免疫原性
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作者 郝晓萌 吴小兵 +1 位作者 胡贵方 俞守义 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1357-1358,共2页
目的观察乙型肝炎病毒(HBV)外膜大蛋白(LP)基因的2型重组腺相关病毒(rAAV-2-LP)在Balb/c小鼠体内的免疫原性。方法以5×1011的rAAV-2-LP单次肌肉注射接种Balb/c小鼠,RT-PCR扩增肝脏组织中HBV外膜大蛋白基因cDNA;RIA法检测血清中表... 目的观察乙型肝炎病毒(HBV)外膜大蛋白(LP)基因的2型重组腺相关病毒(rAAV-2-LP)在Balb/c小鼠体内的免疫原性。方法以5×1011的rAAV-2-LP单次肌肉注射接种Balb/c小鼠,RT-PCR扩增肝脏组织中HBV外膜大蛋白基因cDNA;RIA法检测血清中表面抗体(抗-HBs)滴度;51Cr释放分析检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果HBV外膜大蛋白基因已整合到肝细胞染色体DNA,rAAV-LP接种小鼠后第20 d,小鼠体内可出现针对HBV外膜大蛋白特异性CTL,第30 d,血清中可检测到表面抗体。结论rAAV可以介导HBV外膜大蛋白基因转移到小鼠肝细胞;rAAV-2-LP免疫小鼠可以同时诱导体液和细胞免疫反应的出现。基于rAAV-2载体的HBV疫苗,对于防止HBV感染,尤其是作为慢性乙型肝炎的治疗性疫苗可能具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒(HBV) 外膜大蛋白 2型重组腺相关病毒(rAAV-2-LP) 基因表达 细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)
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血清DKK-1、LAG-3和SII在分化型甲状腺癌诊断中的临床价值 被引量:14
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作者 吴玲 徐高峰 《检验医学与临床》 CAS 2021年第3期348-352,共5页
目的观察血清重组人Dick-kopfx相关蛋白-1(DKK-1)、淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)和系统性免疫性炎症指数(SII)在分化型甲状腺癌诊断中的临床价值。方法选取2018年1月至2019年12月在该院就诊的98例分化型甲状腺癌患者作为分化型甲状腺癌组... 目的观察血清重组人Dick-kopfx相关蛋白-1(DKK-1)、淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)和系统性免疫性炎症指数(SII)在分化型甲状腺癌诊断中的临床价值。方法选取2018年1月至2019年12月在该院就诊的98例分化型甲状腺癌患者作为分化型甲状腺癌组,另选取同期在该院就诊的75例良性甲状腺结节患者作为甲状腺结节组,45例健康体检者作为健康对照组。比较分化型甲状腺癌组、甲状腺结节组和健康对照组血清DKK-1、LAG-3水平和SII,观察手术前后血清DKK-1、LAG-3水平和SII变化情况,观察各指标的相关性,以及对分化型甲状腺癌的诊断效能。结果分化型甲状腺癌组患者血清DKK-1水平和SII均明显高于甲状腺结节组,手术后血清DKK-1水平和SII均较术前明显降低,甲状腺结节组患者DKK-1水平和SII均明显高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);分化型甲状腺癌组患者血清LAG-3水平明显低于甲状腺结节组,手术后血清LAG-3水平较术前明显升高,甲状腺结节组患者LAG-3水平明显低于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。分化型甲状腺癌患者血清DKK-1、LAG-3水平和SII与淋巴结转移和TNM分期有明显关系(P<0.05);而与性别、年龄、病理类型、肿瘤最大径和腺外浸润无明显关系(P>0.05)。分化型甲状腺癌患者血清LAG-3水平与DKK-1水平(r=-0.642,P<0.05)和SII(r=-0.716,P<0.05)均呈负相关,DKK-1水平和SII呈正相关(r=0.784,P<0.05)。血清DKK-1、LAG-3和SII诊断甲状腺癌具有较高的诊断效能,联合检测灵敏度为88.8%,特异度为96.0%,受试者工作特征曲线下面积为0.965,明显高于DKK-1、LAG-3和SII单独检测(P<0.05)。结论血清DKK-1、LAG-3和SII参与了分化型甲状腺癌的发生和发展过程,对诊断分化型甲状腺癌具有较高的诊断效能。 展开更多
关键词 分化型甲状腺癌 重组人Dick-kopfx相关蛋白-1 淋巴细胞活化基因-3 系统性免疫性炎症指数 诊断效能
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