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细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95-EgA31的构建及其在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达
被引量:
15
1
作者
周必英
陈雅棠
+1 位作者
李文桂
杨梅
《中国病原生物学杂志》
CSCD
2009年第5期350-354,共5页
目的构建细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95-EgA31,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法超声粉碎细粒棘球蚴组织,提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Eg95和EgA31抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Eg95和EgA31,得到Eg...
目的构建细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95-EgA31,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法超声粉碎细粒棘球蚴组织,提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Eg95和EgA31抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Eg95和EgA31,得到Eg95-EgA31融合基因,克隆至原核表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-Eg95-EgA31,转化大肠埃希菌BL21,经异丙基硫代--βD-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Westernblot对表达产物进行分析和鉴定。结果基因拼接法扩增出约1 016 bp的Eg95-EgA31融合基因;双酶切证实Eg95-EgA31融合基因成功插入pGEX-1λT中,SDS-PAGE分析显示表达产物为分子质量单位约为62.5 ku的重组蛋白,与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的18%;Western blot鉴定重组蛋白能被细粒棘球蚴感染鼠血清识别。结论成功构建了细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95-EgA31,该质粒在大肠埃希菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性。
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关键词
细粒棘球绦虫
重组质粒
pgex-eg
95
-ega
31
大肠埃希菌
表达
原文传递
题名
细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95-EgA31的构建及其在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达
被引量:
15
1
作者
周必英
陈雅棠
李文桂
杨梅
机构
重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所
遵义医学院寄生虫学教研室
出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
2009年第5期350-354,共5页
基金
国家自然科学基金项目(No.30801052No.30671835No.30500423No.30200239)
文摘
目的构建细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95-EgA31,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法超声粉碎细粒棘球蚴组织,提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Eg95和EgA31抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Eg95和EgA31,得到Eg95-EgA31融合基因,克隆至原核表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-Eg95-EgA31,转化大肠埃希菌BL21,经异丙基硫代--βD-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Westernblot对表达产物进行分析和鉴定。结果基因拼接法扩增出约1 016 bp的Eg95-EgA31融合基因;双酶切证实Eg95-EgA31融合基因成功插入pGEX-1λT中,SDS-PAGE分析显示表达产物为分子质量单位约为62.5 ku的重组蛋白,与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的18%;Western blot鉴定重组蛋白能被细粒棘球蚴感染鼠血清识别。结论成功构建了细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95-EgA31,该质粒在大肠埃希菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性。
关键词
细粒棘球绦虫
重组质粒
pgex-eg
95
-ega
31
大肠埃希菌
表达
Keywords
Echinococcus granulosus
recombinant plasmid pgex-eg95-ega31
Escherichia coli
expression
分类号
R383.33 [医药卫生—医学寄生虫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95-EgA31的构建及其在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达
周必英
陈雅棠
李文桂
杨梅
《中国病原生物学杂志》
CSCD
2009
15
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