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Production of Transgenic Pig Clone Embryo Expressed the Red Fluorescent Protein by Using the Somatic Cell Nucleus Transplantation Technology
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作者 康锦丹 尹熙俊 +4 位作者 赵明辉 梁爽 刘希 李文学 崔成哲 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第2期287-290,307,共5页
[Objective] The research aimed to lay the foundation for producing the transgenic clone pig.[Method] The pig fetus fibroblast with the red fluorescent protein(RFP)gene that was transfected by the retrovirus was as t... [Objective] The research aimed to lay the foundation for producing the transgenic clone pig.[Method] The pig fetus fibroblast with the red fluorescent protein(RFP)gene that was transfected by the retrovirus was as the donor of nucleus transplantation.By using the somatic cell cloning technology,the development situation in vitro of clone embryo with RFP was studied.[Result] The fusion rate of RFP transgenic cell was 83.87% which had no significant difference with 80.56% of non-transgenic cell(P0.05).The blastula rate in vitro of RFP transgenic somatic cell reconstructed embryo was 8.67% which had no significant difference with 6.56% of non-transgenic cell(P0.05).After the reconstructed embryo of RFP transgenic somatic cell was transplanted into fifteen receptors,there was no conception individual.[Conclusion] The transgenic cell with the red fluorescent protein as the donor could successfully clone the transgenic embryo and obtain the transgenic blastula. 展开更多
关键词 TRANSGENE red fluorescent protein Nucleus transplantation Pig
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Protein Nutrition in Red Deer (Cervus elaphus)
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作者 罗理扬 陈化鹏 +2 位作者 谢绪昌 韩亚贞 王玉清 《Journal of Forestry Research》 SCIE CAS CSCD 1997年第3期174-181,共8页
Red deer can adjust to seasonal change of forage quality to maintain a relatively constant crude protein level (21. 1±4.0, 14.7± 1 .0, 11. 1± 1. 1 and 6.5 ±0.8 in spring. summer. fall and winter. r... Red deer can adjust to seasonal change of forage quality to maintain a relatively constant crude protein level (21. 1±4.0, 14.7± 1 .0, 11. 1± 1. 1 and 6.5 ±0.8 in spring. summer. fall and winter. respectively). Apparent protein digestibility is variable from -99.9% to 97.5%, depending upon season and forage type. True protein digestibility is 99%. Digestion of protein is significantly influenced by phenolics in diets.Minimumm digestible energy intase of 153.5kcal/kg0.75/day is necessary to maintain a positive nitrogen balance. Red deer recycles 18-85% of the urea produced and urea kinetic parameters (urea pool size, urea entry rate and urea excretion rate) are correlated to plasma urea conccntration. Rumen NH3-N production changes with season, but seasonal changcs in other NH3-N kinetic parameters (NH3-N concentration, NH3-N pool size and NH3-N outflow rate) are in dispute. Protein metabolism may be promoted in response to cold strcss. Endogenous urinary nitrogen is 0.09 (red deer) and 0. 16 g N/kg0.75day (elk), and metabolic frcal nitrogen is 5.58 g N/kg dry-matter intake. Protein requirements ranges from 100 g/kg DM to 170 g/kg DM for red deer of various ages and physiological stages. In conclusion.the knowledge of protein nutrition of red deer is limite.Much work is urgently needed in metabolism and requirements of protein before the appropriate feeding standard of red deer is coming. 展开更多
关键词 red deer cervus elaphus protein NUTRITION
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Interactions of pyrogallol red with proteins and the determination of proteins by resonance light-scattering 被引量:3
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作者 Hu Xiaoli 《西南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期67-72,共6页
The interactions of pyrogallol red (PR) with proteins and a derivative method for the determination of proteins were proposed. In the pH range 2 56-4 10, PR interacts with proteins, including bovine serum albumin, hu... The interactions of pyrogallol red (PR) with proteins and a derivative method for the determination of proteins were proposed. In the pH range 2 56-4 10, PR interacts with proteins, including bovine serum albumin, human serum albumin, lysozyme, chymotrypsin, resulting in enhanced resonance light scattering(RLS) with the maximal peak at 360 0 nm. With the enhanced RLS, proteins in the range 0-5 0(μg/mL can be determined with the determination limits between 10 3 and 32 2 ng/mL depending on different protein. The effects of foreign substances were tested. The method has been applied to the determination of protein in the synthetic samples and human urine with satisfaction results. 展开更多
关键词 proteinS Pyrogallol red(PR) resonance light scattering(RLS)
全文增补中
Influence of fish meal quality on growth,feed conversion rate and protein digestibility in shrimp (Penaeus chinensis ) and red seabream (Pagrosomus major)
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作者 梁明青 AndersAksnes 《海洋水产研究》 CSCD 2001年第4期75-79,共5页
The effect of fishmeal quality on growth,feed conversion ratio and protein digestibility was studied in a growth experiment with shrimp and red seabream.The shrimp and fish were fed three diets varing in the quality o... The effect of fishmeal quality on growth,feed conversion ratio and protein digestibility was studied in a growth experiment with shrimp and red seabream.The shrimp and fish were fed three diets varing in the quality of the fishmeal used in the respective feeds: low quality fish meal,good quality fish meal,and Peru fish meal.The experiment lasted for 2 months.The shrimp and fish fed the feed with good quality fish meal showed significantly better feed conversion ratio,weight gain rate,protein digestibility than the other groups. 展开更多
关键词 鱼粉质量 中国对虾 真鲷 饲料转化率 蛋白质 消化率 对虾
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Red蛋白抗血清的制备及其亚细胞定位研究 被引量:4
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作者 张晓楠 陈苏民 +4 位作者 罗二平 黄勇 柴玉波 李云峰 陈南春 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期305-308,共4页
目的:在大肠杆菌中分别表达3种Red蛋白,并制备兔抗Red蛋白的抗体。方法:从λ噬菌体基因组中,通过PCR分别扩增gam、bet和exoDNA的全长序列。将PCR产物克隆入非融合表达载体pDH2中,构建Red蛋白的高表达工程菌。通过温敏诱导表达3种Red蛋白... 目的:在大肠杆菌中分别表达3种Red蛋白,并制备兔抗Red蛋白的抗体。方法:从λ噬菌体基因组中,通过PCR分别扩增gam、bet和exoDNA的全长序列。将PCR产物克隆入非融合表达载体pDH2中,构建Red蛋白的高表达工程菌。通过温敏诱导表达3种Red蛋白(Bet、Exo和Gam),用PACTE薄层扫描检测目的蛋白含量。用3种Red蛋白分别免疫家兔制备抗血清,并以Westernblot鉴定抗体的效价和特异性。结果:大肠杆菌中表达的Bet、Exo和Gam蛋白,分别占菌体总蛋白量的40.3%、49.2%和73.4%。3种抗血清的效价约为1∶2000。Westernblot分析显示抗血清具有较好的特异性。结论:成功地获得Bet、Exo和Gam3种蛋白,并分别制备了相应的抗血清。使用这3种抗血清,检测了3种蛋白在真核细胞中的表达和定位,为研究Red蛋白的同源重组奠定了基础。 展开更多
关键词 red蛋白 多克隆抗体 瞬时转染
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红色荧光蛋白DsRed2基因在大肠杆菌中的表达和观察及其在本科实验教学中的应用 被引量:10
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作者 邢万金 赵宇航 +1 位作者 任仕超 包晓红 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期548-551,601,共5页
用PCR方法从质粒pDsRed2-1中扩增获得DsRed2,亚克隆到pMD19-T载体上,然后酶切将DsRed2分别插入到原核表达载体pET-Trx和pGEX-4T1上,转入E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达.在LB平板培养基上或液体培养基中直接观察菌体颜色,最后用SDS-P... 用PCR方法从质粒pDsRed2-1中扩增获得DsRed2,亚克隆到pMD19-T载体上,然后酶切将DsRed2分别插入到原核表达载体pET-Trx和pGEX-4T1上,转入E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达.在LB平板培养基上或液体培养基中直接观察菌体颜色,最后用SDS-PAGE检测DsRed2蛋白的表达.结果显示构建的重组载体pET-Trx-DsRed2和pGEX-GST-DsRed2在E.coli中成功表达,且不形成多聚体.LB平板培养基上和IPTG诱导24h后的液体培养基中都能直接观察到红色荧光,说明DsRed2可以作为原核表达系统的报告基因. 展开更多
关键词 原核表达 红色荧光蛋白 Dsred2 实验教学
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兔抗Red蛋白抗血清的纯化及MC3T3细胞中Red蛋白表达时相的分析 被引量:2
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作者 张晓楠 黄勇 +3 位作者 陈苏民 陈南春 王涛 赵伟钦 《科学技术与工程》 2006年第6期681-685,共5页
为了纯化兔抗Red蛋白的3种多克隆抗体,并用其研究Red蛋白在真核细胞中的表达时相,首先于30℃培养了不含目的基因的空载体(pDH2)大肠菌,经彻底裂菌后用丙酮沉淀全菌蛋白,用其在不同时间吸附3种待纯化的Red抗体,然后用间接 ELISA法及Weste... 为了纯化兔抗Red蛋白的3种多克隆抗体,并用其研究Red蛋白在真核细胞中的表达时相,首先于30℃培养了不含目的基因的空载体(pDH2)大肠菌,经彻底裂菌后用丙酮沉淀全菌蛋白,用其在不同时间吸附3种待纯化的Red抗体,然后用间接 ELISA法及Western-blot法检测了3种抗体的效价和特异性。最后用纯化后的3种Red抗体检测三顺反子表达载体pCMV-gIbIx的3 种蛋白表达产物在MC3T3细胞中的表达时相。ELISA及Western-blot检测结果表明:3种抗血清经纯化后特异性好且效价没有受到影响,随后用纯化的抗体成功地研究了Red基因在真核细胞中的表达时相,此结果为Red重组系统在真核生物基因功能的研究中提供了必要的条件。 展开更多
关键词 多克隆抗体 抗体纯化 red蛋白 表达时相
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含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6构建 被引量:2
8
作者 郭超 Alexander Endler +2 位作者 张敬 石红军 张军 《同济大学学报(医学版)》 CAS 2008年第1期17-20,共4页
目的构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰质粒载体pDsRed2-SilencerU6,便于利用荧光显微镜、FACS等实验技术开展RNA干扰研究。方法质粒pDsRed2-N1中DsRed2蛋白的编码基因BbsⅠ酶切位点无意突变后,破坏pDsRed2-N1多克隆位点,PCR扩增CMV启... 目的构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰质粒载体pDsRed2-SilencerU6,便于利用荧光显微镜、FACS等实验技术开展RNA干扰研究。方法质粒pDsRed2-N1中DsRed2蛋白的编码基因BbsⅠ酶切位点无意突变后,破坏pDsRed2-N1多克隆位点,PCR扩增CMV启动子、DsRed2蛋白基因片段并将其克隆至RNA干扰载体pSilencerU6,得到pDsRed2-SilencerU6质粒,利用脂质体转染技术将其转染HEK293T细胞,荧光显微镜、FACS检测转染效率。结果DsRed2蛋白编码基因序列BbsⅠ点突变正确,成功构建pDsRed2-SilencerU6载体,其在HEK293T细胞中可显著表达红色荧光蛋白,利用脂质体转染技术,转染效率达70.61%。结论成功构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6并在哺乳动物细胞中表达,为今后开展RNA干扰研究提供了基础。 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 Dsred2 RNA干扰 U6启动子
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表达红色荧光蛋白DsRed报告基因的逆转录病毒载体的构建和在肝干细胞体内示踪中的应用 被引量:1
9
作者 李文林 苏娟 +2 位作者 陶欣荣 Joseph T Lau 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期240-242,共3页
目的:建立表达红色荧光蛋白DsRed的逆转录病毒载体,并对肝原始细胞进行体外标记和体内示踪研究。方法:将pDsRed1 1载体中的DsRed片段克隆到逆转录病毒载体pLNCG C1中构建了pLNCG DsRed载体。将该载体导入Phoenix包装细胞,进而采用乒乓... 目的:建立表达红色荧光蛋白DsRed的逆转录病毒载体,并对肝原始细胞进行体外标记和体内示踪研究。方法:将pDsRed1 1载体中的DsRed片段克隆到逆转录病毒载体pLNCG C1中构建了pLNCG DsRed载体。将该载体导入Phoenix包装细胞,进而采用乒乓转染的方法感染包装细胞PT67,获得高滴度稳定产毒的PT67 细胞系。结果:利用PT67 细胞系产生的病毒上清可以高效的感染体外培养的肝原始细胞系。将这些DsRed标记的肝原始细胞移植到小鼠损伤肝脏中,4周后可以在再生肝脏中清晰地观察到具有红色荧光的外源细胞。结论:由于肝脏组织没有红色自发荧光,用DsRed标记肝原始细胞进行肝内示踪时背景干扰小。 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 基因.报告 逆转录病毒载体 肝干细胞
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RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB 被引量:1
10
作者 唐志如 张友明 +2 位作者 孙志洪 黄瑞林 印遇龙 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期417-421,共5页
RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB,为发光光状杆菌基因敲除提供方法。采用TOPO克隆方法将基因cipA和cipB克隆到质粒pTA上,获得质粒pTA-cipA和pTA-cipB;采用Red/ET方法分别将Gentar基因和Aprar基因分别插入pTA-cipA... RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB,为发光光状杆菌基因敲除提供方法。采用TOPO克隆方法将基因cipA和cipB克隆到质粒pTA上,获得质粒pTA-cipA和pTA-cipB;采用Red/ET方法分别将Gentar基因和Aprar基因分别插入pTA-cipA和pTA-cipB的cipA和cipB基因中,并替换cipA和cipB基因部分序列,获得pTA-GentaIncipA和pTA-ApraIncipB;pTA-GentaIncipA通过BamHⅠ酶切,从0.7%琼脂糖胶上回收获得GentaIncipA,将GentaIncipA导入带有质粒pASK-αβγA的P.luminescenssubsp.Akhurstii中,通过的RED同源重组敲除发光光状杆菌晶体蛋白cipA;pTA-ApraIncipB用EcoRⅠ酶切,从0.7%琼脂糖胶上回收获得ApraIncipB,将ApraIncipB导入带有质粒pASK-αβγA的P.luminescenssubsp.Akhurstii中,通过的RED同源重组敲除发光光状杆菌晶体蛋白cipB;42℃下热激去除突变菌中的质粒pASK-αβγA。克隆PCR和SDS-PAGE电泳结果表明发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB均被敲除。采用RED同源重组法成功地敲除了发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB。 展开更多
关键词 发光光状杆菌 red同源重组 敲除 晶体蛋白
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pDsRED-LC3真核表达载体的构建及其在肝癌细胞系HepG2中的表达和定位
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作者 彭琬昕 孙瑶湘 +3 位作者 陈琛 金洁 邵根宝 王嫘 《南京师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期84-88,共5页
本实验根据已知的人MAP-LC3序列,以人脑胶质瘤U251细胞cDNA为模板扩增出去除终止密码子的MAP-LC3片段,定向克隆至红色荧光融合蛋白载体pDsRed-N1质粒中,构建了重组质粒pDsRed-LC3.将pDsRed-LC3转染HepG2细胞,48 h后用Western Blot、激... 本实验根据已知的人MAP-LC3序列,以人脑胶质瘤U251细胞cDNA为模板扩增出去除终止密码子的MAP-LC3片段,定向克隆至红色荧光融合蛋白载体pDsRed-N1质粒中,构建了重组质粒pDsRed-LC3.将pDsRed-LC3转染HepG2细胞,48 h后用Western Blot、激光共聚焦显微镜检测融合蛋白在细胞内的表达和分布情况,并观察血清饥饿时细胞发生自噬的情况.结果表明:(1)成功构建pDsRFP-LC3真核表达载体,该载体能在人肝癌细胞中表达;(2)血清饥饿应激实验证明,该载体可以良好地指示自噬泡的形成过程,为研究肿瘤细胞的自噬发生情况提供了一个重要而方便的工具. 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 MAP-LC3 自噬 肝癌
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小鼠PDL1-Red2融合蛋白真核表达载体的构建、表达及其效应
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作者 廖雯君 孙晶 +2 位作者 朱慧芬 张金元 沈关心 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1068-1071,共4页
目的:小鼠跨膜型PD-L1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因真核表达载体的构建、表达与鉴定,及其效应初步研究。方法:应用基因工程技术构建重组载体,脂质体转染NIT细胞株,以流式细胞术(FCM)和倒置相差荧光显微镜检测融合蛋白的表达;采用混合淋... 目的:小鼠跨膜型PD-L1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因真核表达载体的构建、表达与鉴定,及其效应初步研究。方法:应用基因工程技术构建重组载体,脂质体转染NIT细胞株,以流式细胞术(FCM)和倒置相差荧光显微镜检测融合蛋白的表达;采用混合淋巴细胞培养,以FCM测定脾细胞的增殖反应。结果:融合基因在转染的真核细胞中获得表达,并呈膜分布,转染PD-L1/pDsRed2-N1的细胞对淋巴细胞增殖反应有一定的抑制作用,表明PD-L1/pDsRed2-N1融合蛋白中分子标签未影响PD-L1的结构及其生物学活性。结论:PD-L1与DsRed2融合基因载体构建成功,表达的融合蛋白具有生物学活性。 展开更多
关键词 PD-L1 红色荧光蛋白 融合基因 混和淋巴细胞培养
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远红荧光蛋白HcRed基因的原核和真核表达及鉴定
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作者 何志强 薛渊 +8 位作者 石燕 杨恒 赵银霞 王楷文 周成林 王胜军 邵启祥 焦志军 许化溪 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2010年第1期17-20,共4页
目的:分别构建携带HcRed基因的PET28a(+)原核和PIRES真核载体,并分别在大肠埃希菌和鼠树突状细胞系(DC2.4)中表达、鉴定,为后续基因及蛋白的转染提供基础。方法:参照基因库中HcRed1基因序列,设计HcRedCDS全长引物,以含有HcRed的质粒为模... 目的:分别构建携带HcRed基因的PET28a(+)原核和PIRES真核载体,并分别在大肠埃希菌和鼠树突状细胞系(DC2.4)中表达、鉴定,为后续基因及蛋白的转染提供基础。方法:参照基因库中HcRed1基因序列,设计HcRedCDS全长引物,以含有HcRed的质粒为模板,通过PCR获得目的基因,并分别连接于PET28a(+)原核载体和PIRES真核载体。经PCR、酶切鉴定后,原核载体转化大肠埃希菌,经IPTG诱导表达;真核载体用脂质体转染DC2.4,G418筛选出克隆后,应用RT-PCR和流式细胞仪进行检测。结果:扩增出687 bp的HcRedCDS区序列,构建了原核和真核表达载体PET28a(+)/HcRed和PIRES/HcRed,分别于大肠埃希菌和DC2.4细胞系中成功表达。结论:成功构建HcRed基因的原核、真核表达载体,并分别在工程菌和细胞系中成功表达,为后续基因及融合蛋白的筛选、示踪和体内观测奠定了基础。 展开更多
关键词 远红荧光蛋白Hcred 树突状细胞系2.4 原核表达
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细菌λ Red重组技术的应用及其影响因素 被引量:9
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作者 付喜爱 张德显 +3 位作者 周维 于立辉 田春莲 刘明春 《动物医学进展》 北大核心 2015年第1期91-95,共5页
由λ噬菌体的exo、beta、gam 3个基因分别编码的Exo、Beta和Gam蛋白组成λRed同源重组系统。λRed重组是细菌靶基因置换的有效技术,该技术发展迅速,已广泛应用于大肠埃希菌等细菌染色体DNA的基因敲除、基因整合,可以对任何大小的DNA分... 由λ噬菌体的exo、beta、gam 3个基因分别编码的Exo、Beta和Gam蛋白组成λRed同源重组系统。λRed重组是细菌靶基因置换的有效技术,该技术发展迅速,已广泛应用于大肠埃希菌等细菌染色体DNA的基因敲除、基因整合,可以对任何大小的DNA分子进行精确修饰。利用λRed重组系统不仅可以构建工程菌,还可以为研究细菌的致病机理和耐药机制提供新的方法。然而,许多应用因重组频率而受到限制,影响重组频率的因素主要有底物浓度、同源片段的长度、内源性核酸酶、错配蛋白等。论文综述了λRed同源重组技术的应用进展及影响重组的因素,以期为优化重组试验方案及提高试验的成功率提供帮助。 展开更多
关键词 λ red同源重组 应用 底物 内源性核酸酶 错配蛋白
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含DsRed类似生色团的红色荧光蛋白的发展及应用 被引量:4
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作者 王志芳 安建梅 孔建强 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期197-206,共10页
自从绿色荧光蛋白(GFP)被发现以来,荧光蛋白在生物医学领域已经成为一种重要的荧光成像工具.随着红色荧光蛋白DsRed的出现,各种优化的DsRed突变体和远红荧光蛋白也不断涌现.其中荧光蛋白生色团的形成机制对改建更优的荧光蛋白变种影响很... 自从绿色荧光蛋白(GFP)被发现以来,荧光蛋白在生物医学领域已经成为一种重要的荧光成像工具.随着红色荧光蛋白DsRed的出现,各种优化的DsRed突变体和远红荧光蛋白也不断涌现.其中荧光蛋白生色团的形成机制对改建更优的荧光蛋白变种影响很大,对于红色荧光蛋白而言,大多数的红色荧光蛋白的生色团类型为DsRed类似生色团,在此基础上又出现了Far-redDsRed类似生色团.目前,含DsRed类似生色团的荧光蛋白主要有单体红色荧光蛋白、光转换荧光蛋白、斯托克斯红移蛋白、荧光计时器等.这些优化的荧光蛋白作为分子探针可以实现对活细胞、细胞器或胞内分子的时空标记和追踪,已经在生物工程学、细胞生物学、基础医学领域得到广泛应用.本文综述了含DsRed类似生色团的荧光蛋白的研究进展及其应用,以及由此发展起来的远红荧光蛋白在活体显微成像技术中的应用,并展望了荧光探针技术研究的新方向. 展开更多
关键词 Dsred类似生色团 远红荧光蛋白 荧光显微成像
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AsRed2示踪前列腺癌肺转移模型的建立 被引量:1
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作者 刘旭东 曾津 +5 位作者 徐珊 张涛 谢宏俊 马振坤 王新阳 贺大林 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期504-510,共7页
目的:使用携带红色荧光蛋白(AsRed2)的前列腺癌PC-3细胞(PR7细胞)建立可用活体荧光成像技术监测的前列腺癌肺转移模型。方法:分别采用MTT及Transwell实验比较前列腺癌PC-3与PR7细胞体外增殖、迁移及侵袭能力;将20只BALB/c裸鼠随机平均分... 目的:使用携带红色荧光蛋白(AsRed2)的前列腺癌PC-3细胞(PR7细胞)建立可用活体荧光成像技术监测的前列腺癌肺转移模型。方法:分别采用MTT及Transwell实验比较前列腺癌PC-3与PR7细胞体外增殖、迁移及侵袭能力;将20只BALB/c裸鼠随机平均分为4组,分别尾静脉注射不同浓度PR7细胞悬液200μl,A组:1×107/ml,B组:2.5×107/ml,C组:5×107/ml,D组:2.5×107/ml,并于1周后重复注射2.5×107/ml细胞悬液200μl。第2、4、6、8周分别用活体荧光成像技术检测各组肺转移灶形成情况。结果:前列腺癌PC-3细胞与PR7细胞体外增殖、迁移、侵袭能力均无明显差异(P>0.05);第4周D组40%裸鼠用活体荧光成像检测到肺转移灶;第8周,A组20%、B组60%、C组100%、D组100%裸鼠可检测到肺转移灶;通过病理检查证实肺转移灶形成。结论:通过尾静脉注射携带红色荧光蛋白的前列腺癌PR7细胞可成功建立用活体荧光成像技术监测的前列腺癌肺转移模型。 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 活体荧光成像 前列腺癌 肺转移
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小鼠黑色素瘤B16F10-Red细胞株的建立与生物学特性分析 被引量:1
17
作者 吴伶俐 孙永强 +7 位作者 王建红 何向锋 周玉清 郑丽云 赵文静 陈橼 李国兴 施文 《现代肿瘤医学》 CAS 2016年第6期861-864,共4页
目的:构建表达香菇珊瑚红色荧光蛋白(discosomasp red fluorescent protein,DsRed)的小鼠黑色素瘤B16F10-Red细胞株,并检测其生物学特性。方法:用Gen EscortTMⅡ转染试剂将p DsRed质粒导入小鼠黑色素瘤B16F10细胞,G418加压培养联合极限... 目的:构建表达香菇珊瑚红色荧光蛋白(discosomasp red fluorescent protein,DsRed)的小鼠黑色素瘤B16F10-Red细胞株,并检测其生物学特性。方法:用Gen EscortTMⅡ转染试剂将p DsRed质粒导入小鼠黑色素瘤B16F10细胞,G418加压培养联合极限稀释法建立稳定、高水平表达DsRed的单克隆细胞系。FCM检测B16F10和B16F10-Red细胞的细胞周期。比较B16F10-Red和B16F10细胞的克隆球形成能力和小鼠体内致瘤能力。结果:稳定表达DsRed的小鼠黑色素瘤B16F10-Red细胞株基本保持了其亲代细胞的特征,能在C57BL/6小鼠腹部皮下形成肿瘤并继续生长和转移。结论:B16F10-Red细胞株构建成功,其移植瘤模型成瘤率和转移情况同B16F10肿瘤相比无明显差别。 展开更多
关键词 黑色素瘤 B16F10 红色荧光蛋白 肿瘤移植
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耐热木聚糖酶xynB_(64)和红色荧光蛋白Dsred2的融合表达及其应用 被引量:1
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作者 白羽 申宁 《安徽农业科学》 CAS 2012年第7期3891-3893,共3页
[目的]耐热木聚糖酶xynB64的表达研究,探讨利用红色荧光蛋白Dsred2标签简便快捷地检测包涵体复性的效率。[方法]构建重组质粒pET42a-xynB64和pET42a-xynB64-Dsred2,利用宿主菌Rosetta(DE3)进行表达,DNS法测定酶活,并检测其荧光强度和尿... [目的]耐热木聚糖酶xynB64的表达研究,探讨利用红色荧光蛋白Dsred2标签简便快捷地检测包涵体复性的效率。[方法]构建重组质粒pET42a-xynB64和pET42a-xynB64-Dsred2,利用宿主菌Rosetta(DE3)进行表达,DNS法测定酶活,并检测其荧光强度和尿素复性的包涵体。[结果]红色荧光蛋白Dsred2促进了目的蛋白可溶性表达,重溶包涵体经激发后发射光波长在583 nm,光强度与可溶性大致成正比。[结论]研究表明红色荧光蛋白Dsred2在包涵体复性中可作为报告蛋白,该结果为工业化复性包涵体提供了检测依据。 展开更多
关键词 耐热木聚糖酶xynB64 红色荧光蛋白Dsred2 原核表达 包涵体
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红色荧光蛋白基因DsRED在核桃植株再生过程中的表达稳定性 被引量:2
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作者 任飞 张佳琦 +4 位作者 胡恒康 梁璧 黄有军 娄和强 张启香 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第12期166-176,共11页
【目的】报告基因是编码易被检测的蛋白质或酶的基因。红色荧光蛋白基因DsRED因其优异的适用特性已作为报告基因广泛应用于动植物以及酵母等真核细胞内基因表达的研究。课题组前期已将DsRED成功转入核桃体细胞胚,阳性体胚生长及增殖正... 【目的】报告基因是编码易被检测的蛋白质或酶的基因。红色荧光蛋白基因DsRED因其优异的适用特性已作为报告基因广泛应用于动植物以及酵母等真核细胞内基因表达的研究。课题组前期已将DsRED成功转入核桃体细胞胚,阳性体胚生长及增殖正常、阳性再生植株长势良好。本研究通过对核桃体细胞胚和再生植株中DsRED基因的跟踪研究,探讨DsRED作为报告基因在核桃再生植株中的表达是否稳定以及对再生植株的后续生长和发育是否具有影响,同时为进一步拓宽DsRED作为报告基因的应用范围提供参考。【方法】通过荧光显微镜检测核桃体细胞胚、继代培养3年的组培苗以及3年生温室苗的DsRED荧光表达的稳定性,并通过PCR、qRT-PCR以及Western Blot技术检测DsRED基因及其编码蛋白在核桃体细胞胚和组培苗中表达的稳定性。同时,通过对DsRED组培苗及3年生苗的形态指标进行测定,从而明确DsRED作为外源报告基因的可靠性。【结果】核桃DsRED体细胞胚在白光下呈粉红至红色,荧光下呈明亮的红色;与对照相似,DsRED体细胞胚发育也经历了球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚阶段,且形态正常。DsRED组培苗和3年生苗在荧光下植株表面呈现明亮的红色,而对照无激发,视野中呈现黑色,且白光下二者表型一致。DsRED组培苗和3年生苗的茎、叶生长参数与对照相比无显著差异。显微结构荧光检测发现,DsRED在组培苗和3年生苗营养器官的维管束部位表达量较高。对核桃DsRED体胚和组培苗进行PCR检测发现DsRED体胚和组培苗均可扩增获得目的条带,与预期条带大小一致(681 bp);qRT-PCR检测结果显示,DsRED组培苗各组织及DsRED体胚的DsRED mRNA表达量无显著性差异,而对照体胚和组培苗中表达量为0。Western Blot检测结果表明,DsRED组培苗和体胚有26 kDa强阳性条带,对照植株中无特异性条带,进一步分析条带灰度,结果表明DsRED组培苗各组织间及DsRED体胚的DsRED表达量无显著性差异,而对照相应结构中表达量均为0。【结论】DsRED基因转入核桃体胚后,可在体胚和继代培养3年的组培苗中正常翻译和稳定表达,3年生温室苗DsRED表达稳定且植株表型正常,表明DsRED是核桃理想的遗传转化报告基因。研究结果可为DsRED作为报告基因在果树中的应用提供参考。 展开更多
关键词 核桃 报告基因 红色荧光蛋白 DSred 体细胞胚 再生植株
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pDsRed1-N1基因核转染兔原代骨髓基质细胞的实验研究 被引量:1
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作者 陈镇洲 徐如祥 +2 位作者 姜晓丹 滕晓华 周虎田 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期881-883,共3页
目的探讨以最近发展起来的核转染技术直接将编码红色荧光蛋白DNA质粒转染到兔原代骨髓基质细胞细胞核内进行基因修饰的可行性。方法从兔股骨抽取骨髓,密度梯度离心法获取原代骨髓基质细胞。以NucleofectorTM技术转染pDsRed1-N1(DsRed组... 目的探讨以最近发展起来的核转染技术直接将编码红色荧光蛋白DNA质粒转染到兔原代骨髓基质细胞细胞核内进行基因修饰的可行性。方法从兔股骨抽取骨髓,密度梯度离心法获取原代骨髓基质细胞。以NucleofectorTM技术转染pDsRed1-N1(DsRed组) ,以同期培养未转染的细胞作为对照组。测定细胞的活力、贴壁率、生长曲线以及转染的效率。结果在转染后48h成功发现DsRed的表达。两组细胞具有相似的形态学变化、贴壁率以及生长曲线。DsRed的表达逐渐增强,至第10天达到最高峰(54·2 %) ,观察1个月未发现表达减弱。结论pDsRed1-N1基因核转染对兔原代骨髓基质细胞的体外增殖无明显影响; DsRed可以作为兔骨髓基质细胞有效的基因表达标记; NucleofectorTM技术是一种简易而高效的转染兔原代骨髓基质细胞的方法。 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 骨髓基质细胞 核转染
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