期刊文献+
共找到69篇文章
< 1 2 4 >
每页显示 20 50 100
用Red/ET重组酶构建基因打靶载体 被引量:11
1
作者 杨建岭 顾淑萍 +4 位作者 陈臣 王铸钢 许燕 费俭 YANG Jian-Ling1, GU Shu-Pir 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期919-924,共6页
基因敲除的小鼠模型是研究基因功能的一种重要资源。采用常规分子克隆的方法建立基因敲除的打靶载体存在构建效率低和难以获得长片段同源臂的缺点。因此快速高效地构建打靶载体,已成为获得特定基因敲除动物模型的关键环节。为研究Resp1... 基因敲除的小鼠模型是研究基因功能的一种重要资源。采用常规分子克隆的方法建立基因敲除的打靶载体存在构建效率低和难以获得长片段同源臂的缺点。因此快速高效地构建打靶载体,已成为获得特定基因敲除动物模型的关键环节。为研究Resp18未知功能分泌肽基因,应用一种新的DNA工程平台——Red/ET同源重组技术来构建其打靶载体,并比较了这一方法在构建不同长度同源臂中的效率。研究表明,Red/ET重组方法构建打靶载体具有很高的效率,可以获得较长的同源臂,并且不会引入突变,有助于获得更高的打靶效率。因此Red/ET重组为构建打靶载体提供了一种新的可靠的方法。 展开更多
关键词 red/ET重组 基因打靶 载体
下载PDF
利用Red同源重组系统构建兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因打靶载体 被引量:1
2
作者 张传山 李峰 +3 位作者 姚刚 郭毅 鲍柳君 陈学进 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期68-76,共9页
利用EL350基因工程菌进行同源重组,成功进行基因敲除已有报道,但利用该系统进行兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)基因突变和基因打靶方面的研究还没有报道。实验首先在已经筛选... 利用EL350基因工程菌进行同源重组,成功进行基因敲除已有报道,但利用该系统进行兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)基因突变和基因打靶方面的研究还没有报道。实验首先在已经筛选到含有兔全长HPRT基因BAC克隆(LBNL1-304M19)的基础上,利用Red重组系统,通过Gap-Repair方式从此克隆上将一段47kb无启动子的HPRT基因组片段(不含有第1个外显子)克隆到pBACLinkSp质粒上,产生pBACLinkSp-rHPRT质粒。然后基于pBACLinkSp-rHPRT质粒,设计不同的同源臂,从而删除了HPRT基因的不同编码区,成功构建了三个不同的HPRT基因打靶载体。同时对利用同源重组技术敲除不同大小的DNA片段的效率进行了研究。基于实验所构建的三个不同的兔HPRT基因打靶载体,为探索兔成纤维细胞和胚胎干细胞基因打靶的适宜条件,及进一步获得兔HPRT基因敲除动物疾病模型奠定了基础。 展开更多
关键词 red重组 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因 基因敲除 载体
下载PDF
Red/ET重组在基因打靶载体快速构建中的应用 被引量:11
3
作者 王军平 张友明 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期953-958,共6页
通过合理应用Red/ET重组技术实现基因打靶载体的快速构建。在Red/ET重组介导下,首先从基因组DNA中将靶基因片段亚克隆至打靶质粒载体中,随后将两端带有50 bp同源臂的抗性筛选基因插入并替换靶基因上的目标序列,如此两步操作即可完成一... 通过合理应用Red/ET重组技术实现基因打靶载体的快速构建。在Red/ET重组介导下,首先从基因组DNA中将靶基因片段亚克隆至打靶质粒载体中,随后将两端带有50 bp同源臂的抗性筛选基因插入并替换靶基因上的目标序列,如此两步操作即可完成一个传统型基因敲除打靶载体的构建;结合Cre-loxP系统,在传统型基因敲除打靶载体的基础上,经过再一轮的Red/ET重组就能够成功实现条件性基因敲除打靶载体的构建。整个实验过程不需要PCR扩增长、短臂序列,也不涉及酶切、连接反应,因此,不仅省时、省力,而且所构建的基因打靶载体序列准确,无突变。实验方法的建立为加速后基因组时代的基因功能研究提供了一条捷径。 展开更多
关键词 基因打靶载体构建 red/ET重组 基因敲除
下载PDF
表达红色荧光蛋白DsRed报告基因的逆转录病毒载体的构建和在肝干细胞体内示踪中的应用 被引量:1
4
作者 李文林 苏娟 +2 位作者 陶欣荣 Joseph T Lau 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期240-242,共3页
目的:建立表达红色荧光蛋白DsRed的逆转录病毒载体,并对肝原始细胞进行体外标记和体内示踪研究。方法:将pDsRed1 1载体中的DsRed片段克隆到逆转录病毒载体pLNCG C1中构建了pLNCG DsRed载体。将该载体导入Phoenix包装细胞,进而采用乒乓... 目的:建立表达红色荧光蛋白DsRed的逆转录病毒载体,并对肝原始细胞进行体外标记和体内示踪研究。方法:将pDsRed1 1载体中的DsRed片段克隆到逆转录病毒载体pLNCG C1中构建了pLNCG DsRed载体。将该载体导入Phoenix包装细胞,进而采用乒乓转染的方法感染包装细胞PT67,获得高滴度稳定产毒的PT67 细胞系。结果:利用PT67 细胞系产生的病毒上清可以高效的感染体外培养的肝原始细胞系。将这些DsRed标记的肝原始细胞移植到小鼠损伤肝脏中,4周后可以在再生肝脏中清晰地观察到具有红色荧光的外源细胞。结论:由于肝脏组织没有红色自发荧光,用DsRed标记肝原始细胞进行肝内示踪时背景干扰小。 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 基因.报告 逆转录病毒载体 肝干细胞
下载PDF
Red/ET重组AHBA生物合成基因簇打靶载体的构建与鉴定 被引量:1
5
作者 王广林 张会图 +1 位作者 张金池 王以光 《安徽师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2009年第6期569-574,共6页
为确定3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)生物合成基因簇在链霉菌中与次生代谢产物的关系,运用PCR技术,从33株AHBA合酶基因阳性菌株扩增与AHBA生物合成基因簇中编码AHBA合酶(A)、氧化还原酶(O)、磷酸化酶(P)基因,获得24株AOP基因阳性菌株.根... 为确定3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)生物合成基因簇在链霉菌中与次生代谢产物的关系,运用PCR技术,从33株AHBA合酶基因阳性菌株扩增与AHBA生物合成基因簇中编码AHBA合酶(A)、氧化还原酶(O)、磷酸化酶(P)基因,获得24株AOP基因阳性菌株.根据靶基因A基因下游和P基因上游同源序列设计50 bp引物,中间插入卡那霉素抗性基因的DNA片段,进行PCR,获得外源DNA片段.经过电转化,将外源DNA片段和pKC1139-AOP重组质粒共转入含重组酶质粒大肠杆菌HS996/pSC101-BAD-gba-(Tet).在Red重组酶的作用下,外源DNA片段与重组质粒pKC1139-AOP上的AHBA基因簇的同源区域重组,构建了AHBA基因簇打靶载体.研究显示了Red/ET重组工作效率高、操作简单、精确的优点,可大大缩短构建打靶载体的时间. 展开更多
关键词 red/ET重组 AHBA基因簇 打靶载体 链霉菌
下载PDF
Automatic Red Tide Algae Recognition
6
作者 JIANG Tao WANG Cheng +3 位作者 WANG Bo-liang XIE Jie-zhen JIAO Nian-zhi LUO Ting-wei 《Chinese Journal of Biomedical Engineering(English Edition)》 2010年第1期22-29,共8页
This paper presents a real-time alga classifier designed for flow-cytometry-based marine alga monitoring systems.The difficulties of such classification include:1)the shape of the same algae category is deformable,and... This paper presents a real-time alga classifier designed for flow-cytometry-based marine alga monitoring systems.The difficulties of such classification include:1)the shape of the same algae category is deformable,and largely variant due to the individual differences and mature stage;2)the image of algae may vary due to different 3D positions to the imaging plane and partial occlusion;3)the images also contain unknown algae and contaminations.In the proposed method,several shape features were developed,a naive Bayes classifier(NBC)was trained to reject the contaminative objects and unknown algae,and a support vector machine(SVM)was used to classify the algae to taxonomic categories.Our approach achieved greater 90%accuracy on a collection of algal images.The test on contaminated algal image set(containing unknown algae and non-algae objects such as sands)also demonstrated promising results. 展开更多
关键词 red tide ALGA support vector machine(SVM) feature extraction
下载PDF
基于主成分分析的果蝇算法优化支持向量机回归的红枣产量预测 被引量:1
7
作者 李晋泽 赵素娟 +3 位作者 李宁 李俊成 刘森 马继东 《科学技术与工程》 北大核心 2024年第4期1425-1432,共8页
随着大数据技术和人工智能的快速发展,针对当前红枣产量预测模型精度低、模型优化时间过长等问题,以山西省1993—2020年的红枣产量及17个维度的因素作为基础数据,提出一种基于主成分分析的果蝇算法优化支持向量机回归(principal compone... 随着大数据技术和人工智能的快速发展,针对当前红枣产量预测模型精度低、模型优化时间过长等问题,以山西省1993—2020年的红枣产量及17个维度的因素作为基础数据,提出一种基于主成分分析的果蝇算法优化支持向量机回归(principal component analysis-fruit fly optimization algorithm-support vector regression,PCA-FOA-SVR)的红枣产量预测模型。首先利用主成分分析(principal component analysis,PCA)对数据进行降维处理,以5维的指标作为输入变量,产量作为输出变量;其次以支持向量机回归(support vector regression,SVR)为基础模型,利用果蝇优化算法(fruit fly optimization algorithm,FOA)对SVR参数惩罚因子c和核函数参数g进行寻优,构建PCA-FOA-SVR模型。对试验结果进行验证。发现PCA-FOA-SVR的均方根误差(root mean square error,RMSE)、平均绝对误差(mean absolute error,MAE)、决定系数R 2分别为3.11、3.01、0.96,SVR的各指标分别为5.33、4.07、0.9,分别提高了41.7%、26%、6.7%,最后通过GM(1,1)对各维度的数据进行预测,利用PCA-FOA-SVR模型对未来10年山西省红枣产量进行预测,结果显示在2025年红枣产量会达到一个峰值,对后续相关研究提供了一定的科学依据。 展开更多
关键词 红枣产量预测 支持向量机回归(SVR) 果蝇算法(FOA) 主成分分析(PCA)
下载PDF
高分六号宽幅遥感影像在复杂山区地物分类中的应用
8
作者 张禄明 王宝江 +2 位作者 孙洪 钟昆 李丹 《安徽农学通报》 2024年第17期63-68,共6页
为评估其在多类地物分类中的有效性,本研究利用GF-6宽幅遥感影像(WFV),对四川西南部复杂山区开展大尺度地物分类研究。通过波段组合和植被指数计算,提升对植被健康状况的监测能力。特别是红边波段(B5)和黄波段(B8)的引入,为植被和土地... 为评估其在多类地物分类中的有效性,本研究利用GF-6宽幅遥感影像(WFV),对四川西南部复杂山区开展大尺度地物分类研究。通过波段组合和植被指数计算,提升对植被健康状况的监测能力。特别是红边波段(B5)和黄波段(B8)的引入,为植被和土地利用分类带来了技术优势。在监督分类方法方面,采用了马氏距离、极大似然法、卷积神经网络(CNN)和支持向量机(SVM)4种方法。结果表明,SVM在处理高维光谱数据和复杂地形条件下表现出色,分类精度最高。马氏距离和极大似然法的分类精度较低,主要受数据假设和样本量限制的影响,而神经网络方法的表现不佳,主要是由于训练样本数量和多样性的不足,导致模型的泛化能力不强。综合以上结果,GF-6WFV影像在地物分类中展现出优异性能,尤其在精准农业和林业管理方面。未来研究应关注多源遥感数据的整合,优化算法以提升分类精度,并减少计算资源消耗。 展开更多
关键词 山区地物分类 宽幅遥感影像 多光谱信息 红边波段 支持向量机监督分类
下载PDF
基于Sentinel-2多时相遥感影像的冬小麦种植面积监测
9
作者 于天祥 樊红 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第9期1653-1661,共9页
针对农业保险精准理赔对农作物真实种植面积的数据需求,提出1种快速有效提取冬小麦分布与种植面积的方法。以湖北省荆州市荆州区作为研究区,选取2019-2020年的Sentinel-2影像,计算多时相红边植被指数与黄度值,并将其作为特征用于优化分... 针对农业保险精准理赔对农作物真实种植面积的数据需求,提出1种快速有效提取冬小麦分布与种植面积的方法。以湖北省荆州市荆州区作为研究区,选取2019-2020年的Sentinel-2影像,计算多时相红边植被指数与黄度值,并将其作为特征用于优化分类模型,利用随机森林法、支持向量机算法提取冬小麦的分布图,对比分析不同方法的分类结果。结果表明,包括红边指数在内的多时相植被指数的加入可以有效提高小麦地块分类的完整度;相比于支持向量机,用随机森林法提取的小麦地块边界更清晰、完整且准确性更高;基于多时相特征的随机森林法分类结果的总精度、Kappa系数分别为97.49%、0.9686;不同分类方法提取的分类小麦面积与统计年鉴记录的小麦面积的比值为91.28%。由研究结果可以看出,归一化植被指数(NDVI)、归一化红边指数(NDre1)、新型倒红边叶绿素指数(IRECI)和黄度值是随机森林模型中重要性较高的分类特征。 展开更多
关键词 冬小麦分布图提取 红边植被指数 Sentinel-2 随机森林 支持向量机
下载PDF
基于SVDD和SVM的赤潮藻类识别 被引量:6
10
作者 江涛 王程 +3 位作者 王博亮 谢杰镇 焦念志 骆庭伟 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期47-51,共5页
提出了一种基于支持向量机(SVM)和支持向量域描述(SVDD)的赤潮藻类分类系统.该系统是赤潮藻类流式监测系统的子系统.设计这套系统的主要难点在于:1)同一种藻类的形态由于个体差异和生长期不同而不同;2)藻类图像是任意位置三维目标在成... 提出了一种基于支持向量机(SVM)和支持向量域描述(SVDD)的赤潮藻类分类系统.该系统是赤潮藻类流式监测系统的子系统.设计这套系统的主要难点在于:1)同一种藻类的形态由于个体差异和生长期不同而不同;2)藻类图像是任意位置三维目标在成像平面的投影,投影存在任意性并可能产生局部遮挡;3)藻类图像包含非目标藻类和杂质.在特征提取算法的基础上,首先对输入的藻类采用SVDD进行拒识或接受处理,最后针对接受的藻类再利用基于超平面分割的SVM分类器进行分类判决.实验证明:基于SVM和SVDD的赤潮藻类分类系统分类精度更高并具有较好的拒识性能,是一种较好的藻类自动分类方法. 展开更多
关键词 赤潮 支持向量数据域 特征提取 流式细胞技术
下载PDF
基于支持向量机的红虫识别研究 被引量:2
11
作者 孙兴滨 吕伟民 +1 位作者 赵晶莹 崔福义 《哈尔滨商业大学学报(自然科学版)》 CAS 2009年第1期21-23,29,共4页
传统的红虫检测一般基于手工方式,效率低下,针对这种情况提出了一种基于支持向量机的红虫识别方法.基于小波分解提取能量特征结合核函数对红虫进行识别,试验结果表明识别率达到了86%,取得良好的效果.
关键词 红虫识别 支持向量机(SVM) 生物识别
下载PDF
小鼠性激素结合球蛋白条件基因打靶载体的构建 被引量:1
12
作者 王越 金镇 +1 位作者 孙磊 郑晋华 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期203-208,213,共7页
目的构建小鼠性激素结合球蛋白(Shbg)条件基因打靶载体。方法运用ET克隆的方法构建Shbg基因第4-7号外显子两侧插入loxp位点的条件性剔除载体。首先以BAC DNA为模板克隆出Shbg及其上、下游基因并打靶质粒载体(p BR322-MKAB),利用该质粒和... 目的构建小鼠性激素结合球蛋白(Shbg)条件基因打靶载体。方法运用ET克隆的方法构建Shbg基因第4-7号外显子两侧插入loxp位点的条件性剔除载体。首先以BAC DNA为模板克隆出Shbg及其上、下游基因并打靶质粒载体(p BR322-MKAB),利用该质粒和BAC克隆,通过同源重组方式,获得套取质粒(p BR322-Shbg-Re);再分别以PL452及PL451为模板扩增出含Neo片段,经过再一轮的Red/ET重组成功实现条件性基因敲除打靶载体(p BR322-MK-SHBG-cko)的构建。结果经多个限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,构建的p BR322-MK-AB、p BR322-Shbg-Re、SHBG-Ln重组质粒和Shbg条件基因打靶载体(p BR322-MK-SHBG-cko)结构正确,与设计相符。结论成功构建了小鼠Shbg条件基因打靶载体,为后续Shbg基因条件敲除小鼠模型的构建奠定了基础。 展开更多
关键词 性激素结合球蛋白 条件性基因敲除 载体 red/ET重组
下载PDF
1株asdA缺陷型减毒鼠伤寒沙门氏菌作为核酸疫苗载体的构建与鉴定(英文) 被引量:2
13
作者 于斌 罗语思 +4 位作者 彭晓 袁硕峰 牛憨笨 屈军乐 张科 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期663-668,共6页
目的利用载体-宿主平衡致死系统,将1株香港分离的野生型沙门氏菌(S129)构建为减毒核酸疫苗载体。方法以细菌生化反应和血清学方法鉴定S129为鼠伤寒沙门氏菌;以λ-RED同源重组方法靶向敲除S129株的asdA基因,并以卡那霉素抗性基因代替;通... 目的利用载体-宿主平衡致死系统,将1株香港分离的野生型沙门氏菌(S129)构建为减毒核酸疫苗载体。方法以细菌生化反应和血清学方法鉴定S129为鼠伤寒沙门氏菌;以λ-RED同源重组方法靶向敲除S129株的asdA基因,并以卡那霉素抗性基因代替;通过菌落PCR鉴定后挑取阳性克隆asdA缺陷型减毒鼠伤寒沙门氏菌(asdAΔS129),在含2,6-二氨基庚二酸(2,6-diaminopimelic acid,DAP)或无DAP的LB培养基中培养,与野生株S129对比生长曲线以验证asdAΔS129构建的成功;以S129和asdAΔS129攻击BALB/c小鼠验证asdAΔS129减毒情况;结果菌落PCR鉴定得到阳性克隆,asdAΔS129必需外源性添加DAP方能生长;asdAΔS129不能致死BALB/c小鼠,得到成功的减毒;结论成功将1株野生型沙门氏菌构建成asdA缺陷型减毒核酸疫苗载体,并在体外和体内实验中验证,为下一步的疫苗呈递和肿瘤治疗实验提供了合适的载体。 展开更多
关键词 减毒鼠伤寒沙门氏菌 核酸疫苗载体 λ-red同源重组
下载PDF
利用GFP/RFP双荧光指示载体鉴定特异性启动子功能 被引量:6
14
作者 尹涛 秦巧平 +2 位作者 张上隆 刘敬梅 陈大明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2106-2110,共5页
在基因表达定位或启动子调控模式的研究中,多以gusA作为报告基因。但由于部分组织中高内源GUS背景活性或转化手段的限制,使判断基因表达定位或调控时存在很大误差。为了解决上述问题,本实验将报告基因绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(R... 在基因表达定位或启动子调控模式的研究中,多以gusA作为报告基因。但由于部分组织中高内源GUS背景活性或转化手段的限制,使判断基因表达定位或调控时存在很大误差。为了解决上述问题,本实验将报告基因绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)融合构建双荧光标记瞬时表达载体pBI221-RFP/GFP。该载体以CaMV35S启动子驱动GFP确定转化效率,通过鉴定阳性个体的红色荧光活性分析目的基因或启动子的表达模式。并通过番茄E8和西瓜AGPL1果实特异启动子验证了该载体在启动子调控模式研究中的应用可行性。结果表明pBI221-RFP/GFP是一个可以在基因和启动子功能验证中应用的高效瞬时表达载体。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 红色荧光蛋白 瞬时表达载体 特异性启动子
下载PDF
带红色荧光蛋白靶向线粒体载体的构建与表达 被引量:1
15
作者 郝好杰 凌贤龙 +4 位作者 徐元基 杜芝燕 王妍 陈惠华 陆应麟 《生物技术通讯》 CAS 2005年第4期371-373,共3页
选取由核表达的线粒体蛋白细胞色素C氧化亚单位Ⅷ(COX8)的前导序列为靶序列,从人胚胎肺成纤维细胞中扩增出COX8的前导序列,插入到pcDNA3.1/myc-HisA中,并将pDsRED1-n1中的红色荧光蛋白序列RFP克隆至COX8的下游,形成融合蛋白。在脂质体... 选取由核表达的线粒体蛋白细胞色素C氧化亚单位Ⅷ(COX8)的前导序列为靶序列,从人胚胎肺成纤维细胞中扩增出COX8的前导序列,插入到pcDNA3.1/myc-HisA中,并将pDsRED1-n1中的红色荧光蛋白序列RFP克隆至COX8的下游,形成融合蛋白。在脂质体的介导下,将重组载体转染至肿瘤细胞中,在荧光显微镜下观察其在细胞内的表达及分布情况。构建的靶向线粒体的载体以及以红色荧光蛋白为报告基因的靶向线粒体的载体,经酶切、DNA序列测定,结果表明构建正确。将pcDNAmito-RFP转染到HeLa细胞的线粒体中,16h即可见散在荧光,72h达高峰,第10d开始减弱。以上结果表明成功构建了以红色荧光蛋白为报告基因的线粒体靶向的特异表达载体,在靶序列的引导下将红色荧光蛋白输入到线粒体中,为进一步对线粒体疾病的基因治疗研究提供了重要工具。 展开更多
关键词 线粒体 表达载体 靶向 红色荧光蛋白
下载PDF
用于植物基因研究的mCherry表达载体构建及定位表达 被引量:1
16
作者 于颖 刘佳欣 +2 位作者 周美琪 赵磊飞 王超 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期194-199,共6页
荧光蛋白在生物学研究中具有广泛的应用和重要的作用,其中红色荧光蛋白mCherry因其颜色和良好的特性,对于植物基因研究具有重要的使用价值,本研究将mCherry基因构建到pBI121植物表达载体系统中,构建了pBI121MCS-mCherry载体。利用基因... 荧光蛋白在生物学研究中具有广泛的应用和重要的作用,其中红色荧光蛋白mCherry因其颜色和良好的特性,对于植物基因研究具有重要的使用价值,本研究将mCherry基因构建到pBI121植物表达载体系统中,构建了pBI121MCS-mCherry载体。利用基因枪转化法转入洋葱表皮进行表达验证,显微镜观察结果显示整个洋葱细胞具有红色荧光,证明该载体能够在植物细胞中表达红色荧光蛋白。利用双酶切连接法将转录因子BpMYB4基因构建到该载体上,得到融合表达载体pBI121MCS-mCherry-BpMYB4,在洋葱表皮中表达,结果显示细胞核具有红色荧光,证明该载体能够准确表达融合蛋白,进行亚细胞定位。同时融合基因时不再需要中间载体,构建简便,引入的KpnⅠ酶切位点,增加了可选择性。因此该载体可用于植物基因表达定位及转基因植株筛选研究中,为今后的白桦基因组学研究提供了材料。 展开更多
关键词 MCHERRY 红色荧光蛋白 植物表达载体构建 细胞定位
下载PDF
携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体的构建及其体外试验研究
17
作者 卢建溪 阳莉 +1 位作者 钱师宇 王强 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期2045-2048,共4页
目的:采用体外连接技术构建含红色荧光蛋白(RFP)报告基因的重组腺病毒载体,为基因治疗与基因疫苗研究提供重要工具。方法:将pTurboRFP-N上的含RFP基因片段,经酶切连接定向克隆至转移载体pShuttle上,构成重组质粒pShuttle-TurboRFP-N。用... 目的:采用体外连接技术构建含红色荧光蛋白(RFP)报告基因的重组腺病毒载体,为基因治疗与基因疫苗研究提供重要工具。方法:将pTurboRFP-N上的含RFP基因片段,经酶切连接定向克隆至转移载体pShuttle上,构成重组质粒pShuttle-TurboRFP-N。用I-Ceu I/PI-Sce I双酶切重组质粒pShuttle-TurboRFP-N和骨架质粒pH5'040 pkGFP-Ⅱ,回收目的片段,连接,获得重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N。将其线性化后,经脂质体介导转染至AD293细胞内包装出重组腺病毒颗粒。通过荧光显微镜观察其在AD293细胞内的包装效率和RFP表达情况。扩增并再次感染AD293细胞检测病毒颗粒感染能力,并测定其生物活性及滴度。将所构建的重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N与对照腺病毒载体AdH5.CMV.EGFP在体外感染人肺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MDA-MB-231。通过荧光蛋白RFP和EGFP的表达,比较它们对以上肿瘤细胞的感染效率。结果:经酶切鉴定,证明已正确构建重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N;经AD293细胞包装成具有感染性的病毒颗粒,并能在真核细胞中高效表达目的基因;扩增纯化后获得重组腺病毒颗粒数为3.6×1015vp/L,滴度达1.8×1013pfu/L。重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N感染人肺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MDA-MB-231的感染效率,高于对照腺病毒载体AdH5.CMV.EGFP(P<0.05)。结论:成功构建了携带RFP报告基因的重组腺病毒载体,并能够在AD293细胞中高效地表达,对肿瘤细胞的感染效率高。RFP对GFP是一种很好的代替和补充,为基因治疗与基因疫苗研究提供更多的荧光标签。 展开更多
关键词 腺病毒载体 红色荧光蛋白质 基因重组
下载PDF
BAI1基因敲除打靶载体的快速构建
18
作者 雷立芳 李大力 +1 位作者 周军媚 叶湘漓 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期95-101,共7页
BAI1(脑血管生成抑制因子1)因其具有抑制血管生成的作用而得名,研究表明肿瘤的发生可能与BAI1的低表达有关.为了进一步探索BAI1的作用机制,运用改良的Red重组系统和低拷贝中间载体,利用50 bp的同源重组序列直接从BAC载体中克隆长片段的... BAI1(脑血管生成抑制因子1)因其具有抑制血管生成的作用而得名,研究表明肿瘤的发生可能与BAI1的低表达有关.为了进一步探索BAI1的作用机制,运用改良的Red重组系统和低拷贝中间载体,利用50 bp的同源重组序列直接从BAC载体中克隆长片段的小鼠基因组序列;将得到的基因组序列再次通过重组和改造,构建了BAI1基因的完全敲除并带有报告基因的打靶载体,为后续的构建BAI1基因敲除小鼠模型、在动物体内研究基因功能奠定了基础. 展开更多
关键词 基因敲除 打靶载体 red重组酶
下载PDF
基于支持向量机的航空高光谱赤潮监测 被引量:2
19
作者 孙洁 张宏磊 《微计算机信息》 北大核心 2008年第21期225-227,共3页
针对航空遥感高光谱图像大数据量快速分析的需求,本文提出了一种基于支持向量机(SVM)的航空高光谱赤潮监测方法。首先,利用对数残差法(LRC)归一化高光谱数据。然后,通过RPCL(Rival Penalized Competitive Learning)聚类分析划分训练样... 针对航空遥感高光谱图像大数据量快速分析的需求,本文提出了一种基于支持向量机(SVM)的航空高光谱赤潮监测方法。首先,利用对数残差法(LRC)归一化高光谱数据。然后,通过RPCL(Rival Penalized Competitive Learning)聚类分析划分训练样本空间从而形成训练样本集,并以支持向量机(SVM)作为识别器,试验结果证明了该方法的有效性。 展开更多
关键词 高光谱数据 赤潮监测 支持向量机
下载PDF
Ⅱ型糖尿病人与大鼠红细胞拉曼光谱学比较 被引量:1
20
作者 王磊 刘贵栋 +7 位作者 穆欣 肖洪彬 齐超 张思琪 牛雯颖 姜广坤 冯月男 卞敬琦 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第10期2776-2780,共5页
使用激光共聚焦拉曼光谱仪测量正常大鼠红细胞、正常人红细胞、糖尿病STZ造模大鼠红细胞、糖尿病四氧嘧啶造模大鼠红细胞和人Ⅱ型糖尿病红细胞的拉曼光谱,应用主成分分析(principal component analysis,PCA)结合支持向量机(support vect... 使用激光共聚焦拉曼光谱仪测量正常大鼠红细胞、正常人红细胞、糖尿病STZ造模大鼠红细胞、糖尿病四氧嘧啶造模大鼠红细胞和人Ⅱ型糖尿病红细胞的拉曼光谱,应用主成分分析(principal component analysis,PCA)结合支持向量机(support vector machines,SVM)分类器对数据进行判别分析,然后采用类间距离判断两种造模方法与人Ⅱ型糖尿病的接近程度。结果发现糖尿病红细胞与正常红细胞的拉曼光谱存在明显差异,糖尿病在酰胺ⅥCO变形振动谱带处峰高显著,并在酰胺ⅤN—H变形振动谱带处谱线出现偏移,属于磷脂的脂酰基C—C骨架1 130cm-1谱线增强,1 088cm-1谱线强度减弱,说明糖尿病红细胞膜的通透性增强。PCA结合SVM可以很好地区分以上5类红细胞的拉曼光谱,分类器测试结果表明分类准确度达100%。通过分别计算两种造模方法与人Ⅱ型糖尿病的类间距离,发现STZ造模法更接近人Ⅱ型糖尿病。由此得出结论:拉曼光谱法可以用于糖尿病诊断,大鼠糖尿病STZ造模法更接近人类Ⅱ型糖尿病。 展开更多
关键词 拉曼光谱 红细胞 主成分分析 支持向量机
下载PDF
上一页 1 2 4 下一页 到第
使用帮助 返回顶部