pEGFP-ING4真核表达载体的构建及在人脐静脉内皮细胞中的表达

目的构建携带生长抑制因子4(ING4)基因的真核表达载体pEGFP-ING4并转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),为进一步研究ING4对胶质瘤血管生成影响提供基础。方法提取人胎盘细胞中总RNA,RT-PCR扩增ING4并克隆至pEGFP-C2载体,酶切电泳鉴定出阳性克隆送测序,利用靶向转染试剂jetPEI-HUVEC转染HUVEC,通过免疫组化检测转染细胞中ING4的表达。结果 成功扩增ING4基因,基因全长747 bp。重组质粒pEGFP-ING4的酶切鉴定及测序结果均证明ING4基因成功克隆到真核表达载体中。酶切片段电泳结果表明:目的条带与ING4的开放读码框大小相符;测序结果和ING4的开放读码框比对相似性为100%。转染重组质粒后的HUVEC中ING4蛋白表达水平增强。结论本实验成功构建携带ING4基因的真核表达载体pEGFP-ING4,并可在HUVEC中获得ING4蛋白的增强表达。

汉族与壮族新生儿耳聋基因SLC26A4突变对比

目的比较汉族与壮族新生儿耳聋基因溶质载体家族26成员4(SLC26A4)的突变情况。方法选取汉族新生儿2784例(汉族组)、壮族新生儿1305例(壮族组)。分娩时留取新生儿脐带血制作干血片,提取DNA行耳聋基因芯片检测SLC26A4基因突变位点,包括IVS7-2A>G、1229C>T、1174A>T、IVS15+5G>A、2168A>G、1226G>A、1975G>C、2027T>A。比较两组突变基因SLC26A4及突变位点的基因频率。结果壮族组检出SLC26A4基因突变3例,其中IVS7-2A>G杂合子2例、1229C>T杂合子1例;汉族组检出SLC26A4基因突变26例,其中IVS7-2A>G杂合子19例、1229C>T杂合子1例、2168A>G杂合子4例、1174A>T杂合子1例、IVS15+5G>A杂合子1例。均未检出纯合子、复合杂合突变及1226G>A、1975G>C、2027T>A突变。壮族组突变基因SLC26A4以及突变位点IVS7-2A>G的基因频率均低于汉族组(均P<0.05),但两组突变位点2168A>G、1229C>T、1174A>T、IVS15+5G>A的基因频率差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论壮族新生儿的耳聋基因SLC26A4突变热点为IVS7-2A>G、1229C>T,而汉族新生儿突变热点为IVS7-2A>G、2168A>G,且壮族新生儿突变基因SLC26A4及突变位点IVS7-2A>G的基因频率均低于汉族新生儿。

SLC6A4基因rs2020939多态性与卒中后抑郁相关性的研究

目的探讨SLC6A4基因的单核苷酸多态性位点rs2020939与卒中后抑郁（PSD）的相关性。方法本研究纳入246例首次发生脑梗死的患者，入院时登记患者基本资料、脑梗死病灶、美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分和脑血管病危险因素等，入院时和随访后3个月均采用汉密尔顿抑郁量表（HAMD）进行抑郁评分，根据3个月后HAMD评分将脑梗死患者分成卒中后抑郁组（n=86）和卒中后无抑郁组（n=160）。运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术对rs2020939进行基因分型。用单因素和多因素Logistic回归模型来分析卒中后抑郁的危险因素。结果年龄为卒中后抑郁的保护因素（P=0．0047，OR=0．977，95％可信区间0．955—1．000），NIHSS评分（P=0．00，OR=1．386，95％可信区间1．249～1．583）与PSD有关。rs2020939多态位点基因型和等位基因在卒中后抑郁组和卒中后无抑郁组中的分布均有显著性差异（基因型：Х^2=10．007，P=0．007；等位基因：Х^2=10．551，P=0．001）。结论除了患者年龄、脑梗死后病情严重程度与PSD有关外，还发现SLC6A4基因rs2020939位点多态性与淮海地区汉族人群卒中后抑郁的发病相关，该位点可能是PSD的易感基因。

再生胰岛衍生家族成员4在不同分子分型乳腺癌中的表达及其与预后的关系

目的再生胰岛衍生家族成员4(Reg Ⅳ)与多种肿瘤的发生发展密切相关,但在浸润性乳腺癌中鲜见报道。文中旨在检测Reg Ⅳ在腺腔A型(LA)、腺腔B型(LB)、HER-2过表达型(HER-2+)和三阴性(TNBC)4种不同分子分型乳腺癌中的表达情况及与临床病理特征、生存预后之间的关系。方法收集2011年3月至2017年10月连云港市第一人民医院病理科284例乳腺癌患者的病理资料。分析Reg Ⅳ在不同分子分型(LA、LB、HER-2+和TNBC型)中的表达情况及与临床病理特征之间的关系;分析数据库内Reg ⅣmRNA在乳腺癌中的表达水平及与患者预后的关系。结果 Reg Ⅳ在LA型、LB型、HER-2+及TNBC型乳腺癌中的阳性率分别为52.11%、50.00%、65.22%、20.00%,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。Reg Ⅳ在乳腺癌中的表达与肿瘤直径、淋巴结转移、TNM分期相关(P<0.05)。Reg Ⅳ高表达的乳腺癌患者复发风险明显低于低表达者(HR=0.59,95%CI:0.50～0.69),进一步分析发现Reg Ⅳ高表达的LA乳腺癌患者复发风险明显低于低表达者(HR=0.63,95%CI:0.48～0.82),Reg Ⅳ高表达的LB乳腺癌患者复发风险明显低于低表达者(HR=0.56,95%CI:0.40～0.76),Reg Ⅳ高表达的TNBC乳腺癌患者复发风险明显低于低表达者(HR=0.51,95%CI:0.36～0.71)。结论 Reg Ⅳ可为乳腺癌的分子分型诊断提供参考,并可作为评估乳腺癌不同分子分型患者预后良好的指标之一。

RegⅣ、EGFR和Survivin在结直肠腺瘤癌变过程中的表达及意义

目的研究再生基因Ⅳ(RegⅣ)、表皮生长因子受体(EGFR)及Survivin在结直肠腺瘤癌变过程中的表达,并分析其与结直肠腺瘤及结直肠癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学结合组织芯片法检测结直肠正常黏膜(150例)、腺瘤(77例)、结直肠癌(150例)RegⅣ、EGFR及Survivin的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果 RegⅣ、EGFR、Survivin在结直肠正常黏膜、腺瘤及癌组织中,表达逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。RegⅣ、Survivin与结直肠腺瘤大小及分级相关,EGFR仅与腺瘤的分级相关;RegⅣ、EGFR与结直肠癌的分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关,Survivin与结直肠癌的淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05),而3者与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤大小及浸润深度无关(P>0.05)。结直肠腺瘤组织内RegⅣ、EGFR、Survivin 3者无相关性(P>0.05);结直肠癌组织内RegⅣ与EGFR、RegⅣ与Survivin、EGFR与Survivin表达呈正相关(P<0.05)。结论 RegⅣ、EGFR及Survivin在结直肠腺瘤癌变过程中逐渐升高,提示3者共同参与结直肠腺瘤癌变的发生,且与结直肠癌的TNM分期密切相关,联合检测有利于对结直肠癌的预后进行评估,并为研发靶向药物提供理论支持。

人再生基因蛋白Ⅳ和细胞角蛋白18在胃癌患者血清中的表达及临床意义

目的探讨人再生基因蛋白Ⅳ（REGⅣ）和细胞角蛋白18（CK18）在胃癌患者血清中的表达及其在疗效监测中的应用价值。方法收集2008年5月-2010年7月在北京肿瘤医院消化肿瘤内科接受化疗的61例晚期胃腺癌患者及32例同期健康成年人的血清标本，采用ELISA法检测胃癌患者化疗前后以及健康对照者的血清REGIV、CK1871水平。所有化疗均为一线治疗，方案以氟尿嘧啶类药物为基础，联合铂类（顺铂或奥沙利铂）加或不加紫杉类的三药或两药联合方案，根据RECIST1．0标准行疗效评价，分为完全缓解（CR）、部分缓解（vR）、稳定（SD）和进展（VD）。结果胃癌组血清REGIV和CK18水平显著高于对照组[P〈0．01，REGIV5．15（2．14—22．55）ng／mlvs2．22（0．02～12．29）ng／ml，CK-18132．29（24．97～473．62）U／Lvs63．05（16．06—294．58）U／L]。在胃癌患者中，有淋巴结转移者的REGⅣ和CK18水平高于无淋巴结转移者（p〈0．05）。61例胃癌患者中，26例对化疗敏感（CR＋PR），35例不敏感（SD＋PD），这两类患者化疗前的REGIV、CK18表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。36例有化疗前后配对血清标本的患者中，CR＋PR患者14例，sD16例，PD6N，各类患者的REGIV、CK18表达水平在化疗前后差异无统计学意义（p〉0．05）。结论REGIV和CK18作为血清标志物对胃癌有一定诊断价值，但两者化疗前水平及化疗前后变化与晚期胃癌疗效无明显相关性。

慢病毒shRNA靶向干扰RegⅣ基因胰腺癌细胞株的构建

目的构建并鉴定再生基因4(regenerating islet-derived family member 4,RegⅣ)短发夹干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体,继而建立稳定干扰RegⅣ基因表达的胰腺癌细胞株PANC-1。方法使用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测RegⅣ基因在胰腺癌细胞株中的表达情况。构建重组靶向干扰RegⅣ基因的shRNA慢病毒表达质粒pGC-shRNA-RegⅣ,用脂质体转染的方法将载体导入胰腺癌细胞,建立稳定表达shRNA的细胞株。使用荧光定量PCR检测干扰效率。RegⅣ基因过表达载体的构建方法为:将获取的目的基因与pEGFP-RegⅣ-3FLAG过表达质粒载体分别进行双酶切,利用电泳回收双酶切产物,转化感受态细胞并进行测序验证,验证成功后,使用Western blot检测其在293T细胞中的表达强度。结果 PCR结果显示RegⅣ在PANC-1中表达最高,在BxPC-3中表达最低。测序验证pGC-shRNA-RegⅣ重组质粒构建成功。将重组质粒稳定转染入胰腺癌细胞株PANC-1后能明显抑制RegⅣmRNA表达水平。过表达载体pEGFP-N1-3FLAG-RegⅣ合成成功后进行Western blot鉴定,验证pEGFP-N1-3FLAG-RegⅣ过表达载体构建成功。过表达RegⅣ基因转染BxPC-3后,与空质粒组相比,RegⅣ表达量明显提高。结论成功建立了靶向稳定干扰RegⅣ基因表达的shRNA胰腺癌细胞株PANC-1。

趋化素样因子超家族8研究进展

趋化素样因子超家族(CMTM)是北京大学人类疾病基因研究中心在国际上首次报道的新基因家族,CMTM8是该家族成员,其基因编码产物具有潜在的4次跨膜蛋白结构,是一个新的肿瘤抑制基因。CMTM8在多数肿瘤细胞系和组织中表达明显下调或不表达,过表达可抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭功能。CMTM8抗肿瘤的机制尚未完全明确,可能参与多个与癌症发生发展密切相关的信号通路。对CMTM8与肿瘤发生发展机制的进一步研究具有重要意义,其有望成为肿瘤基因治疗的新靶标。

PCDH10减少多发性骨髓瘤细胞逃避表阿霉素杀伤

目的:探讨原钙黏蛋白10(protocadherin-10,PCDH10)对表阿霉素杀伤多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞的影响及机制。方法:采用脂质体法将PCDH10基因转染入人MM细胞株RPMI8226细胞,RT-PCR和Western blot法检测PCDH10基因和蛋白的表达;CCK-8法检测表阿霉素对RPMI8226细胞的增殖抑制作用,求得半数抑制浓度(half-maximal inhibitory concentration,IC50);Transwell法检测表阿霉素和PCDH10对RPMI8226细胞迁移的影响;流式细胞术检测CXC族趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)蛋白表达;Western blot方法检测Ras同源家族成员A(ras homolog gene family member A,Rho A)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达情况。结果:PCDH10基因成功转染入RPMI8226细胞,并成功表达;PCDH10转染组表阿霉素IC50为(0.87±0.07)μg/ml,明显低于空质粒转染组(1.27±0.02)μg/ml(F=77.93,P=0.000);PCDH10减少表阿霉素所致的细胞迁移(F=34.943,P=0.000)并抑制CXCR4(F=117.269,P=0.000)、Rho A(F=1 818.250,P=0.000)和MMP-9(F=523.764,P=0.000)蛋白表达。结论:PCDH10一方面可增强MM细胞对表阿霉素的敏感性,另一方面可通过抑制CXCR4、Rho A、MMP-9蛋白的表达来减少MM细胞逃避表阿霉素的杀伤,从而增强了表阿霉素的抗骨髓瘤效应。

RegⅣ与消化系肿瘤研究进展

再生基因4(regenerating islet-derived family,member 4,RegⅣ)是再生基因家族的新成员,定位于1p12-13.1,编码为17kDa的分泌性蛋白.RegⅣ选择性表达于正常胰腺和胃肠道上皮,炎症或肿瘤时可见原位或异位高表达.RegⅣ与消化系肿瘤的发生、发展、转移、抗药性及预后密切相关,其可能成为预防、诊断和治疗整个消化系肿瘤的新的重要靶分子.

麝香灸联合替吉奥与食物疗法治疗晚期胰腺癌患者的临床效果

目的观察麝香灸联合替吉奥与食物疗法治疗晚期胰腺癌的临床效果。方法采用单盲法、随机数字表法将66例晚期胰腺癌患者随机分为常规组22例、艾灸组22例及麝香灸组22例。常规组患者给予食物疗法联合替吉奥治疗,艾灸组患者在常规组基础上给予艾灸治疗,麝香灸组患者在常规组基础上给予麝香灸治疗。治疗前后检测3组患者血浆P物质(SP)、血清β内啡肽(β-EP)、前列腺素E_(2)(PGE_(2))、自然杀伤T细胞(NKT)、γ干扰素(IFN-γ)、胰腺再生蛋白4(REG4)、巨噬细胞抑制因子-1(MIC-1)、T淋巴细胞亚群水平,评价两组患者疼痛数字评分法(NRS)、中医证候、卡氏功能状态(KPS)、癌症患者生命质量测定量表(QLQ-C30)评分,记录3组患者3个月及6个月生存率。结果治疗后,3组患者NKT、IFN-γ、β-EP水平均高于治疗前,REG4、MIC-1、PGE_(2)、SP水平均低于治疗前,且艾灸组、麝香灸组患者NKT、IFN-γ、β-EP水平均高于常规组,REG4、MIC-1、PGE_(2)、SP水平均低于常规组,麝香灸组患者NKT、IFN-γ、β-EP水平均高于艾灸组,REG4、MIC-1、PGE_(2)、SP水平均低于艾灸组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。治疗后,3组患者CD4^(+)、CD3^(+)、CD8^(+)水平均低于治疗前,且艾灸组、麝香灸组患者CD4^(+)、CD3^(+)、CD8^(+)水平均高于常规组,麝香灸组患者CD4^(+)、CD3^(+)、CD8^(+)水平均高于艾灸组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。治疗后,3组患者NRS、中医证候评分均低于治疗前,KPS、QLQ-C30评分均高于治疗前,且艾灸组、麝香灸组患者NRS、中医证候评分均低于常规组,KPS、QLQ-C30评分均高于常规组,麝香灸组患者NRS、中医证候评分均低于艾灸组,KPS、QLQ-C30评分均高于艾灸组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。艾灸组、麝香灸组患者3个月、6个月生存率均高于常规组,麝香灸组患者3个月、6个月生存率均高于艾灸组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论麝香灸联合替吉奥与食物疗法治疗晚期胰腺癌患者,可降低患者REG4、MIC-1水平,保护机体免疫功能,减少机体疼痛介质,改善患者临床症状,提升患者生活质量。

胃癌组织中再生基因、转录辅助因子退变样蛋白表达与淋巴结转移的相关性

目的探讨胃癌组织中再生基因(REG1α)、转录辅助因子退变样蛋白(VGLL4)表达与淋巴结转移之间的相关性。方法回顾性选取2019年10月至2020年10月上饶市人民医院收治的82例胃癌患者作为研究对象,根据患者是否合并淋巴结转移分为转移组(55例)与未转移组(27例)。比较两组REG1α、VGLL4阳性表达率,并分析上述蛋白表达与淋巴结转移的相关性。结果转移组REG1α阳性表达率高于未转移组,VGLL4阳性表达率低于未转移组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,REG1α表达与胃癌淋巴结转移呈正相关,VGLL4表达与胃癌淋巴结转移呈负相关(P<0.05)。结论REG1α、VGLL4可作为评估胃癌患者是否发生淋巴结转移的有效指标,且其表达情况与胃癌淋巴结转移存在一定相关性。

前列腺癌细胞中TNS4新突变体及其作用机制初探

目的:检测前列腺癌细胞中张力蛋白家族第四成员(tensin family member 4,TNS 4)基因的表达和突变情况,并探讨其潜在的作用机制。方法:采用RT-PCR法分析多种前列腺癌细胞中TNS 4基因表达;并扩增TNS 4基因的全长cDNA,进行限制性核酸内切酶水解和DNA测序分析。构建TNS 4基因野生型和突变体重组质粒,转染前列腺癌PC-3细胞,然后采用RT-PCR、蛋白质印迹法和免疫荧光染色法分别测定野生型和突变体TNS4过表达对信号转导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)mRNA、蛋白表达及定位的影响。结果:与良性前列腺增生细胞BPH1相比,前列腺癌DU145、LNCaP和22Rv1细胞中TNS 4基因呈低表达(P值均<0.01),而前列腺癌PC-3细胞中几乎没有TNS 4基因表达。分析TNS 4基因的全长cDNA序列后发现,前列腺癌DU145和LNCaP细胞中TNS 4基因存在突变位点T427C和G1455A,其中T427C突变导致对应氨基酸构成发生转变(S143P)。成功构建TNS 4基因突变体重组质粒pcDNA3.1(+)-TNS4-Mut和野生型TNS 4基因重组质粒pcDNA3.1(+)-TNS4-WT并转染前列腺癌PC-3细胞后,TNS4 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P值均<0.05),STAT 1基因转录水平未见明显变化(P>0.05),但STAT1蛋白表达水平明显升高(P值均<0.05),而且TNS 4基因突变体过表达能够明显促进STAT1蛋白进入细胞核(P<0.01)。结论:前列腺癌细胞中TNS 4基因明显低表达,且存在新的TNS4突变体(S143P);过表达TNS4能够上调STAT1蛋白的表达水平,而且TNS4突变体过表达会进一步改变STAT1蛋白的细胞定位。

SMAD同源物4抑癌基因在小鼠散发性结直肠癌模型中的作用

目的构建Apc^loxP/loxP+SMAD同源物4(Smad4)^loxP/loxP双转基因小鼠模拟人散发性结直肠癌,观察Smad4在结直肠癌发生发展中的作用。方法分别将Apctm1Tyj/J小鼠、Smad4tm2.1Cxd/J小鼠与C57BL/6J小鼠(均购自美国杰克逊实验室)杂交和回交转换遗传背景形成杂合子小鼠C57BL/6-ApcloxP/-/J(记为ApcloxP/-)、C57BL/6-Smad4loxP/-(记为Smad4loxP/-),将ApcloxP/-和Smad4loxP/-小鼠杂交建系并通过聚合酶链反应(PCR)筛选出Apc^loxP/loxP+Smad4loxP/loxP小鼠。通过小鼠结肠镜分别向Apc^loxP/loxP+Smad4loxP/loxP小鼠和C57BL/6J小鼠(各12只)结直肠黏膜下注射前期构建好慢病毒LentivirusCre-IRES-Luciferase,腹腔注射荧光素酶D(D-luciferase)后在小动物活体成像系统(IVIS)下成像并通过结肠镜动态观察成瘤情况。最后对小鼠瘤灶取材行苏木精-伊红(HE)染色观察其病理改变。组间比较采用t检验。结果成功培育出Apc^loxP/loxP+Smad4loxP/loxP双转基因小鼠22只。在LentivirusCre-IRES-Luciferase诱导下发生突变并形成散发性结直肠肿瘤病灶,经病理组织学证实为腺癌,可通过IVIS系统及小鼠结肠镜动态观察其情况,至12周末成瘤率33%(4/12),C57BL/6J小鼠未观察到瘤变。两组体重分别为(22.58±1.21)、(21.36±1.01)g,比较差异无统计学意义(t=0.892,P>0.05);日龄分别为(63±1)、(62±1)d,差异无统计学意义(t=0.121,P>0.05)。结论本研究构建的Apc^loxP/loxP+Smad4loxP/loxP双转基因小鼠结肠组织在LentivirusCre-IRES-Luciferase诱导下发生癌变,成功模拟人散发性结直肠癌的发生过程,证实Smad4抑癌基因的条件性敲除可促进结直肠癌的发生。

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块模型兔腹主动脉RhoA/Rock信号通路的影响

目的探讨隔药饼灸稳定动脉粥样硬化(AS)易损斑块的可能作用机制。方法将50只新西兰兔随机分为空白组8只,模型组9只,直接灸组9只,隔药饼灸组7只,阿托伐他汀钙组9只,抑制剂组8只。除空白组外,其余各组通过"高脂饲养喂养+腹主动脉球囊损伤术+基因转染+触发斑块破裂"制作AS易损斑块兔模型。空白组、模型组不予操作;阿托伐他汀钙组给予阿托伐他汀钙片1.96 mg/(kg·d)喂养;抑制剂组予盐酸法舒地尔10 mg/(kg·d)沿耳缘静脉缓慢注射;直接灸组及隔药饼灸组分别直接灸及隔药饼灸,穴选Ⅰ组("巨阙"及双侧"天枢""丰隆")或Ⅱ组(双侧"心俞""肝俞""脾俞"),每日一组交替使用,每穴连续灸3壮。各组干预时间均为8周。13周实验结束后采用ELISA法测定血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL),并计算HDL/LDL;HE染色观察腹主动脉斑块组织结构,测量血管内膜厚度、内膜-中膜厚度(IMT);免疫组化法观察腹主动脉Ras同源物基因组成员A(RhoA)、Ras同源物相关卷曲螺旋蛋白激酶(Rock)、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)的抗原活性。结果与空白组比较,模型组实验兔血清TC、TG、LDL含量显著升高,HDL含量及HDL/LDL值显著降低,腹主动脉血管内膜厚度及IMT显著增加,腹主动脉中RhoA、RocK、TLR4、NF-κB灰度值显著升高(Ρ<0.01)。与模型组比较,直接灸组、隔药饼灸组、阿托伐他汀钙组TC、TG、LDL明显降低,HDL含量及HDL/LDL值明显升高,内膜厚度、IMT、RhoA、RocK、TLR4、NF-κB灰度值明显下降(P<0.05或P<0.01)。与直接灸组比较,隔药饼灸组与阿托伐他汀钙组NF-κB灰度值降低(Ρ<0.05)。结论隔药饼灸可能通过抑制RhoA/RocK信号通路下调TLR4、NF-κB表达,从而保护血管内皮功能、稳定AS易损斑块。

牛膝-白芍配伍对帕金森病小鼠神经炎症及RhoA/ROCK2信号通路的影响

目的:观察牛膝和白芍不同剂量对肝阳上亢证帕金森病小鼠神经炎症及多巴胺能神经元的保护作用,并探究其作用机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、牛膝-白芍低、中、高剂量组(3.25、6.5、13 g·kg-1)、司来吉兰组(0.01 g·kg-1)。采用附子汤灌胃联合1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射的方法制备肝阳上亢证帕金森病模型。通过小鼠转棒实验和爬杆实验评估其行为学改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定小鼠脑黑质中Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)、Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶2(ROCK2)、肌球蛋白轻链1(MLC1)、α-突触核蛋白(α-synuclein)的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测脑黑质中RhoA、ROCK2、MLC1 mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)促炎细胞因子含量;透射电镜观察小鼠神经元超微结构变化。结果:与正常组比较,模型组跌落潜伏期显著缩短及爬杆时长显著增加(P<0.01),脑黑质内RhoA、ROCK2、MLC1、α-synuclein、TNF-α、IL-1β水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,牛膝-白芍低、中、高剂量组、司来吉兰组跌落潜伏期明显增加及爬杆时长明显降低(P<0.05,P<0.01),且ROCK2、MLC1、α-synuclein、TNF-α、IL-1β水平均降低(P<0.05)。电镜下与正常组比较,模型组神经元胞质内细胞器数量明显减少,线粒体肿胀且内质网形态异常,而牛膝-白芍高剂量组和司来吉兰组经元胞核结构完整,细胞轮廓清晰,内质网形态正常。结论:牛膝-白芍配伍改善肝阳上亢证PD小鼠运动能力,下调RhoA/ROCK2信号通路相关蛋白表达,抑制炎性因子表达,减轻多巴胺能神经元损伤,其机制可能与抑制脑内RhoA/ROCK2信号通路介导的神经炎症反应有关。