Inhibitory Effects of 12 Chemical Agents against Alternaria alternata

[Objective]The paper was to screen highly efficient fungicides for the prevention and control of tobacco brown spot(Alternaria alternata).[Method]The inhibitory effects of 12 chemical agents against A.alternata were determined indoors by mycelium growth rate method.[Result]Toxicity test showed that 30%kresoxim-methyl·boscalid SC had the best inhibitory effect,with an EC_(50)of 1.05μg/mL,followed by 9%pyraclostrobin CS,with an EC_(50)of 2.09μg/mL.As a broad spectrum protective fungicide,77%copper calcium sulfate WP showed a low sensitivity against A.alternata in the petri dish test since it had a mechanism of action different from that of other chemical agents.[Conclusion]The study lays the foundation for subsequent screening of fungicides for the prevention and control of A.alternata in the field.

烟草抗赤星病（Alternaria alternata）诱导因子的筛选

不同诱导因子的研究结果表明，真菌、细菌和病毒都可诱导烟草对赤星病产生抗性。抗性效应表现为发病率降低、严重度变小和病斑面积减少。真菌诱导因子中，只有弱毒株诱导产生抗性，抗性效应为７．４％～８０．１％；细菌诱导产生的抗性效应为１．３％～８５．８％；病毒及其组合的抗性诱导效应为３．９％～８３．２％。实验发现，真菌和细菌的某些菌株和某些病毒及其组合也可诱导烟草对赤星病的感病性，使病情加重。

云南主栽核桃品种对Alternaria alternata叶枯病的抗病性评价

为了解云南地区不同核桃品种对叶枯病的抗性,从而为核桃抗病品种选育和叶枯病的防治提供依据,试验采用田间调查和离体叶片接种法获得病斑面积和病情指数,采用聚类分析的方法对田间调查和离体接种的病斑面积进行聚类分析,并结合病害分级标准,综合评价云南主栽37个核桃品种对Alternaria alternata的抗病性。结果表明:‘大泡核桃1’叶片上未出现病斑,‘小圆果’病斑面积最小,为5.05 mm^2,而‘圆菠萝2’病斑面积最大,达到887.68 mm^2;采用Ward最小偏差平方和法和欧式距离进行聚类分析,其聚类效果与接种结果和田间调查结果的吻合度最好。通过田间调查和离体接种综合评价,将37个核桃品种分为13个抗病品种、15个中抗品种、7个中感品种和2个感病品种。

转水稻几丁质酶基因烟草植株及其对烟草赤星病(Alternaria alternata)的抗性

通过根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导 ,将水稻几丁质酶基因导入烟草 (Nicotianatabacum)栽培品种中 ,并得到转基因植株。导入的 3个基因即nptⅡ、bar和几丁质酶基因在子一代以近 3∶1的比例分离。表达水稻几丁质酶的子一代转基因烟草表现出对烟草赤星病病原真菌 (A .alternata)的抗性。

补骨脂种子提取物对链格孢菌生长及其侵染烟草的影响

为探究补骨脂种子提取物对烟草赤星病菌的作用效果及其对烟草抗氧化酶活性的影响,以烟草赤星病病原菌链格孢菌和云烟87为试验材料,研究了不同浓度补骨脂种子提取物处理下链格孢菌菌丝生长情况以及补骨脂种子提取物处理后接种链格孢菌的成熟烟叶中防御酶活性变化。结果表明,0.2%补骨脂种子提取物12.5 g/L对链格孢菌菌丝生长的抑制效果最好,处理3 d后抑制率达到74%以上,且具有浓度效应和时效性。0.2%补骨脂种子提取物2.5 g/L能提高烟草抗氧化酶活性,0.2%补骨脂种子提取物2.5 g/L处理24 h后接种链格孢菌,烟叶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性均较喷施蒸馏水对照显著提高。补骨脂种子提取物既可抑制链格孢菌菌丝生长,又能提高烟株抗氧化能力和抗病性,有助于抵御病原物入侵。本研究可为进一步研究补骨脂种子提取物提高植物抗病性的作用及其在防治烟草赤星病方面的应用提供参考。

鼠李糖脂处理对早酥梨抗黑斑病的诱导作用及其机理

为探讨生物源表面活性剂鼠李糖脂(rhamnolipids,RLS)对梨果黑斑病的控制效果及其机理,本实验以梨果黑斑病菌(Alternaria alternata)为研究对象,研究了RLS对梨果抗黑斑病的诱导作用及其机理。结果表明,质量浓度20 mg/mL RLS处理能有效增强早酥梨对A.alternata的诱导抗病性,处理12 d后,其病斑直径仅为对照组的64.29%。进一步研究发现,与对照组相比,RLS处理显著提高了梨果组织的苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)、肉桂酸-4-羟化酶(cinnamate 4-hydroxylase,C4H)、4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumarate coenzyme A ligase,4CL)和肉桂醇脱氢酶(cinnamyl alcohol dehydrogenase,CAD)的活力,以及总酚和类黄酮的含量,整体上显著提高了几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活力(P<0.05);提高了NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、过氧化物酶(peroxidase,POD)活力及贮藏前期和中期H_(2)O_(2)和O_(2)-·的含量,同时,激活了活性氧清除系统抗坏血酸-谷胱甘肽循环(ascorbate-glutathione cycle,ASA-GSH),维持了梨果组织活性氧动态平衡,进而降低了梨果细胞膜透率和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量。综上,RLS采后处理可通过调节梨果组织苯丙烷代谢、活性氧代谢及病程相关蛋白增强其抗病性。

几种板栗品种对链格孢菌的室内抗性比较及防治药剂筛选

为明确不同板栗品种对链格孢菌(Alternaria alternata)的抗性并筛选出抑制该病原菌的有效药剂,采用离体菌丝块有伤接种法对14个板栗品种进行抗病性鉴定,通过发病率、病斑平均直径法和系统聚类分析法对不同品种进行抗性分级,并利用菌丝生长速率法测定7种杀菌剂对A.alternata的毒力。结果表明,接种后9 d,板栗品种‘燕山短枝’‘大板红’的发病率和病斑扩展直径分别为44.45%、51.11%和0.13、0.20 cm;‘遵玉’为100%和0.90 cm。供试品种中以‘燕山短枝’‘大板红’对A.alternata的抗性相对较强;‘遵玉’对A.alternata的抗性相对较弱。药剂筛选结果表明,咯菌腈对A.alternata的抑制效果最佳,抑制率达到93.75%,EC50为69.94 mg•L^(-1)。以上结果为板栗在种植中筛选优质抗病品种及开展田间药效试验提供参考。

病原细菌无毒基因avrD介导的抗赤星病转基因烟草

利用从病原细菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅｐｖ．ｔｏｍａｔｏ中获得的无毒基因ａｖｒＤ片段与病原菌诱导型的特异启动子ＰⅠⅡ、ＣＨＳ和ＰＡＬ构建成表达盒，通过土壤农杆菌分别转化烟草品种Ｋ３２６和ＢｏｔｏｍＳｐｅｃｉａｌ。经烟草赤星病菌孢子定量接种转基因植株及其离体叶片，筛选到一批高抗植株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分子杂交检测证明。

海岛棉GbNPR1基因全长cDNA的克隆及其在烟草中的表达

目的为棉花抗黄萎病基因工程育种提供新的基因源。方法以海岛棉为材料,利用同源序列法和RACE技术克隆海岛棉中SAR途径的主要抗病信号元件NPR1(noneexpresserofPRgene)的全长cDNA序列。结果推导的氨基酸序列与已知NPR1的同源性较低(39%～57%),但在功能区的同源性较高(79.2%),GbNPR1蛋白中含有BTB和锚蛋白重复序列结构域,且在起始密码子上游存在2个W框。在拟南芥中,A.tNPR1起始密码子上游有3个W框,对诱导NPR1的表达和激活NPR1介导的植物防卫反应至关重要,锚蛋白重复序列则是NPR1实现其功能必不可少的。构建了组成型植物表达载体,通过农杆菌介导法导入烟草,转基因植株经PCR和Southern杂交检测,表明目的基因已整合到烟草基因组中。离体叶片接种法对转基因烟草进行抗病性鉴定,表明对烟草赤星病菌(Alternariaalternata)的抗性有明显提高。转基因烟草经T1代遗传分析发现,基因以单拷贝插入。结论本研究得到的基因为海岛棉中NPR1的同源基因。

安徽烟草赤星病菌生物学特性及致病力分化研究

研究了安徽地区烟草赤星病菌的生物学特性和致病力分化,结果表明,该菌在10～35℃条件下均能生长,最适生长温度为25～30℃,温度低于7℃或高于40℃菌丝不能生长;分生孢子致死温度是53℃5min和50℃10min,幼菌丝致死温度是52℃5min和49℃10min。病菌在pH4.0～11.0的范围内均能生长,呈现双峰曲线,即在pH6.0～pH8.0生长较快,尤以pH6.0和pH8.0的条件下菌丝生长更快;分生孢子在pH4.0～11.0之间均可以萌发;在pH6.0时,产孢量最高。在光照和黑暗交替的条件下,有利于菌丝的生长和孢子产生。致病力测定结果表明,不同菌株之间致病力存在显著差异,根据接种K326烟草后所致病情指数的大小可供试菌株致病力划分为致病力强、中等、弱和不致病4种类型,说明安徽烟草赤星病菌存在明显的致病力分化;在不同烟区间和同一烟区内均存在不同致病力类型的菌株,致病力类型的分布与菌株地区来源有一定的相关。

烟叶成熟衰老程度与对赤星病感病性的关系

５个栽培品种的盆栽植株，于１３片真叶展开时人工接种，比较各叶位叶片的感病性。结果表明：烟叶自下而上逐渐成熟衰老，随着叶色由绿转黄，叶绿素含量依次递减，其汁液可溶性糖及浸出液还原糖含量递增，感病性相应地提高。以叶色为指标，绿色叶片对病害免疫；轻微转黄的绿叶，高度抗病，只能形成褐色小点，而不能产生分生孢子，也不能再扩展；中度转黄的绿叶上形成０．２ｃｍ以下的小斑，也不产生孢子，多数不能再扩展；黄色叶片为高感型，能形成０．５ｃｍ以上的典型病斑，并产生大量孢子。以１％葡萄糖液为介质，孢子萌发率以接种烟株的病情指数高于１％蔗糖液。以黄叶液为孢子液介质，其发芽率及接种发病率均高于黄绿叶及绿叶汁液。这说明烟叶成熟衰老程度与感病性高度相关。

植物源农药防治烟草病虫害

2002～2004年通过田间试验研究了几种植物源农药对烟草病虫害的防治效果。结果表明:藜芦、博落回、苦参对烟蚜有强的杀灭作用;苦皮藤、博落回对烟青虫的防治效果明显;藜芦、博落回、苦参、艾对烟草赤星病均有防治效果,其中苦参和4种药剂的复配剂效果较好;商陆对烟草普通花叶病(TMV)有较强的抑制作用。

美洲黑杨×青杨F_2代抗杨叶枯病遗传变异研究

以美洲黑杨与青杨杂交三代谱系为材料，在室内外进行了美洲黑杨与青杨的杂交种对杨叶枯病抗性的研究。结果表明：亲本及Ｆ１、Ｆ２代在室内与室外及人工与自然发病表现较一致，美洲黑杨×青杨Ｆ２代抗性基因型分离比例均符合１∶２∶１，将Ｆ２代分离与感合作为感病，抗病株与感病株分离比例为１∶３，说明美洲黑杨对杨叶枯病的抗性是由一对纯合隐性等位基因控制。

抗菌肽和几丁质酶基因提高烟草对黑胫病菌和赤星病菌的抗性研究

通过农杆菌介导法将加信号肽修饰的人工合成杂合抗菌肽CEMA基因(SPCEMA),苜蓿防御素基因(AFP),苦瓜几丁质酶基因(CHI)以及SPCEMA-CHI、AFP-CHI、AFP-SPCEMA双价基因导入本明烟(Nicotianabenthamiana),并对转基因烟草T0和T1代进行了抗病性检测,比较了不同转基因植株的抗病效果。研究结果表明,转基因烟草对黑胫病菌(Phytoph-thoraparasiticavar.nicotianae)、赤星病菌(Alternariaalternata)的抗性均强于非转基因烟草,病情指数差异达极显著水平,其中转AFP-CHI双价基因烟草具有较强的抗性,与单价转基因烟草的抗性差异达显著水平。但各单价转基因以及双价转基因烟草之间对上述病菌并未表现出显著的抗病性差异。结果表明植物源的抗菌肽基因与几丁质酶基因在抗植物真菌病害中具有协同增效作用。

烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗药性检测

为了解吉林省和黑龙江省烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗性水平,采用菌丝生长速率法,测定了318株烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的药剂敏感性,建立敏感基线。运用最低抑制浓度法确定抗性菌株及频率,并比较不同采样地点的抗性水平。结果表明,供试敏感菌株对菌核净的敏感性频率分布呈连续的单峰曲线,接近正态分布,其EC50均值2.916μg/mL可作为两省烟草赤星病菌对菌核净的敏感基线,抗性频率为21.38%;烟草赤星病菌对苯醚甲环唑的敏感基线为1.198μg/mL,抗性频率为18.24%。吉林省和黑龙江省烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑产生了不同程度的抗性,不同地点抗性水平存在差异。本研究为烟草赤星病菌的抗药风险评估奠定了基础,为制定吉林和黑龙江两省烟草赤星病科学防治策略和科学用药提供了依据。

云南烟草赤星病菌遗传多样性的RAPD分析

运用RAPD分子标记技术分析了来自云南各地24个烟草赤星病菌株的遗传多样性。结果表明,12个随机引物共扩增出了145条DNA条带,所扩增出的DNA条带均为多态带,表明云南烟草赤星病菌存在丰富的遗传多样性。不同地点赤星病菌的遗传结构之间都有一定的差异,生态环境相似性越大的地点,赤星病菌的遗传结构相似程度就越高。赤星病菌的遗传结构也随寄主品种(基因型)的不同而表现出一定的差异,寄主品种的遗传背景影响着赤星病菌的遗传结构。

鉴别抗杨叶枯病基因连锁分子标记

本项研究是以抗杨叶枯病 (Alternariaalternata (Fr.)Keissler)美洲黑杨 (PopulusdeltoidesMarsh .)(♀ )与感病的青杨 (P .cathayanaRehd .) (♂ )及它们的种间杂种F1代和F2 代为材料 ,经室内外人工接种表型抗性鉴定 ,认为美洲黑杨对杨叶枯病的抗性Ala是由 1对隐性纯合基因控制。为进一步识别与Ala抗性基因位点相连锁的标记 ,我们采用RAPD分子标记方法与BSA(BulkedSegregantAnalysis)分群法结合 ,用 4 0 0个 1 0 mer随机引物 ,分析了大约 4 2 0 0条DNA片断 ,鉴别出与Ala位点紧密相连的分子标记 2个 (RPH1 2 6和RPH1 2 4 )。Ala抗病基因位于第 3连锁群 ,2个标记距Ala基因遗传距离均为 3 60cM。

抗烟草赤星病芽孢杆菌B102菌株的筛选及抑菌作用

从山东烟田烟草根际和根围土壤中分离到157株细菌,筛选出对烟草赤星病菌Alternaria alternata有明显抑菌作用的细菌菌株7个。其中B102菌株对烟草赤星病菌抑菌作用明显,抑菌带宽度达13.0mm。采用异步培养、对峙培养、含细菌培养等方法,测定发酵滤液及代谢产物对病原菌的作用机制。结果表明,B102菌株对病原菌的抑制作用主要依赖于其产生的抗高温的代谢产物,可抑制病菌菌丝生长、孢子萌发、菌丝细胞破裂、内含物外泄,致使病菌丧失侵染能力。B102菌株代谢产物经高温及不同的pH值条件处理后仍表现出较高的抑菌活性,表明B102菌株对外界环境条件的稳定性强。

不同柑橘属种质对柑橘褐斑病菌的抗性评价

【目的】探讨不同柑橘种质及‘梨橙2号’ב晚蜜2号’部分杂交种对柑橘褐斑病菌Alternaria alternata的感病程度及抗性分级标准。【方法】采用室内果实去皮接种观察不同种质的感病程度并根据系统聚类分析法、病斑平均直径法、病情指数法3种抗性评价方法对抗病性进行分级。【结果】大部分宽皮柑橘类种质易感病;甜橙类、柚类和柠檬类种质较抗病。参试的54份种质划分为高抗、抗病、中抗、感病、高感5类,未发现免疫种质;‘胡柚’、‘强德勒’、‘华盛顿脐橙’和‘梁平柚’4个品种为高抗品种。‘梨橙2号’ב晚蜜2号’杂交种抗病性出现分离,可以进行遗传分析。【结论】宽皮柑橘种质及其杂交种和葡萄柚易感病。

三种化学物质诱导观赏百合对黑斑病抗性的研究

[目的]确定水杨酸、纳米硅、草酸铵等3种化学物质对观赏百合黑斑病抗病性的诱导效果,为百合生长期病害的防治提供理论依据。[方法]测定3种化学物质对观赏百合黑斑病菌的抑菌活性和诱导寄主抗性效果。[结果]3种化学物质对观赏百合黑斑病菌抑菌率较低,最高仅为5.43%,但处理百合叶片后,诱导百合产生较高抗病性。在100、50μg/mL和25μg/mL浓度下,纳米硅的诱导抗病效果最好,分别为55.55%、60.69%、48.57%。水杨酸诱导处理可使观赏百合叶片β-1,3-葡聚糖酶在第1天达到峰值,纳米硅可以使过氧化物酶在第5天达到峰值,草酸铵可以使苯丙氨酸解氨酶在第5天达到峰值,分别为对照的3.95倍、2.10倍和1.15倍;先诱导处理再接种黑斑病菌1 d后叶片组织内-β1,3-葡聚糖酶、过氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶活性均明显高于对照;水杨酸、纳米硅和草酸铵处理7 d后田间诱导防病效果分别为35.38%、43.55%和31.07%;处理14 d后,与第7天相比诱导防病效果明显降低。[结论]水杨酸、纳米硅和草酸铵3种化学物质对百合均有一定诱导抗病作用,其中纳米硅酸的诱导抗病效果最好,可达到48%以上。