人类REL M-beta基因启动子的结构与功能分析

为克隆人类抵抗素样分子β(resistin-like molecule beta,RELMβ)基因的上游启动子序列,并观察其不同截短片段的启动子活性,以人类基因组DNA为模板,通过PCR扩增方法获得-871～+50bp、-729～+50bp、-471～+50bp、-438～+50bp、-371～+50bp大小的RELMβ启动子片段,将其定向克隆入pGL3-Basic载体,构建荧光素酶报告基因载体,并制备转录因子CDX-2结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体的介导下,报告基因载体分别瞬时转染人胚肾293细胞、结肠癌HCT116和SW480细胞、宫颈癌HeLa细胞.结果发现,各RELMβ启动子片段在293、HCT116、SW480细胞中均有活性,但在HeLa细胞中活性缺失;-471～-438bp区存在RELMβ启动子的核心调控元件.针对该区域CDX-2转录因子结合位点进行突变,能导致RELMβ启动子活性显著降低;凝胶电泳迁移率实验表明,该区段能结合CDX-2.结果提示,成功克隆了具有活性的RELMβ启动子序列,CDX-2为其重要的转录因子,为研究RELMβ基因的转录调控机制奠定了实验基础.

RELMβ在慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中的表达

目的:研究抵抗素样分子β(resistin like molecule beta,RELMβ)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺组织中的分布及表达。方法:采集暨南大学附属第一医院因肺癌入院行肺叶切除术的19例肺组织标本,分为COPD组(10例)和对照组(9例)。采用HE染色、免疫组织化学染色及Western blot方法,检测RELMβ蛋白的表达情况。结果:COPD组患者肺组织中RELMβ的表达(2.657±0.387)明显高于肺功能正常组(0.386±0.072)(P<0.05),且与肺功能主要指标(FEV1%预计值、FEV1/FVC%)呈负相关;与吸烟指数呈正相关(P值均<0.05)。结论:RELMβ可能参与慢性阻塞性肺疾病的发病过程。

结肠特异性基因RELMβ的克隆及其真核表达载体构建

目的:观察克隆小鼠结肠特异性基因RELMβ,并构建其真核表达载体.方法:采用Western blot、Northern blot方法检测RELMβ基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠结肠组织中提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增RELMβ全长cDNA,克隆至T载体后进行核酸序列分析,并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)的限制性内切酶位点EcoR I:重组子在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下瞬时转染小鼠胚胎纤维母细胞NIH/3T3、结肠癌细胞系CT26,Western blot及RT-PCR法检测细胞RELMβ表达水平.结果:RELMβmRNA和蛋白特异表达于小鼠结肠,而其他脏器未见表达.成功克隆了小鼠RELMβ全长cDNA(318 bp),与已报道序列的同源性高达99%,获得GenBank登录号DQ157777.真核表达载体pcDNA3.1-RELMβ转染细胞后,细胞内RELMβmRNA和蛋白水平均显著增高(P<0.01).结论:从小鼠结肠组织中克隆出RELMβ特异性表达基因,为深入研究RELMβ基因的生物学作用及其在结肠疾病靶向治疗中的作用奠定了基础.

阻塞性黄疸术后胰岛素抵抗与肠黏膜屏障破坏间的相关性

目的:探讨阻塞性黄疸(阻黄)术后胰岛素抵抗与肠黏膜屏障破坏间的相关性。方法:建立阻黄大鼠模型,术后给予胰高血糖素样肽2(GLP-2)和强化胰岛素治疗,分别于手术前1 d及手术后2、24、48 h和3、7 d采血,计算胰岛素抵抗指数,检测乳果糖/甘露醇(L/M)比值,ELISA法检测血清抵抗素样分子β(RELMβ)浓度,RT-PCR检测回肠组织内RELMβmRNA相对含量。结果:阻黄组术后3 d的胰岛素抵抗指数(10.1±1.8)和L/M比值(0.66±0.08)远高于其它时点(均P<0.05),两者呈明显正相关(r=0.86,P<0.05)。GLP-2组术后7 d的胰岛素抵抗指数降幅达37.0%,胰岛素组术后3 d的L/M降幅最大达46.7%(P<0.05)。阻黄组术后3 d血清RELMβ含量[(0.69±0.05)μg/L]和末端回肠上皮细胞内RELMβmRNA相对水平达到最高(1.40±0.06)。GLP-2组和胰岛素组的RELMβ浓度较阻黄组明显降低(P<0.05)。结论:阻黄术后胰岛素抵抗与肠黏膜屏障破坏间具有相关性,改善肠黏膜屏障和术后强化胰岛素治疗可以提升血清和组织内RELMβ含量。

抵抗素样分子β在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的 :探讨抵抗素样分子β(resistin-like molecule beta,RELMβ)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和蛋白免疫印迹检测103例NSCLC组织及癌旁正常肺组织(其中65例具有配对的淋巴结转移标本)中RELMβ的表达情况,分析其表达与临床病理特征之间的关系。结果:RT-PCR和蛋白免疫印迹结果均显示,RELMβ在NSCLC组织中的表达明显高于正常肺组织。RELMβm RNA在肺癌组织中的表达(68.93%)显著高于癌旁组织(23.33%,P<0.05)。不同肿瘤的分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况,RELMβ的表达强度不同,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RELMβ在NSCLC组织中异常高表达,与肺癌临床病理学特征相关,可能促进NSCLC的恶性进程。

RELM-β与肺部炎症性疾病的研究进展

抵抗素样分子β即RELM-β（resistiwlike molecule beta）又称为FIZZ2（foundin in flammatory zone2），是近年来发现参与多种慢性疾病的一种细胞因子，在炎症反应中具有重要作用。目前关于RELM-β与呼吸系统及胃肠道相关疾病的研究报道较多，RELM-β促进炎症反应的机制也备受关注，其在肺部炎性疾病中的机制在近期越来越成为研究的焦点，RELM-β与肺部炎症的关系具有广阔的研究前景，故以此为切人点，以RELM-β在肺部疾病炎症反应的作用机制及研究进展作一综述。

抵抗素样分子β在动脉粥样硬化斑块稳定性中的作用

目的探讨抵抗素样分子β(RELMβ)在动脉粥样硬化易损斑块模型中的作用。方法 60只雄性8周龄Apo E-/-小鼠通过高脂饮食及颈总动脉套管诱导易损斑块形成,进而斑块局部转染慢病毒,根据转染慢病毒的不同随机分为正常对照组、转染携带空载体的慢病毒组(si-NC组)和转染携带干扰序列的慢病毒组(si-RELMβ组),每组20只。继续高脂喂养4周,称重后行安乐死,留取空腹血清及颈总动脉标本。检测血清中血脂含量。采用Western blotting法检测斑块内RELMβ蛋白表达水平。采用天狼猩红及油红O染色分别检测斑块内胶原和脂质含量。采用免疫组化染色法检测斑块内平滑肌细胞、巨噬细胞、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的表达。结果 3组小鼠体质量及血脂水平无明显差异。si-RELMβ组RELMβ蛋白表达较正常对照组显著降低(P<0.05)。si-RELMβ组斑块内胶原和平滑肌细胞含量较正常对照组显著增加,而脂质和巨噬细胞含量却显著减少,易损指数较正常对照组亦明显降低(P<0.05)。si-RELMβ组炎症因子——IL-1β和IL-6较正常对照组显著减少(P<0.05)。结论 RELMβ能够促进动脉粥样硬化易损斑块的形成,其机制可能与其促进斑块内炎症因子表达有关。