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碱性MAGE家族新成员restin在大肠杆菌中的表达和抗体制备 被引量:3
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作者 路凡 杨辉 +4 位作者 王孝功 蒲勤 李毅 赵文明 赵忠良 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期309-311,共3页
目的:从维甲酸诱导的白血病细胞系HL60中,克隆编码219个氨基酸的新基因restin,构建原核表达载体、制备抗血清并进行初步应用。方法:采用PCR技术,以维甲酸诱导的白血病细胞的cDNA为模板,扩增出restin的编码区。将其克隆入大肠杆菌表达载... 目的:从维甲酸诱导的白血病细胞系HL60中,克隆编码219个氨基酸的新基因restin,构建原核表达载体、制备抗血清并进行初步应用。方法:采用PCR技术,以维甲酸诱导的白血病细胞的cDNA为模板,扩增出restin的编码区。将其克隆入大肠杆菌表达载体中。经过温度诱导获得restin表达蛋白。利用SDS-PAGE纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备该蛋白的抗血清。以该抗体做间接免疫荧光,初步观察restin在COS-7细胞内的表达分布。结果:大肠杆菌中表达的restin蛋白的Mr为26000。将其初步纯化后免疫新西兰白兔制备的抗血清,用Westernblot检测其效价为1∶800。间接免疫荧光显示,restin蛋白主要分布在细胞核内。结论:成功地制备抗restin的抗体,为进一步研究restin蛋白在组织中的表达、细胞内亚定位以及信号转导通路提供了前提条件。 展开更多
关键词 细胞静息相关因子(restin) 抗血清 表达 间接免疫荧光
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血管发生抑制因子restin的克隆表达及其抗血管活性的初步研究 被引量:2
2
作者 张革 柯细松 +2 位作者 冯涛 周兰 曾昭淳 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第3期194-197,共4页
目的 :克隆人血管发生抑制因子restin(hRS) ,在E .coli中融合表达 ,并测定其抗血管活性。方法 :用RT PCR法从中国人胎盘组织中扩增hRS基因 ,重组入pGEM T载体中并测序鉴定 ,构建原核表达载体pGEX hRS ,表达融合蛋白GST hRS。融合蛋白经... 目的 :克隆人血管发生抑制因子restin(hRS) ,在E .coli中融合表达 ,并测定其抗血管活性。方法 :用RT PCR法从中国人胎盘组织中扩增hRS基因 ,重组入pGEM T载体中并测序鉴定 ,构建原核表达载体pGEX hRS ,表达融合蛋白GST hRS。融合蛋白经亲和纯化及凝血酶切后 ,采用鸡胚绒毛膜尿囊膜试验检测其抗血管生成活性。结果 :RT PCR产物为 5 64bp ,测序结果与Genbank中胶原XV(COL15A1)的C端序列一致 ,但在 2 1位 (TCT→TCG)引起丝氨酸的同义突变 ,82位 (ACA→TCA)引起丝氨酸突变为苏氨酸。诱导表达的人GST hRS融合蛋白经凝血酶切后 ,分子量为 2 0kD ,具有抗血管生成活性。结论 :hRS的成功克隆、表达为抗血管生成治疗实体瘤的研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 血管发生抑制因子 restin 融合表达 抗血管生成活性 胎盘组织 基因克隆
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黑色素瘤相关抗原家族新基因restin的组织表达谱 被引量:2
3
作者 路凡 胡沛臻 +2 位作者 傅海燕 赵文明 赵忠良 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期31-36,共6页
Restin是从维甲酸诱导肿瘤分化细胞中克隆的一种黑色素瘤相关抗原家族(MAGE)的新成员.对该基因在不同组织、不同细胞系的表达水平进行研究,将有利于揭示其生物学功能.使用α3-2P-dCTP标记人restin编码区基因作为探针,针对12种不同成人组... Restin是从维甲酸诱导肿瘤分化细胞中克隆的一种黑色素瘤相关抗原家族(MAGE)的新成员.对该基因在不同组织、不同细胞系的表达水平进行研究,将有利于揭示其生物学功能.使用α3-2P-dCTP标记人restin编码区基因作为探针,针对12种不同成人组织mRNA的Multiple TissueNorthern(MTN)膜和含76种成人、胎儿及常用细胞系mRNA的Multiple Tissue Expression(MTE)Array膜进行杂交分析,同时利用地高辛标记探针对11种常见肿瘤组织进行原位杂交检测.结果显示,MTN膜杂交中,12种组织显示均一杂交条带,约1.8 kb,提示该基因可能不存在剪接变异体;MTE膜杂交中,正常组织中均有不同程度的表达,但在肿瘤细胞系中均低表达或者不表达;原位杂交的结果显示,在8种恶性肿瘤组织中均不表达,而在3种良性肿瘤组织中呈现较低的表达.结果提示,该基因在正常组织中的表达明显高于肿瘤组织和肿瘤细胞系,完全不同于其它MAGE-A、B、C的组织表达方式.结合该基因在维甲酸诱导分化的肿瘤细胞中高表达,推测restin可能与正常细胞的分化、增殖有关. 展开更多
关键词 人黑色素瘤抗原编码基因 restin基因 杂交 组织分布
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restin基因转染对裸鼠胃癌移植瘤生长的影响 被引量:1
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作者 张建永 李锦毅 +3 位作者 李红玉 戴聪 马春雷 王向党 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第33期3713-3718,共6页
目的:探讨restin基因转染对胃癌细胞BGC-803裸鼠移植瘤生长抑制作用及对肿瘤血管生成的影响.方法:将重组质粒pEGFP-restin转染BGC-803细胞,以绿色荧光蛋白示踪其对胃癌细胞BGC-803生长的影响;RT-PCR鉴定目的基因的表达;通过裸鼠移植瘤... 目的:探讨restin基因转染对胃癌细胞BGC-803裸鼠移植瘤生长抑制作用及对肿瘤血管生成的影响.方法:将重组质粒pEGFP-restin转染BGC-803细胞,以绿色荧光蛋白示踪其对胃癌细胞BGC-803生长的影响;RT-PCR鉴定目的基因的表达;通过裸鼠移植瘤实验比较restin对裸鼠移植瘤的生长抑制作用,免疫组织化学染色方法观察微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果:重组质粒经RT-PCR扩增后在600bp处稳定表达;将pEGFP-restin重组质粒转染胃癌细胞BGC-803,荧光显微镜下见转染组细胞发出绿色荧光,肿瘤细胞形态不一;裸鼠移植瘤实验显示,与对照组(空载体组和未转染组)比较,转染组胃癌细胞生长速度缓慢,肿瘤体积小(P<0.01);空载体组与转染组的抑瘤率分别为3.60%、29.02%;免疫组化显示,转染组肿瘤微血管密度减少(4.25±0.29vs9.79±0.94,10.34±1.22,均P<0.05),转染组VEGF表达降低(12.24±3.45vs44.52±9.70,39.76±6.38,均P<0.05).结论:restin基因转染可抑制裸鼠移植瘤生长,影响肿瘤新生血管形成可能是其抗肿瘤作用之一. 展开更多
关键词 restin基因 转染 胃肿瘤 微血管密度 血管内皮生长因子
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MAGE家族新成员Restin入核分子机制的初步探讨 被引量:1
5
作者 王颖 于芳 +3 位作者 付海燕 杨国栋 卢凡 卢兹凡 《科学技术与工程》 2006年第18期2817-2821,共5页
restin是该实验室于1999年从维甲酸诱导分化的白血病细胞HL-60中克隆得到的一种黑色素瘤相关抗原(MAGE)家族的新基因,初步验证其生物学功能为阻滞细胞周期进程。利用生物学软件预测该基因所编码蛋白的N端含有一非典型二分裂核定位信号序... restin是该实验室于1999年从维甲酸诱导分化的白血病细胞HL-60中克隆得到的一种黑色素瘤相关抗原(MAGE)家族的新基因,初步验证其生物学功能为阻滞细胞周期进程。利用生物学软件预测该基因所编码蛋白的N端含有一非典型二分裂核定位信号序列(nuclearlocalizationsignal,NLS),且预测结果显示Restin入核可能与核转运蛋白importinαII的作用密切相关。因此克隆并鉴定了针对NLS等结构域的一系列截短体以及pACT-impotinαII,利用细胞双杂交技术对其进行相互作用以及作用部位的检测。结果证明Restin的入核确实与核定位信号序列以及核转运蛋白的相互作用有关。 展开更多
关键词 restin 核定位信号序列 IMPORTIN α
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人F3-Restin基因的克隆与表达 被引量:1
6
作者 刘洋 曾昭淳 《长江大学学报(自科版)(下旬)》 CAS 2009年第3期11-13,共3页
目的:克隆人F3-Restin基因,表达有生物学活性的新型融合蛋白F3-Restin。方法:采用亚克隆技术构建融合表达载体PET32a(+)-F3-Restin,原核诱导表达,经Ni2+-NTA琼脂糖树脂亲和层析纯化,透析去盐。结果:在20℃、10h的条件下IPTG原核诱导表... 目的:克隆人F3-Restin基因,表达有生物学活性的新型融合蛋白F3-Restin。方法:采用亚克隆技术构建融合表达载体PET32a(+)-F3-Restin,原核诱导表达,经Ni2+-NTA琼脂糖树脂亲和层析纯化,透析去盐。结果:在20℃、10h的条件下IPTG原核诱导表达、纯化,得到分子量约为40kD的高纯度的可溶性蛋白F3-Restin。结论:成功地克隆了人F3-Restin基因,构建融合表达载体PET32a(+)-F3-Restin,并表达出新型融合蛋白F3-Restin,为进一步研究F3-Restin蛋白抗肿瘤血管生长的活性及作用机理奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 F3-restin基因 克隆 表达 纯化
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重组蛋白F3-Restin生物学活性的初步研究
7
作者 刘洋 张爱华 +2 位作者 刘煜 曾昭淳 孙厚良 《长江大学学报(自科版)(下旬)》 CAS 2009年第4期11-12,20,91,共4页
目的:表达有生物学活性的新型融合蛋白F3-Restin,并纯化、鉴定,探讨F3-Restin融合肽的生物学活性。方法:在20℃、10h的条件下,IPTG诱导融合表达载体PET32a(+)-F3-Restin原核表达、纯化,得到分子量约为40kD的高纯度的可溶性蛋白F3-Restin... 目的:表达有生物学活性的新型融合蛋白F3-Restin,并纯化、鉴定,探讨F3-Restin融合肽的生物学活性。方法:在20℃、10h的条件下,IPTG诱导融合表达载体PET32a(+)-F3-Restin原核表达、纯化,得到分子量约为40kD的高纯度的可溶性蛋白F3-Restin,检测与HUVEC的亲和活性,CAM试验检测抗血管活性。结果:重组蛋白F3-Restin具有特异结合血管内皮细胞的能力,并能抑制新血管的生成。结论:初步表明新型融合蛋白F3-Restin仍具特异结合血管内皮细胞,抑制新血管生长的能力。 展开更多
关键词 F3-restin蛋白 融合表达 抗血管生成
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restin及其位点缺失体的表达载体构建、表达及分析
8
作者 王颖 耿惠敏 押挥远 《山西医科大学学报》 CAS 2009年第8期673-676,共4页
目的构建人restin及其核定位信号序列(nuclear localization signal,NLS)、酪蛋白激酶Ⅱ(casein kinaseⅡ,CKⅡ)作用位点缺失体基因rt1、rt2的真核表达载体并检测其在非洲绿猴肾细胞COS-7中的表达。方法应用RT-PCR方法从体外培养的人胚... 目的构建人restin及其核定位信号序列(nuclear localization signal,NLS)、酪蛋白激酶Ⅱ(casein kinaseⅡ,CKⅡ)作用位点缺失体基因rt1、rt2的真核表达载体并检测其在非洲绿猴肾细胞COS-7中的表达。方法应用RT-PCR方法从体外培养的人胚肾细胞HEK293的mRNA中扩增出restin及其缺失体基因的编码区,克隆至pMD18T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)3×flag,酶切鉴定正确后以脂质体法瞬时转染COS-7细胞,Western blot检测restin、rt1、rt2的表达及其亚细胞定位情况,从而确定功能位点缺失是否影响了Restin的核定位。结果测序证实PCR扩增得到的restin、rt1、rt2基因编码区序列正确;脂质体法转染COS-7细胞后检测到预期目的蛋白的表达。截取NLS/CKII位点阻滞了Restin的细胞核定位。结论成功构建了restin及其缺失体基因的真核表达载体并使其在COS-7细胞中表达并检测到功能结构域的缺失引起蛋白Restin的核定位变化。 展开更多
关键词 restin NLS/CKII位点 真核表达载体 核定位
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全反式维甲酸对乳腺癌MCF-7细胞周期和增殖活性的影响及restin基因表达的初步研究 被引量:1
9
作者 姚允怡 傅海燕 +4 位作者 雷初朝 杨国栋 李华 路凡 赵忠良 《西南国防医药》 CAS 2006年第3期238-240,共3页
目的:检测全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)在乳腺癌MCF-7细胞周期、增殖、分化和凋亡过程中的作用,以及对。restin基因表达的影响,从而为研究其功能提供线索。方法:用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的变化;MTT 法检测细胞增... 目的:检测全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)在乳腺癌MCF-7细胞周期、增殖、分化和凋亡过程中的作用,以及对。restin基因表达的影响,从而为研究其功能提供线索。方法:用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的变化;MTT 法检测细胞增殖活性;RT-PCR检测restin基因表达。结果:在ATRA诱导下,细胞出现G1期阻滞和生长抑制,增殖活性下降,restin基因开始表达,并呈增长趋势。结论:在ATRA诱导MCF-7细胞分化、凋亡过程中,ATRA能使MCF-7细胞 G1期阻滞,并能抑制MCF-7细胞生长,促使其凋亡,restin基因参与细胞周期的调控,特别是细胞凋亡。 展开更多
关键词 全反式维甲酸 乳腺癌MCF-7细胞 流式细胞仪 细胞周期 MTT restin
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Restin基因启动子的克隆及其在HeLa细胞中的转录活性
10
作者 王瑞华 傅海燕 +2 位作者 杨国栋 路凡 赵忠良 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第1期46-48,共3页
目的:扩增细胞静息因子(restin)基因启动子并构建该启动子的荧光报告系统,探讨其对全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)刺激的反应.方法:①对restin基因上游约2000bp基因组序列进行计算机生物信息学分析.②利用PCR技术扩增restin... 目的:扩增细胞静息因子(restin)基因启动子并构建该启动子的荧光报告系统,探讨其对全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)刺激的反应.方法:①对restin基因上游约2000bp基因组序列进行计算机生物信息学分析.②利用PCR技术扩增restin基因上游序列,将其克隆入pG5-luc中,插入荧光素酶报告基因上游,取代5个GAL-4结合位点及腺病毒启动子,构建Rp-luc质粒.③将构建的质粒转染入He-La细胞,ATRA诱导检测该质粒中荧光素酶的表达.结果:酶切及测序结果均证实成功克隆了restin基因上游序列,已将该序列插入到荧光素酶基因的上游;ATRA诱导转入HeLa细胞中的真核表达载体Rp-luc,荧光素酶表达明显增加.结论:成功构建了含有restin基因启动子序列的荧光报告系统,为进一步研究restin基因功能及其转录调控奠定了基础. 展开更多
关键词 restin 转录调控 启动子 全反式维甲酸
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pEGFP-restin重组质粒的构建及其在BGC-803胃癌细胞中的表达
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作者 戴聪 李锦毅 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第35期3937-3940,共4页
目的:构建一种含人肿瘤休眠蛋白基因(restin)的质粒,以绿色荧光蛋白作为报告基因,观察其在胃癌细胞中的表达,为探讨其抗肿瘤作用的分子机制打下基础.方法:从人胚肾组织中,以RT-PCR方法扩增restin基因片段,将restin片段和增强型绿色荧光... 目的:构建一种含人肿瘤休眠蛋白基因(restin)的质粒,以绿色荧光蛋白作为报告基因,观察其在胃癌细胞中的表达,为探讨其抗肿瘤作用的分子机制打下基础.方法:从人胚肾组织中,以RT-PCR方法扩增restin基因片段,将restin片段和增强型绿色荧光表达质粒pEGFP-C1酶切、纯化、连接、转化、筛选,构建pEGFP-restin重组质粒,转染胃癌细胞,荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达,并对表达产物进行Westernblot鉴定.结果:RT-PCR产物经琼脂糖电泳,在预期位置(600bp)处阳性条带表达;重组载体经酶切分析,插入片段表达restin基因;pEGFP-restin重组质粒成功转染胃癌细胞,在荧光显微镜下强绿色荧光蛋白表达,Westernblot鉴定结果显示pEGFP-restin上的restin基因在BGC-803细胞中正确表达.结论:成功构建了pEGFP-restin重组质粒,为进一步研究restin的功能提供了重要的实验材料. 展开更多
关键词 休眠基因 绿色荧光蛋白 质粒构建 基因转染 胃癌
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人黑色素瘤相关抗原Restin的克隆和表达
12
作者 王卫华 路凡 沈琦 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第23期4407-4410,共4页
目的:通过对原核表达载体、表达条件和宿主菌的优化,利用原核表达系统有效表达可溶性的人Restin融合蛋白。方法:应用PCR方法扩增获得Restin编码区,克隆入原核表达载体pET44a(+),分别转化E.coli BL21(DE3)和E.coli Rosetta-gamiTM2(DE3)... 目的:通过对原核表达载体、表达条件和宿主菌的优化,利用原核表达系统有效表达可溶性的人Restin融合蛋白。方法:应用PCR方法扩增获得Restin编码区,克隆入原核表达载体pET44a(+),分别转化E.coli BL21(DE3)和E.coli Rosetta-gamiTM2(DE3),不同的IPTG浓度诱导表达Restin重组融合蛋白,SDS-PAGE和Western Blot分析表达产物。结果:成功构建了重组载体pET44a(+)-Restin,并在E.coli Rosetta-gamiTM2(DE3)中获得了可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的8.9%。结论:可溶性Restin融合蛋白的获得为后续的功能研究、蛋白制备及其抗体研制奠定了基础。 展开更多
关键词 restin 原核表达 重组融合蛋白
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p53对restin基因转录表达的调控作用 被引量:1
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作者 王瑞华 路凡 +5 位作者 傅海燕 杨国栋 吴有盛 卢兹凡 赵文明 赵忠良 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2006年第3期267-272,共6页
restin基因是Zhu等人从全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导肿瘤细胞分化时克隆得到的一种黑色素瘤抗原相关基因.前期研究表明,该基因与细胞周期阻滞有关.由于p53在细胞增殖调控中占据重要地位,并且与维甲酸具有诱导关系... restin基因是Zhu等人从全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导肿瘤细胞分化时克隆得到的一种黑色素瘤抗原相关基因.前期研究表明,该基因与细胞周期阻滞有关.由于p53在细胞增殖调控中占据重要地位,并且与维甲酸具有诱导关系,因此本研究试图揭示维甲酸诱导restin基因表达是否与p53有关.将p53转染真核细胞,研究restin与p53的表达关系.结果表明p53能诱导restin基因转录增加.进一步分析发现,restin基因5′端上游约2 kb基因组序列中存在p53蛋白结合位点.扩增该序列构建荧光报告系统,检测到该报告系统可以接受维甲酸的诱导调控.在此基础上,研究p53对缺失p53结合位点的截短体报告质粒和p53结合位点突变后的报告质粒的作用,结果显示p53调控restin基因的表达与该基因上游序列区中的p53结合位点无关,推测p53对restin基因的表达调控可能还存在其他分子的相互作用. 展开更多
关键词 启动子报告系统 restin P53 全反式维甲酸
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Cloning and biological comparison of Restin,a novel member of Mage superfamily 被引量:5
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作者 赵忠良 杨辉 +3 位作者 路凡 柴玉波 朱峰 陈苏民 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2002年第4期412-420,共9页
In the present study, a new member of melanoma associated antigens (Mage), named Restin (219 amino acids), was identified from HL-60 cell induced by all-trans-retinoic acid (ATRA) by PCR-based subtractive hybridizatio... In the present study, a new member of melanoma associated antigens (Mage), named Restin (219 amino acids), was identified from HL-60 cell induced by all-trans-retinoic acid (ATRA) by PCR-based subtractive hybridization. Bioinformatics analysis found this novel gene shares high homolog with Necdin (a neuronal growth suppressor, 49%). Both of them are basic proteins. Moreover, the Restin, Necdin and Mages are in one protein superfamily. This fact indicates that the Restin and Mages are mutually related but functionally different. Further analysis found that they can be divided into two subgroups, the acid and the basic. Restin, Necdin and Mage-D1 have an alkaline conserve region (PI is from 8.6 to 10.1), which are not or less expressed in tumor tissues but mostly in normal tissues. It has been reported that Necdin can arrest the cell proliferation by interaction with p53 and E2F1. Therefore, all of them are probably related to arrest the cell cycle. However, the Mage A and C are primarily acid proteins (PI is from 4.2 to 4.9), not expressed in normal tissues but in tumors. It is quite probable that these proteins are involved in the cell proliferation. We therefore suggest that these two protein families might be a pair of control elements of cell cycle-l'in cycle or out of cycle'. 展开更多
关键词 Bioinformatics Mage Necdin restin.
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Interaction of Restin with transcription factors 被引量:5
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作者 WU Yousheng LU Fan +4 位作者 QI Yinxin WANG Ruihua ZHANG Jian LU Zifan ZHAO Zhongliang 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2005年第3期256-262,共7页
Restin,a member of melanoma-associated antigen superfamily gene,was first cloned from differentiated leukemia cell induced by all trans-retinoic acid,and was able to inhibit cell proliferation,but the molecular mechan... Restin,a member of melanoma-associated antigen superfamily gene,was first cloned from differentiated leukemia cell induced by all trans-retinoic acid,and was able to inhibit cell proliferation,but the molecular mechanism was not clear.Since Restin was localized in cell nucleus,and its homolog member,Necdin(neuronal growth suppressor factor),could interact with transcription factors p53 and E2F1,we proposed that Restin might also function as Necdin through interacting with some transcription factors.In this study,transcription factors p53,AP1,ATFs and E2Fs were cloned and used in the mammalian two-hybrid system to identify their in-teraction with Restin.The results showed that only ATF3 had a strong interaction with Restin.It is interesting to know that ATF3 was an important transcription factor for G1 cell cycle initiation in physiological stress response.It was possible that the inhibition of cell proliferation by Restin might be related with the inhibition of ATF3 activity. 展开更多
关键词 restin transcription factor two-hybrid.
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Transcriptional upregulation of restin by p53 被引量:2
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作者 WANG RuiHua LU Fan +4 位作者 FU HaiYan WU YouSheng YANG GuoDong ZHAO WenMing Zhao ZhongLiang 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2007年第1期88-92,共5页
Restin, belonging to the melanoma-associated antigen superfamily, was firstly cloned from the differentiated HL-60 cells when induced by all-trans retinoic acid ( ATRA ) in our lab. Our previous results showed that re... Restin, belonging to the melanoma-associated antigen superfamily, was firstly cloned from the differentiated HL-60 cells when induced by all-trans retinoic acid ( ATRA ) in our lab. Our previous results showed that restin might be correlated to cell cycle arrest. Due to the importance of p53 in the regulation of cell growth and the relationship between p53 and ATRA, we tried to test the relationship between p53 and restin. Firstly, transfection results showed that p53 was able to upregulate the expression of restin at the transcriptional level when p53 was transfected into eukaryotic cells. Secondly, the bioinformatics analysis revealed that the upstream sequence (about 2 kb) from the first ATG of the ORF of restin gene contained a p53 binding site. In order to confirm that p53 was involved in the transcriptional regulation of restin, we cloned the upstream sequence of restin and constructed the promoter luciferase reporter system. From the luciferase activity, we demonstrated that the promoter of restin gene could be induced by ATRA. Then, another two luciferase reporter plasmids driven by the reporter of restin with no (RP?p53-luc) or mutant (mRP-luc) p53 binding site were constructed to see the regulation of restin by p53. Results showed that the transcriptional upregulation of restin gene was not due to the putative p53 binding site on the upstream of restin gene. We proposed that p53 upregulated restin transcription through an indirect way rather than direct interaction with the cis-activating element of the restin promoter. 展开更多
关键词 restin P53 PROMOTER ATRA luciferase reporter system
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大孔树脂纯化沙苑子总黄酮工艺优选 被引量:5
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作者 吴晓 周礼明 +1 位作者 马威 刘春宇 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2015年第1期54-57,共4页
目的:优选大孔吸附树脂纯化沙苑子总黄酮的工艺。方法:考察AB-8、D-101和NKA-9树脂对沙苑子总黄酮的吸附及解吸性能,筛选树脂型号;以总黄酮含量为指标,采用单因素试验和正交试验优选AB-8树脂纯化工艺条件。结果:选用AB-8型大孔吸附树脂... 目的:优选大孔吸附树脂纯化沙苑子总黄酮的工艺。方法:考察AB-8、D-101和NKA-9树脂对沙苑子总黄酮的吸附及解吸性能,筛选树脂型号;以总黄酮含量为指标,采用单因素试验和正交试验优选AB-8树脂纯化工艺条件。结果:选用AB-8型大孔吸附树脂,优选的工艺条件为:上样液质量浓度10 mg·m L-1,样品液p H 5.0,上样速度为1.0 m L·min-1,乙醇洗脱浓度40%,洗脱流速为1.5 m L·min-1;经AB-8处理后的沙苑子总黄酮纯度达50%。结论:AB-8型大孔吸附树脂能有效地纯化富集沙苑子总黄酮。 展开更多
关键词 大孔树脂 沙苑子总黄酮 纯化工艺
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A Day with Beijing's Vegetable Sellers
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作者 蓝丽妮 《Women of China》 2004年第7期34-37,共4页
Wang Jiyong, among the thousands of retail sellers who keep Beijing's inhabitants and restaurants supplied with fresh vegetables, left his little village in Henan Province 17 years ago, later to be joined by his w... Wang Jiyong, among the thousands of retail sellers who keep Beijing's inhabitants and restaurants supplied with fresh vegetables, left his little village in Henan Province 17 years ago, later to be joined by his wife, Zhang Chunling, his brother, his son and his father. With perseverance and determination, and a well-organized distribution of work within the family, they manage to make a living not only for themselves, but also for members of the family who live back in their home town. 展开更多
关键词 英文 新鲜的蔬菜 家庭 restin CARRY have 月面 守中 成包 grand
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关于on one’s+n.结构
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作者 王桂珍 《当代外语研究》 1996年第7期26-26,共1页
《英语世界》94年第一期16页第31段(英汉对照读物)有这样一段话: 原文:Once,about 20 feet away,a bear rose on its haunches to stare downat her.Don’t move!She thought,Don’t even blink! 译文:有一次,离她二十英尺的地方,一... 《英语世界》94年第一期16页第31段(英汉对照读物)有这样一段话: 原文:Once,about 20 feet away,a bear rose on its haunches to stare downat her.Don’t move!She thought,Don’t even blink! 译文:有一次,离她二十英尺的地方,一只熊蹲在后腿上,直着上身,一双眼睛直盯着她。“不能动!”她想到,“甚至眼睛都不能眨!” 展开更多
关键词 英语世界 英汉对照 旧建筑物 包装箱 restin 修饰词 支撑面 主语 译文 语境
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