柱切换技术-高效液相色谱法快速检测大鼠血浆中的普萘洛尔对映体

建立了快速检测大鼠血浆中普萘洛尔对映体浓度的柱切换-高效液相色谱法。将自制限进填料柱作为预处理柱,通过直接进样方式,使普萘洛尔对映体在预处理柱上保留,同时除去血浆中的蛋白质等大分子;再通过柱切换技术,使普萘洛尔对映体在键合型纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)(Chiralcel OD-RH)分析柱上得到手性拆分。通过条件优化,确定切换前预处理流动相为硼酸盐缓冲液(pH 8.5)-甲醇(95∶5,v/v),流速为1.0mL/min;切换后分析流动相为异丙醇-乙醇-0.2 mmo l/L硼酸盐缓冲液(pH 8.5)(30∶30∶40,v/v/v),流速为0.8mL/min;切换时间为3 min;柱温为25℃;检测波长为293 nm。普萘洛尔两对映体在25～500 mg/L的质量浓度范围内具有良好的线性关系(r=0.999 5),3个加标水平(50、100、250 mg/L)的平均回收率为97.89%～101.56%,日内和日间精密度均小于5%。该方法简便、快速、灵敏、准确,适于血浆样本中手性药物的药代动力学研究。

RAM-HPLC测定人血清及房水中丝裂霉素的浓度

目的:建立一种快捷、灵敏的高效液相色谱法测定肿瘤病人血清及青光眼患者手术后房水中丝裂霉素(MMC)浓度的方法。方法:使用 Waters HPLC 仪,配有限进介质填料(RAM)直接进样固定相,甲醇-水为10:90,流速为0.8 mL·min^(-1)的流动相,紫外二极管阵列检测器,测定了胃癌、胆囊癌及肝癌病人化疗后的血清及青光眼患者手术后房水中 MMC 的浓度。结果:MMC 与血清及房水中的蛋白质有良好的分离,保留时间为5.6 min。在40～200μg·L^(-1)水中及50～2000μg·L^(-1)血清中浓度范围内均显良好的线性关系,r 分别为0.9912与0.9991,日内变异<4%,日间变异<8%,回收率近100%。结论:RAM-HPLC 法,样品不经前处理,简单快速,精密度好,用此法可用于包含 MMC 的化疗方案的监测及药动学的研究。

在线柱切换RP-HPLC测定人血清中卡马西平浓度

目的:通过在线样品预处理柱切换技术建立测定人体血清中卡马西平血药浓度的高效液相色谱法。方法:样品预处理采用 LiChroCART(25 mm×4 mm,25μm)预柱,分析柱为 Microsorb-MV C_(18) column(150 mm×4.6 mm,4μm);以水-乙醇(95:5,v/v)为血清蛋白冲洗流动相(流速2 mL·min^(-1)),水-乙醇(40:60,v/v)为分析流动相,流速0.8 mL·min^(-1);柱温:室温;检测波长285 nm。结果:本方法线性范围为2.0～40.0μg·mL^(-1),r=0.9997,定量下限为2μg·mL^(-1),日内、日间精密度 RSD 小于5%,方法回收率均大于95%。结论:该方法准确、稳定,灵敏度高,适用于卡马西平临床治疗药物监测的需要。

RAM-HPLC在线富集技术检测脑脊液中利福平的浓度

目的建立大体积直接进样的限进性液相色谱（RAM-HPLC）法,实现脑脊液样品的在线直接进样富集并检测脑脊液中的利福平。方法以自制限进性填料柱为前处理柱,Luna C18为分析柱,前处理流动相为水―甲醇（95∶5,V/V）,流速为1 m L/min,分析流动相为甲醇-乙腈-10 mmol/L乙酸铵溶液（60∶5∶35,V/V/V）,柱温为25℃,检测波长为254 nm。结果选择100μL为进样体积,其峰面积是进样量为20μL时的5.33倍,有效提高了HPLC的检测灵敏度。利福平在0.25~8μg/m L的浓度范围内浓度和峰面积具有良好的线性关系（r=0.9997）,LOD和LOQ分别为0.07μg/m L和0.25μg/m L,日内日间精密度均小于5%,低中高3个浓度下的空白加样回收率为87.69%~102.11%,测定给药（剂量为10 mg/kg）2 h后的人脑脊液中利福平浓度为0.29μg/m L。结论该方法简单快速,适用于脑脊液中利福平的富集检测,满足临床个体化用药指导。

限进介质烷基-二醇基硅胶(ADS)的制备

烷基 二醇基硅胶 (ADS)系限进介质的一种 ,可用于含生物大分子的复杂生物样品的直接进样与分析。一种新的、非常经济的方法可用于烷基 二醇基硅胶的制备。首先 ,将γ 环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷基键合至微孔硅胶上 (粒度 5 μm ,孔径 6nm)以制备环氧基硅胶 ,再令环氧基硅胶与硬脂酸在有机溶液中进行反应以制备酯型十八烷基反相填料。将制得的反相填料填充至色谱柱中 ,并令含有酯酶的溶液通过色谱柱。通过酶解作用可将硅胶表面的酯基除去 ,而硅胶的内孔表面仍保持疏水特性不变 ,这是由于硅胶上的小孔对酶分子具有体积排除作用。色谱评价证实了所制备填料的限进色谱行为。

RAM-HPLC法测定肝癌病人血浆中丝裂霉素浓度

目的建立一种快捷、灵敏的高效液相色谱法测定肝转移癌病人血浆中丝裂霉素(MMC)浓度的方法。方法用HPLC仪,配有限进介质(RAM)直接进样固定相及紫外二极管阵列检测器,测定肝转移癌病人动脉灌注丝裂霉素后血药浓度,用3P97软件进行模拟,计算其药代动力学参数。结果MMC在50～2000ug·L-1内线性关系良好,日内变异<4%,日间变异<8%,回收率近100%。在肝癌病人中,Cmax为1.19μg·mL-1,AUC为60.51μg·min·mL-1。结论本方法样品不经前处理,简单快速,精密度好,可用于肝动脉灌注MMC化疗方案的药代动力学研究。

基于RAM-HPLC在线富集技术检测大鼠血浆及尿液中的呋塞米

目的通过柱切换技术建立限进性填料柱-高效液相色谱法,实现在线直接进样并检测大鼠血浆及尿液中的呋塞米。方法以自制限进填料柱为预处理柱,Luna C18柱为分析柱,预处理流动相为水-甲醇（95∶5,V/V）,含体积百分数为0.1%的甲酸,流速为1 ml/min;分析流动相为血浆：甲醇-水（65∶35,V/V）,尿液：甲醇-水（55∶45,V/V）,均含体积百分数为0.1%的甲酸,流速均为1ml/min,柱温为25℃;检测波长为274 nm。结果呋塞米血浆样品在进样100μl时,富集效果良好,在0.1-3.2μg/ml的浓度范围内具有良好的线性关系（r=0.9995）,尿液进样20μl,呋塞米浓度在0.5-32μg/ml范围内具有良好的线性关系（r=0.9991）,血样及尿样的三个加标水平下的平均回收率分别为101.82%-113.36%,98.75%-112.27%,日内日间精密度均小于5%。结论药代动力学参数AUC0→24为6.265μg/（ml·h）,t1/2为2.447 h,Cmax为1.414μg/ml;24 h内呋塞米的累积排泄率为32.50%-39.08%。本方法简单快速,适用于血浆及尿液中呋塞米的直接进样检测。

Sub-1G受限接入窗的离散事件网络仿真设计

以Sub-1G无线网络的吞吐性能为分析对象,基于离散事件网络仿真软件NS2,设计IEEE802.11ah受限接入窗(RAW)的仿真模型,着重于媒质访问控制、传输流程及状态控制定时器。在分析RAW及业务流量指征图(TIM)等技术规范的基础上,论述了帧处理、业务分组缓存和TIM编码的仿真实现方案。通过与传统分布式协调功能的对比实验,对仿真模型的逼真度和可行性进行验证。

柱切换高效液相色谱法测定人血浆中替米沙坦浓度

目的:建立柱切换高效液相色谱(HPLC)法直接进样测定人血浆中替米沙坦浓度。方法:血浆样品直接进样,经限进填料(RAM)预柱用甲醇-水(10:90)在线净化和富集,然后洗脱切入 C_(18)分析柱用甲醇-水(63:37)进行分离,荧光检测λ_(ex)302nm/λ_(em)365nm。结果:标准曲线线性范围10～2000μg·L^(-1)(r=0.9995);回收率为95.4%～97.7%(n=5);日内 RSD 为0.2%～2.6%(n=5),日间 RSD 为2.1%～4.1%(n=5);最低检测浓度为0.51μg·L^(-1)。结论:本法简便、可靠,适用于测定人血浆中替米沙坦浓度及其药动学的研究。

新型限进色谱在临床药物分析中的应用

限进填料属于特殊萃取介质之一,允许复杂生物基质样品直接进样分析,结合液相色谱系统可以实现生物样品自动化直接进样,简化并加速了样品预处理过程。本文简要介绍了限进填料固相萃取原理及分类,并对该技术在临床药物分析及药代动力学领域中的应用现状及发展趋势作了详细的综述。

通过柱切换技术与高效液相色谱联用的限进性柱对盐酸贝那普利的在线富集性能

以自制的限进性填料柱为预处理富集柱,Luna C18柱为分析柱,通过柱切换技术将限进性填料柱与高效液相色谱联用(RAM-HPLC),研究了盐酸贝那普利的在线富集效果。考察了进样体积与峰面积、系统总压力的关系,以及常规进样与大体积进样的差别。当进样体积在100μL以内时,峰面积随进样体积的增加而增加;当进样体积大于80μL时,系统总压力变化明显。考虑对整个系统的保护,选择80μL作为最大进样体积。同一浓度的样品进样20μL与进样80μL所得峰面积之间的线性关系良好。RAM柱对盐酸贝那普利具有良好的富集作用,能够有效提高HPLC的灵敏度,而且具有简单、经济的特点。

体液直接进样固定相的研究进展

评述了生物体液直接进样高效液相色谱固定相的制备、结构性能及应用.其特点可概括为:只允许生物体液中蛋白质等大分子物质与亲水的生物相容的固定相表面接触,使其在柱中无保留地洗脱,而小分子物质可获得保留.达到直接进样分析的目的.

高灵敏度孔雀石绿选择电极的研制

基于限进介质-分子印迹聚合物二维功能材料（RAM-MIPs）对孔雀石绿离子通量的抑制、特异性识别和排除基体干扰能力,以孔雀石绿—四苯硼钠离子缔合物为电活性物质,构建成PVC为基质膜的高灵敏度孔雀石绿选择电极。在pH 3pH 7.5溶液中,电极的线性范围为3.2×10-81×10-3mol/L,斜率为54.2 mV/pC,检出限为约7×10-9mol/L,选择性、精密度和准确度好。可用于水体、水产品中孔雀石绿的含量测定。

不同血样处理对高效液相色谱法测定血清丝裂霉素含量的影响

目的:考查不同的血样处理方法对血清中丝裂霉素(mitomycin C,MMC)含量的影响。方法:使用Waters HPLC仪,配有限进填料(RAM)直接进样固定相,流动相:甲醇水(10∶90);流速:0.8 mL·min-1;紫外二极管阵列检测器,比较了血清样品不同处理方法的重现性、稳定性,并与血清直接进样进行比较。结果:不同的血清样品处理方法对MMC含量的影响不同,在萃取法中用氯仿异丙醇较醋酸乙酯萃取率高,沉淀法用乙腈沉淀对MMC含量影响较小。直接进样中MMC与血清中的蛋白质有良好的分离。结论:在MMC的血清样品处理方法中,用RAM HPLC法直接进样,样品不经前处理,简单快速,精密度好,但对一些取样量较大且含量较低的样品,萃取法为一种有效的方法。

高效液相色谱法测定兔房水中氟脲嘧啶和丝裂霉素的含量

目的:测定壳聚糖膜和兔眼房水中氟脲嘧啶(5 Fu)和丝裂霉素(MMC)的含量。方法:使用WatersHPLC仪,配有浸透限 制固定相(RAM)直接进样,流动相为甲醇 水(10∶90),流速为0.8mL·min-1,紫外二极管阵列检测器,测定溶液和房水中的5 Fu、 MMC浓度。结果:5 Fu和MMC与房水中的蛋白质有良好的分离,保留时间分别为3.8min和5.6min。两种药物在规定的浓度范 围内都显良好的线性关系,日内RSD<4%,日间RSD<7%,平均回收率分别为99.50%和99.04%。结论:RAM HPLC法样品不 经前处理,简单快速,精密度好,回收率高。当壳聚糖膜吸附了5 Fu和MMC置于兔眼内时,用本法已测定了其释放药物过程。

在线柱切换反相高效液相色谱法测定大鼠血浆丁螺环酮浓度及药代动力学研究

目的 利用在线柱切换反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定大鼠血浆丁螺环酮浓度及药代动力学.方法 以自制限进填料柱为预处理柱,Luna C18柱为分析柱,预处理流动相为水-甲醇（95∶5,V/V）,流速为1 ml/min;分析流动相为甲醇-5 mmol/L甲酸铵（75∶25,V/V）,流速为1 ml/min,切换时间为3 min,柱温为25℃;检测波长为283 nm.选取Wistar大鼠6只,禁食12 h,按15 mg/kg剂量给予丁螺环酮片剂灌胃,并于给药后0.08、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、8、12、24 h经大鼠眼球后静脉丛采血0.5 ml,离心,取上清液进样,观察血药浓度-时间曲线下面积、半衰期（t1/2）、最大浓度（Cmax）、清除率（CLZ）.结果 丁螺环酮在0.2~4.8 μg/ml的浓度范围内具有良好的线性关系（r=0.9993）,3个加标水平（0.3、0.6、2.4 μg/ml）的平均回收率为96.03%、104.67%、105.76%,日内和日间精密度均〈5%.血药浓度-时间曲线下面积AUC0→8为3.023 μg/（ml·h）,AUC0→∞为4.056 μg/（ml·h）,t1/2为3.944 h,Cmax为1.38 μg/ml,CLZ为3.712 L/（h·kg）.结论 RP-HPLC简便、快速、灵敏、准确,适用于血浆样品中丁螺环酮的药代动力学研究.

限进液相色谱法同时测定人血浆中拓扑替康内酯型和羧酸型的浓度

目的:使用限进填料液相色谱法,建立一个直接进样同时测定人血浆中拓扑替康内酯型和羧酸型浓度的方法。方法:限进填料色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);柱温:40℃;流动相:甲醇-0.05 mol/L磷酸盐缓冲液(含1%三乙胺,pH6.6)=13:87(v/v);流速:1ml/min;进样量:20μl;荧光检测λex390nm/λem520nm。结果:平均回收率为94.50%,校正曲线线性范围为15~1000ng/ml。日内和日间RSD均<7%。由分析结果推得的动力学方程显示,37℃时在人血浆中拓扑替康内酯型和羧酸型为一级动力学过程,由此可进一步外推出采样时刻拓扑替康内酯型和羧酸型各自的浓度。结论:本法准确、快速,适用于拓扑替康两种结构的血药浓度同时测定及其药动学研究。

浸透限制液相色谱、毛细管电泳和荧光偏振免疫法测定人血中苯巴比妥浓度的比较

目的:比较浸透限制高效液相色谱法(RAM-HPLC)、荧光偏振免疫法(FPIA)和高效毛细管电泳法(HPCE)测定人血中苯巴比妥(PB)浓度的异同。方法:建立一种直接进样 RAM-HPLC 法测定血中 PB 的浓度,并与 FPIA 和 HPC E法相比较。结果:三种方法测定 PB 血样浓度的结果有良好的相关性,相关系数分别为0.979(RAM-HPLC 对 FPIA),0.985(HPCE 对 FPIA)和0.989(HPCE 对 RAM-HPLC)。FPIA 法测定 PB 血样的值略高于 RAM-HPLC 和 HPCE 法。结论:RAM-HPLC 优点是准确度高和省去了样品前处理;HPCE 是分辨率高和污染少;FPIA 是简单和快速。三种方法都可用于PB 的治疗药物监测。

限进介质色谱柱高效液相色谱法测定动物源性食品中对乙酰氨基酚残留量

将血药分析中使用的限进介质色谱柱的高效液相色谱法引入食品分析领域,简化动物源性食品分析中的样品处理过程,对肉类食品中对乙酰氨基酚残留量进行测定。使用苯基键合型限进介质色谱柱(150 mm×2.0 mm,5μm),流动相为0.1%乙酸-0.05 mol/L乙酸铵水溶液(A)-乙腈(B)条件下进行等度洗脱,流量为0.3 mL/min,柱温为30℃,样品只需进行液液萃取,然后直接进行液相色谱分析。猪肉、牛肉、羊肉样品中对乙酰氨基酚色谱峰分离良好,对乙酰氨基酚质量浓度在10~1000μg/L范围内标准曲线线性相关系数为r=0.9999。样品加标回收率为91.8%~99.3%,相对标准偏差小于5.9%(n=6)。该方法简便易行,能够大幅简化动物源性食品分析样品处理过程。

HPLC在线富集法研究高原药物呋塞米的药代动力学

目的建立柱切换技术和限进性填料柱-HPLC法，实现在线直接进样并检测大鼠血浆中的呋塞米含量。方法以自制限进填料柱为预处理柱，Luna C18柱为分析柱，预处理流动相为水-甲醇（95：5，V/VA），含体积百分数为0．1％的甲酸，分析流动相为甲醇-水（65：35，V/V），流速均为1ml·min-1，柱温为25℃；检测波长为274nm。结果呋塞米血浆样品在进样100m时，富集效果良好，在0．1～3．2Ixg·ml-1的浓度范围内具有良好的线性关系（r=0．9995），高、中、低（0．4、0．8、1．61μg·ml-1）3个浓度血样的平均回收率分别为111．31％、104．48％和99．76％，日内日间精密度均小于5％。结论本方法简单快速，适用于血浆中呋塞米的直接进样检测。