高效液相色谱法测定葡萄皮和葡萄籽中白藜芦醇的含量

测定不同品种葡萄皮和葡萄籽及酿酒后的葡萄皮渣中白藜芦醇的含量。应用乙腈 -水 (2 6∶74 )为流动相 ,检测波长 (λ)为 30 3nm ,柱温为 35℃ ,色谱柱 :SUPELCOSILTMLC 18(2 5 0mm× 4 6mm ,5 μm)。结果显示 ,葡萄皮中的白藜芦醇含量高于葡萄籽 ;不同品种葡萄皮中白藜芦醇含量差异较大 ,琐琐葡萄最低为0 985 0 μg g ,红克里米斯克葡萄最高为 15 4 195 μg g;同一产地同一品种葡萄皮中白藜芦醇含量依次为酿酒后的葡萄皮 >新鲜葡萄皮 >陈旧葡萄皮 。

2型糖尿病大鼠心肌PI3K/Akt/mTOR信号通路的改变及Sirt1的调控机制研究

目的检测Sirt1及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白在糖尿病大鼠心肌及高糖培养的H9C2细胞中的表达变化,明确其在糖尿病心肌病发生发展中的作用。方法高脂饮食联合链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,实验将大鼠分为糖尿病2周、4周、8周模型组和对照组,超声心动图检测大鼠心功能变化,Western blot检测大鼠心肌Sirt1、PI3K、Akt、mTOR、S6K1蛋白表达变化。将H9C2细胞分为正常对照组、DMSO组(78.12 mmol·L^(-1))、高糖(HG)组(33 mmol·L^(-1))、白藜芦醇(Res)组(20μmol·L^(-1))、尼克酰胺(Nam)组(40 mmol·L^(-1)),Western blot及qRT-PCR研究心肌细胞Sirt1、PI3K、Akt、mTOR、S6K1相关蛋白基因转录及表达,研究Sirt1对该信号通路的调控机制。结果在动物实验中,与2周DM大鼠比较,8周DM大鼠心肌Sirt1蛋白表达明显增加。2周模型组大鼠相对于正常对照组心肌PI3K、Akt、mTOR、S6K1表达明显增加,且S6K1表达4周模型组比2周模型组增加更明显,但8周表达降低。在高糖培养的H9C2细胞中,与对照组相比,高糖组Sirt1,PI3K,Akt,mTOR和S6K1表达明显增高。Nam处理组Sirt1表达明显降低,PI3K,Akt,mTOR和S6K1表达增高。Res处理组Sirt1表达明显增高,而PI3K,Akt,mTOR和S6K1表达降低。结论 Sirt1通过负调控PI3K/Akt/mTOR信号通路参与糖尿病心肌损伤,参与早期糖尿病心肌病的发生发展。

葡萄松散型愈伤组织的培养及其白藜芦醇含量的测定

【目的】获得葡萄(Vitisvini fera L.)松散型愈伤组织,并了解其白藜芦醇含量的变化。【方法】以葡萄的叶、叶柄和茎分别作为外植体,在不同激素组合(6-卞氨基嘌呤(6-BA)、激动素(KT)、吲哚丁酸(IBA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D))的培养基(以B5培养基为基本培养基,含30g/L蔗糖和6g/L琼脂)上,进行愈伤组织的诱导和继代培养,并利用高效液相色谱法(HPLC)对不同来源愈伤组织中的白藜芦醇含量进行测定。【结果】以葡萄叶为外植体时,诱导的愈伤组织出愈率很低;以叶柄和茎为外植体时,愈伤组织的出愈率均较高。利用叶柄和茎获得松散愈伤组织时,其诱导培养基组成分别是:B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L和B5培养基+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L,其继代培养基均为B5培养基+6-BA1.0mg/L+2,4-D0.1mg/L。在诱导培养基产生的愈伤组织中,白藜芦醇含量由高到低的顺序为叶柄>叶>茎。以叶、叶柄和茎为外植体诱导愈伤组织时,其白藜芦醇含量最高的培养基分别为B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.2mg/L、B5培养基+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L和B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.2mg/L。【结论】葡萄叶柄和茎易被诱导产生松散的愈伤组织,且经多次继代可以用于建立悬浮培养体系;葡萄愈伤组织中的白藜芦醇含量随外植体及培养基组成的不同而有所差异。

新疆葡萄中3种生物活性物质的含量分析

为开发利用新疆葡萄,分析了新疆葡萄中生物活性物质的构成及其含量。采用超声法和回流法分别提取葡萄皮、籽中的齐墩果酸、白藜芦醇和原花青素,用高效液相色谱法和比色法分别测定葡萄皮、籽中齐墩果酸、白藜芦醇和原花青素的含量。葡萄中齐墩果酸主要存在于葡萄皮中,含量可高达1%左右,符合工业化提取要求;地产葡萄品种的齐墩果酸含量相对高于欧洲引进品种;齐墩果酸含量比较:人工发酵葡萄皮>自然发酵葡萄皮>新鲜葡萄皮。葡萄皮白藜芦醇的含量高于葡萄籽;欧洲引进葡萄品种白藜芦醇含量相对高于地产葡萄;白藜芦醇含量比较:人工发酵葡萄皮>自然发酵葡萄皮>新鲜葡萄皮>陈旧葡萄皮。葡萄籽原花青素含量高于葡萄皮;地产与欧洲引进葡萄品种的原花青素含量比较接近;原花青素含量比较:新鲜葡萄籽>自然发酵葡萄籽>人工发酵葡萄籽。由结果可以看出新疆葡萄富含齐墩果酸、白藜芦醇及原花青素等多种具有营养保健功能的生物活性物质。

HPLC法测定藜芦中虎杖苷和白藜芦醇的含量

目的:建立HPLC法测定由甲醇加热回流和甲醇超声两种方法提取的藜芦中虎杖苷和白藜芦醇的含量的方法.方法:采用Spherigel C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为四氢呋喃-乙腈-水(40:40:220),流速1.0mL·min-1,检测波长303nm.结果:虎杖苷在0～50mg·L-1内成良好线性关系,平均回收率甲醇加热回流提取102.4%,RSD1.1%;甲醇超声提取97.2%,RSD1.1%.白藜芦醇在0～100mg·L-1内成良好线性关系,平均回收率甲醇加热回流提取96.6%,RSD1.5%;甲醇超声提取96.6%,RSD1.2%.结论:本法可作为藜芦质量控制的手段之一.

白藜芦醇对大鼠肾脏缺血-再灌注损伤保护作用研究

目的观察白藜芦醇(RES)对大鼠肾脏缺血-再灌注(I/R)保护作用并初步探讨其相关机制。方法 SD大鼠随机分为4组:空白对照组、I/R模型组、白藜芦醇(RES)处理组、RES+IR模型组;检测各组大鼠血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及肾脏病理学改变,使用超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)试剂盒检测肾脏组织SOD、MDA、GSH-PX产生;Western blot法检测肾脏组织p-AKT蛋白水平。结果与空白对照组相比,I/R模型组Cr、BUN含量均有升高,与I/R模型组相比,RES+I/R模型组Cr、BUN含量均有明显下降;病理学检测显示RES+I/R模型组肾脏损伤较I/R模型组明显减轻,肾小球结构基本正常,细胞间质有少量炎性细胞浸润,基底膜稍有增厚;与空白对照组相比,I/R模型组SOD、MDA、GSH-PX含量均有升高,与I/R模型组相比,RES+I/R模型组SOD、GSH-PX含量均有明显下降;Western blot检测显示,与空白对照组相比,I/R模型组p-AKT表达水平有所降低,但RES可提高pAKT表达水平,差异有统计学意义。结论 RES通过氧化应激保护I/R肾脏损伤,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路活化有关。

两种藜芦生品与醋制品中虎杖苷和白藜芦醇含量变化研究

采用柱层析色谱法从两种藜芦即黒紫藜芦(Veratrum japonicum)和藜芦(Veratrum nigrumL.)中分离得到二苯乙烯类化合物虎杖苷和白藜芦醇,利用核磁共振技术鉴定了它们的化学结构,其中虎杖苷为首次从该属植物中分离得到.结合HPLC-UV法,比较了两种藜芦生品与醋制品中虎杖苷和白藜芦醇含量变化.结果表明两种藜芦经醋制后,虎杖苷含量降低,白藜芦醇含量升高,并且两种藜芦中白藜芦醇含量差异不大,但藜芦中虎杖苷含量明显高于黑紫藜芦.

白藜芦醇外涂对模拟日光照射所致皮肤红斑的抑制作用

目的:观察白藜芦醇外涂对模拟日光照射皮肤红斑的影响。方法:将20名志愿者左右侧背部分别划出6个部位。部位1～4分别涂抹白藜芦醇+抗氧化剂、抗氧化剂、白藜芦醇、基质,左侧先涂抹后照光,右侧先照光后涂抹;部位5、6分别为阳性及阴性对照。连续4天,观察皮肤红斑。结果:照光后第1、2天,部位1～3无或隐约可见淡红斑;第3、4天,部位1、3红斑较第2天无加深,部位2红斑加深但较部位5轻。左侧形成的红斑较右侧相应部位轻。结论:白藜芦醇外用可有效预防与治疗模拟日光照射诱导的皮肤红斑,尤以预防性应用效果更好。

白藜芦醇对酪氨酸酶活性抑制作用的实验研究

目的:以邻苯二酚为底物,研究白藜芦醇在不同温度与浓度下对酪氨酸酶的抑制作用。方法:用冰丙酮提取新鲜雪梨中的酪氨酸酶,-20℃以下保存。将95%白藜芦醇用60%乙醇配制成不同浓度的溶液,测定白藜芦醇浓度改变、温度变化对酪氨酸酶活性的影响。结果:酪氨酸酶活性在30℃时酶活性最好,且白藜芦醇对酪氨酸酶有较强的抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)为5.3mmol/L。结论:白藜芦醇有较明显的酪氨酸酶抑制作用。

白藜芦醇对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的抑制作用与PI3K-Akt信号通路的关系

目的:探讨白藜芦醇对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响及与PI3K-Akt信号通路的关系。方法:50只成年雄性SD大鼠,随机分为5组,即对照组(SH组)、缺血再灌注组(I/R组)、白藜芦醇预处理组(Res组)、白藜芦醇预处理+渥曼青霉素组(Res+Wom组)、缺血再灌注+渥曼青霉素组(I/R+Wom组)。结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血模型,缺血45 min,再灌注120 min,测定再灌注心肌组织中NOS,NO的含量,并用末端脱氧核苷酸转移酶介导的带生物素的dUTP缺口末端标记(TUNEL)的方法测定细胞凋亡,免疫组化测定心肌组织中Bcl-2,Bax蛋白的表达,利用Western blot测定Akt(又称PKB,即蛋白激酶B)及p-Akt(即磷酸化蛋白激酶B)含量。结果:与I/R组及Res+Wom组比较,Res组NOS及NO表达增加,显著减轻心肌细胞凋亡,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax/Bcl-2降低,Akt的磷酸化水平增高,上述各项指标差异具有统计学意义(P<0.05),而上述变化能够被PI3K-Akt信号通路的特异性阻断剂渥曼青霉素所阻断,且其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:白藜芦醇能够抑制缺血再灌注所致的心肌细胞凋亡,此过程有PI3K-Akt信号通路的参与。