微RNA-30b-5p通过靶向Atg5抑制多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞自噬

目的·探究microRNA-30b-5p(miR-30b-5p)在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠中的表达及miR-30b-5p过表达对卵巢颗粒细胞(granulosa cell,GC)自噬的影响。方法·采用脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)建立PCOS大鼠模型,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)和Western blotting检测正常组和PCOS组大鼠卵巢组织中miR-30b-5p和自噬相关蛋白5同源物(autophagy-associated protein 5 homologue,Atg5)的表达。分离并培养原代PCOS大鼠卵巢GC,分为对照组、miR-NC组、miR-30b-5p过表达组、miR-30b-5p过表达+pcDNA3.1-NC组、miR-30b-5p过表达+pcDNA3.1-Atg5组,另取正常组大鼠卵巢GC为空白组;将miR-30b-5p mimic和pcDNA3.1-Atg5及相应的阴性对照转染到细胞中,转染48 h后,qRT-PCR检测各组细胞中miR-30b-5p和Atg5 mRNA表达,验证转染效果。CCK-8及流式细胞仪分别检测细胞活力和凋亡率;免疫荧光染色检测各组细胞微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)阳性表达;Western blotting检测自噬相关蛋白Atg5、p62、Beclin-1和LC3蛋白表达。结果·PCOS组大鼠卵巢组织中miR-30b-5p表达水平显著低于正常组,Atg5 mRNA和蛋白水平显著高于正常组(均P=0.000)。转染后,与空白组相比,对照组卵巢GC中miR-30b-5p水平、细胞凋亡率、p62蛋白水平显著降低,Atg5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、LC3阳性细胞百分比、Beclin-1蛋白水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高(均P=0.000);与对照组相比,miR-30b-5p过表达组卵巢GC中miR-30b-5p水平、细胞凋亡率、p62蛋白水平显著升高,Atg5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、LC3阳性细胞百分比、Beclin-1蛋白水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著降低(均P=0.000)。上调Atg5可明显减弱miR-30b-5p过表达对卵巢GC增殖和自噬的抑制作用(均P=0.000)。结论·MiR-30b-5p在PCOS中呈低表达;过表达miR-30b-5p可抑制PCOS大鼠卵巢GC增殖和自噬,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Atg5表达有关。

复发性流产患者胎盘绒毛中FTO mRNA和ALKBH5 mRNA水平表达及临床价值研究

目的 探讨胎盘绒毛组织中肥胖相关蛋白(fat mass and obesity associated protein,FTO)mRNA和AlkB同源蛋白5(Alk B homologous 5,ALKBH5)mRNA水平与复发性流产的相关性。方法 选取2019年12月~2021年1月深圳市中西医结合医院产科接收的98例复发性流产患者为复发性流产组,同期选取正常早孕人工流产者96例作为对照组。比较两组一般资料;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组受试者胎盘绒毛组织FTO mRNA和ALKBH5mRNA水平;采用Pearson法分析复发性流产患者胎盘绒毛组织FTO mRNA与ALKBH5 mRNA水平相关性;采用单因素及多因素Logistic回归分析影响复发性流产的因素。结果 复发性流产组胎盘绒毛组织FTO mRNA(0.72±0.16),ALKBH5 mRNA(0.64±0.18)水平低于对照组(1.02±0.24,1.01±0.21),差异均有统计学意义(t=10.263,13.185,均P <0.05)。复发性流产患者胎盘绒毛组织FTO mRNA与ALKBH5 mRNA水平呈正相关(r=0.537,P <0.05)。流产次数> 3次的复发性流产患者胎盘绒毛组织FTO mRNA(0.40±0.12),ALKBH5 mRNA(0.47±0.11)水平低于流产次数3次患者(0.86±0.18,0.72±0.14),差异具有统计学意义(t=12.615,8.561,均P <0.05)。单因素Logistic回归分析结果显示,孕囊大小为复发性流产发生的危险因素[OR(95%CI):2.025(1.468~2.794),P <0.05],FTO mRNA,ALKBH5 mRNA为复发性流产发生的保护因素[OR(95%CI):0.730(0.548~0.972);0.655(0.492~0.873),均P <0.05]。多因素Logistic回归分析结果显示,FTO mRNA和ALKBH5 mRNA为复发性流产发生的独立保护因素[OR(95%CI):0.674(0.519~0.874),0.541(0.392~0.747),均P <0.05]。结论 复发性流产患者胎盘绒毛组织FTO mRNA和ALKBH5 mRNA低表达,二者为复发性流产发生的独立保护因素。

恶性疟原虫网状细胞结合蛋白同源体5F1段的克隆、表达及初步鉴定

目的克隆表达恶性疟原虫网状细胞结合蛋白同源体5(PfRh5)F1片段,并评价其抗原性。方法 PCR扩增目的基因片段,克隆到表达载体pET28a(+)中,构建PfRh5F1/pET28a原核表达载体。IPTG诱导表达目的基因,SDS-PAGE电泳分析表达产物,并用WesternBlot检测其抗原性。结果成功构建了PfRh5F1/pET28a原核表达系统,并在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达,表达产物能被恶性疟原虫感染患者血清识别,而不能被间日疟原虫感染患者及正常人血清识别。结论恶性疟原虫PfRh5F1段在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性。

震颤同系物-5过表达对卵巢癌细胞A2780增殖和凋亡的影响

目的:探讨RNA结合蛋白震颤同系物-5(QKI-5)在卵巢癌细胞中的表达以及对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:通过免疫印迹实验(Western blot)检测正常卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞中QKI-5的表达差异,并选取QKI-5相对表达水平最低的卵巢癌细胞进行过表达慢病毒感染,构建稳定转染细胞系后通过细胞增殖和毒性分析(CCK8)和平板克隆实验检测细胞增殖和克隆能力的变化,通过流式细胞仪检测过表达QKI-5对卵巢癌细胞凋亡的影响。结果:Western blot实验结果显示,在卵巢癌细胞中QKI-5的表达水平相比正常卵巢上皮细胞显著降低,三株卵巢癌细胞中A2780细胞的QKI-5表达水平相对最低,通过慢病毒感染成功构建了稳定过表达QKI-5的A2780细胞系。CCK8和平板克隆实验结果显示,过表达QKI-5基因后A2780细胞增殖活力和克隆形成能力受到抑制(P<0.05)。流式细胞仪检测细胞凋亡率结果显示,QKI-5表达水平的增加能够显著促进A2780细胞的凋亡(P<0.05)。结论:RNA结合蛋白QKI-5在卵巢细胞中表达水平异常降低,QKI-5表达特异性扩增后能够抑制卵巢癌细胞A2780增殖和克隆形成能力并促进癌细胞发生凋亡。

MLH1、PRMT5在卵巢癌组织中的表达及意义

目的探讨错配修复蛋白MutL同系物1(MLH1)、精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)在卵巢癌组织中的表达及意义。方法选取2017年1月至2019年8月中国人民解放军空军军医大学第一附属医院保存的卵巢癌组织标本为卵巢癌组(n=132),同期因全子宫双侧附件切除术获得的正常卵巢组织为对照组(n=80),常规石蜡包埋后,采用免疫组化染色法检测MLH1、PRMT5表达情况。统计分析MLH1、PRMT5之间及两者分别与患者临床病理特征、生存时间的联系。结果卵巢癌组MLH1阳性表达率显著低于对照组(49.24%vs.90.00%,P<0.05),而PRMT5阳性表达率显著高于对照组(62.12%vs.16.25%,P<0.05);国际妇产科协会(FIGO)分期为Ⅲ~Ⅳ期组织MLH1阳性表达率显著低于Ⅰ~Ⅱ期组织(28.00%vs.62.20%,P<0.05);FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、中低分化和有淋巴结转移者组织PRMT5阳性表达率显著高于Ⅰ~Ⅱ期、高分化和无淋巴结转移组织(分别为82.00%vs.50.00%、74.16%vs.37.21%和83.33%vs.36.67%,均P<0.05);卵巢癌组织MLH1与PRMT5表达呈负相关(rs=-0.605,P<0.05);MLH1阳性且PRMT5阴性表达患者中位总体生存时间为19.80(12,25)个月,显著高于MLH1阴性且PRMT5阴性者[12.40(7,14)个月]、MLH1阳性且PRMT5阳性者[10.40(6,14)个月]和MLH1阴性且PRMT5阳性患者[8.40(5,10)个月](P<0.05)。结论卵巢癌组织MLH1表达下调而PRMT5表达上调,与临床病理特征有一定关系,值得进一步研究。

m^(6)A去甲基化酶在急性髓系白血病中的研究进展

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是血液系统中常见的恶性肿瘤。肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)和AlkB同系物5(AlkB homolog 5,ALKBH5)在AML的发生与发展中起着重要的调控作用,两者通过介导N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenine,m^(6)A)去甲基化的方式促进细胞增殖、抑制细胞凋亡和介导化疗药物耐受等。抑制FTO和ALKBH5的去甲基化活性能够延缓AML的发生与发展。因此,FTO和ALKBH5是治疗AML的潜在靶点。本文主要对m6A去甲基化酶在AML中发挥作用的分子机制以及通过小分子抑制剂靶向FTO和ALKBH5治疗AML的研究进展作一综述。

结直肠癌组织RABEX-5、LASS2、HOXB7蛋白的表达及临床意义

目的:探讨结直肠癌组织Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子-5(RABEX-5)、人源长寿保障基因2(LASS2)、同源异型盒基因B7(HOXB7)表达与临床病理特征及预后的关系。方法:选择2013年10月至2015年4月期间在我院接受治疗的105例结直肠癌患者作为研究对象。检测其结直肠癌组织以及癌旁组织中RABEX-5、LASS2、HOXB7表达,分析RABEX-5、LASS2、HOXB7表达与临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同RABEX-5、LASS2、HOXB7表达患者总生存率的差异,Cox比例风险回归分析结直肠癌患者预后的影响因素。结果:与癌旁组织相比,结直肠癌组织中RABEX-5、HOXB7表达阳性率上调,而LASS2阳性率下降(P<0.05)。LASS2表达与TNM分期、浸润深度和淋巴结转移有关(P<0.05),而RABEX-5、HOXB7表达与TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。RABEX-5、HOXB7表达阳性患者的生存率分别低于RABEX-5、HOXB7表达阴性患者,而LASS2表达阳性患者的生存率高于LASS2表达阴性患者(P<0.05)。结直肠癌患者预后的影响因素包括TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移、RABEX-5阳性表达、LASS2阴性表达和HOXB7阳性表达(P<0.05)。结论:在结直肠癌组织中RABEX-5、HOXB7阳性率升高,而LASS2阳性率下降,且与TNM分期以及淋巴结转移密切相关。RABEX-5、LASS2、HOXB7表达与结直肠癌患者的生存和预后联系密切。