PKC对豚鼠近视眼视网膜Mller细胞近视因子基因的调控作用

目的研究蛋白激酶C(PKC)对豚鼠近视眼视网膜Mller细胞中酪氨酸羟化酶(TH)、诱导型NO合成酶(iNOS)、神经型NO合成酶(nNOS)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子β(TGFβ)基因表达的调控作用。方法眼罩遮盖法建立豚鼠近视眼模型,酶消化法原代培养其视网膜Mller细胞,GFAP免疫组织化学染色进行细胞鉴定。根据干预因素不同,把Mller细胞分为正常对照组、近视组、近视+GF109203X组、近视+PMA组和近视+DMSO组。RT-PCR检测TH、iNOS、nNOS、bFGF和TGFβmRNA的表达情况。结果与正常对照组比较,近视眼视网膜Mller细胞iNOS、nNOS、bFGF和TGFβ mRNA表达上调,TH mRNA表达下调(P<0.05)。PKC激活剂(PMA)激活PKC后,近视眼视网膜Mller细胞表达nNOS、iNOS、TH和bFGF mRNA上调(P<0.05);GF109203X抑制PKC活性后,这些因子的mRNA表达下调(P<0.05)。结论豚鼠近视眼视网膜Mller细胞nNOS、iNOS、bFGF和TH基因的表达受PKC调控,Mller细胞可能为近视信号因子的一个重要来源。

密蒙花方对高糖状态下视网膜Müller细胞增殖的影响

目的从离体细胞研究层面,研究中药密蒙花方对高糖状态下视网膜Müller细胞损伤的保护作用。方法 (1)采用大鼠视网膜Müller细胞在30 mmol/L高糖下进行体外培养,模拟高糖环境,再分别给予20%含密蒙花方血清(以下均称含药血清)干预12 h,24 h、36 h,观察密蒙花方含药血清对大鼠视网膜Müller细胞增殖的影响。(2)采用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双色染色法观察密蒙花方对高糖状态下视网膜Müller细胞凋亡的影响。结果 (1)高糖组较正常组吸光度(OD)值增高;含药血清组与高糖组相比,OD值明显降低,各含药血清组间比较,随着时间的延长,OD值逐渐降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)高糖组较正常组细胞早期凋亡比例减少,活细胞比例增高,各含药血清组与高糖组相比,细胞早期凋亡比例增高,活细胞比例减少(P<0.05)。密蒙花方通过诱导早期高糖状态下视网膜Müller细胞的早期凋亡,抑制细胞反应性增生,从而起到防护高糖状态下视网膜神经细胞损伤的作用。结论密蒙花方可以抑制早期高糖状态下视网膜Müller细胞的增殖。

改良的人视网膜Muller细胞的原代培养方法与鉴定

背景视网膜Muller细胞是视网膜重要的胶质细胞，也是视网膜干细胞的来源之一，研究Muller细胞的生物学行为对研究视网膜的各种生理病理过程和视网膜干细胞治疗研究具有重要意义，而建立稳定的视网膜Muller细胞培养体系是相关研究的基础。目的优化分离培养和纯化人视网膜Muller细胞的方法，为相关的实验研究提供良好优质的Muller细胞来源。方法分离人供体眼视网膜组织，然后将剪碎的视网膜组织置入质量分数0．25％胰蛋白酶＋100U透明质酸酶混合溶液中进行消化，添加含体积分数10％胎牛血清的DMEM／F12培养液1～2ml终止消化，然后加入含体积分数20％胎牛血清的RPMI1640培养液培养72h，行半量换液，再以含10％胎牛血清的培养液进行传代。光学显微镜下根据细胞的形态特征进行细胞鉴定，并分别采用免疫荧光技术和免疫组织化学法检测胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和Muller细胞特异性标志物谷氨酰胺合成酶（GS）的表达，对培养的细胞进行鉴定。结果应用0．25％胰蛋白酶＋100U（商品单位）透明质酸酶的混合酶消化法可成功获取人视网膜Muller细胞，原代培养后24h细胞贴壁，培养后9—10d细胞融合。培养的细胞胞体呈长圆形，细胞质丰富，部分细胞体两端锥状长突起，末端膨隆，细胞核大。传代后的细胞胞体大，呈扁平多角形，符合Muller细胞的形态。细胞免疫组织化学和免疫荧光技术检测显示95％以上的细胞中GFAP呈阳性表达，90％以上的细胞中GS呈强阳性表达。结论应用透明质酸酶和胰蛋白酶混合液消化法可以成功分离人视网膜Muller细胞，分别用含20％胎牛血清和含10％胎牛血清的RPM11640培养液培养和传代的人视网膜Muller细胞产量高且纯度好。

Mller细胞在糖尿病视网膜病变中的作用

Mller细胞是人视网膜内主要的神经胶质细胞之一,其突起分布于外界膜到内界膜,二级突起与神经元和胶质细胞密切接触,并可发挥重要的生理功能。糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病的主要并发症之一,其发病机制尚未完全清楚。近年来,随着对Mller细胞的深入研究,发现其在DR的发病和进展中起着重要的作用,本文就目前对Mller细胞的研究现状以及其在DR中的作用机制作一综述。

缺氧对视网膜Müller细胞促红细胞生成素mRNA和蛋白表达的影响

目的探讨缺氧条件下促红细胞生成素(EPO)mRNA及蛋白在体外培养的Müller细胞的表达情况。方法胰酶消化新生大鼠视网膜组织制成单细胞悬液,机械震荡、吹打法分离纯化视网膜Müller细胞,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学方法对缺氧条件下视网膜Müller细胞EPO基因和蛋白的表达进行测定。结果成功获得视网膜Müller细胞,传代后95%以上的细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色阳性。EPO蛋白的阳性染色位于视网膜Müller细胞的细胞浆及突起上。在正常的视网膜Müller细胞中仅见微弱的EPO mRNA和蛋白表达,而缺氧后表达明显上调,且呈时间依赖性。结论Müller细胞在缺氧条件下EPO mRNA和蛋白表达增强,EPO表达水平的升高可能是缺氧性视网膜病变的神经保护因素之一。