期刊文献+
共找到1,697篇文章
< 1 2 85 >
每页显示 20 50 100
Detection of circulating hepatocellular carcinoma cells in peripheral venous blood by reverse transcription-polymerase chain reaction 被引量:5
1
作者 Yang Liu Meng-Chao Wu +1 位作者 Guang-Xiang Qian Bai-He Zhang From the Institute of East Hepatobiliary Surgery, Second Military Medical University, Shanghai 200438, China 《Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International》 SCIE CAS 2002年第1期72-76,共5页
Objective: To detect circulating hepatocellular carcino-ma by demonstrating hepatocellular carcinoma cells orhepatocyte-associated mRNA in the nuclear cell com-ponent of peripheral blood (PBL).Methods: Peripheral bloo... Objective: To detect circulating hepatocellular carcino-ma by demonstrating hepatocellular carcinoma cells orhepatocyte-associated mRNA in the nuclear cell com-ponent of peripheral blood (PBL).Methods: Peripheral blood (5 ml) samples were ob-tained from 93 patients with hepatocellular carcinoma(HCC) and from 33 control subjects (9 with liver cir-rhosis after hepatitis B,14 with chronic hepatitis B,10with normal liver function). To identify HCC cells inperipheral blood, liver-specific human alpha-fetopro-tein (AFP) mRNA was amplified from total RNA ex-tracted from whole blood by reverse transcription-polymerase chain reaction.Results: AFPmRNA was detected in 50 blood samplesfrom the HCC patients (50/93, 53.8%). In contrast,there were no clinical control patients whose samplesshowed detectable AFPmRNA in PBL. The presence ofAFPmRNA in blood seemed to be correlated with thestage (by TNM classification) of HCC, the serum AFPvalue, and the presence of intrahepatic metastasis,portal vein thrombosis, tumor diameter and/or distantmetastasis. In addition, AFPmRNA was detected in theblood of 21 patients with metastasis at extrahepaticorgans (100%) in contrast to 29 (40.3%)of 72 pa-tients without metastasis.Conclusion: The presence of AFPmRNA in peripheralblood may be an indicator of malignant hepatocytes,which might predict hematogenous spreading metasta-sis of tumor cells in patients with HCC. 展开更多
关键词 liver neoplasms ALPHA-FETOPROTEIN MRNA reverse transcription-polymerase chain reaction
下载PDF
Exogenous reference gene normalization for real-time reverse transcription-polymerase chain reaction analysis under dynamic endogenous transcription
2
作者 Stephen Johnston Zachary Gallaher Krzysztof Czaja 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2012年第14期1064-1072,共9页
Quantitative real-time reverse transcription-polymerase chain reaction (qPCR) is widely used to investigate transcriptional changes following experimental manipulations to the nervous system. Despite the widespread ... Quantitative real-time reverse transcription-polymerase chain reaction (qPCR) is widely used to investigate transcriptional changes following experimental manipulations to the nervous system. Despite the widespread utilization of qPCR, the interpretation of results is marred by the lack of a suitable reference gene due to the dynamic nature of endogenous transcription. To address this inherent deficiency, we investigated the use of an exogenous spike-in mRNA, luciferase, as an internal reference gene for the 2ct normalization method. To induce dynamic transcription, we systemically administered capsaicin, a neurotoxJn selective for C-type sensory neurons expressing the TRPV-1 receptor, to adult male Sprague-Dawley rats. We later isolated nodose ganglia for qPCR analysis with the reference being either exogenous luciferase mRNA or the commonly used endogenous reference 13-111 tubulin. The exogenous luciferase mRNA reference clearly demonstrated the dynamic expression of the endogenous reference. Furthermore, variability of the endogenous reference would lead to misinterpretation of other genes of interest. In conclusion, traditional reference genes are often unstable under physiologically normal situations, and certainly unstable following the damage to the nervous system. The use of exogenous spike-in reference provides a consistent and easily implemented alternative for the analysis of qPCR data. 展开更多
关键词 exogenous reference gene sensory ganglia reverse transcription-polymerase chain reaction normalization INJURY neural regeneration
下载PDF
Quantification of Porcine Follicle-stimulating Hormone Receptor Messenger Ribonucleic Acid by Reverse Transcription competitive Polymerase Chain Reaction
3
作者 朱长虹 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2000年第3期177-182,共6页
An easy and reliable method was developed for construction and quantification of competitive templates, which shared the same sequence as the amplified target DNA except for a 20 bp insertion in the middle by recombi... An easy and reliable method was developed for construction and quantification of competitive templates, which shared the same sequence as the amplified target DNA except for a 20 bp insertion in the middle by recombinant polymerase chain reaction (PCR). Among the advantages of competitive PCR is that any predictable or unpredictable variable that affects amplification has the same effect on both target and competitor species and that the final ratio of amplified products reflects exactly the initial targets. The utilization of a thermostable reverse transcriptase in the RT step was proposed to overcome the problem of the efficiency of target cDNA synthesis. In addition, to obtain reliable measurements, it was recommended to perform four PCR with amounts of competitive template flanking the concentration of the target mRNA. 展开更多
关键词 follicle stimulating hormone receptor MRNA reverse transcription competitive polymerase chain reaction
下载PDF
Detection of hepatocellular carcinoma cells in the peripheral blood with reverse--transcription polymerase chain reaction
4
作者 房殿春 刘为纹 +1 位作者 罗元辉 鲁荣 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1998年第2期93-96,共4页
In order to detect circulating cells of hepatocellular carcinoma(HCC) in the peripheral blood with reverse transcripition polymerase chain reaction (RT-PCR ), alpha-fetoprotein (AFP ) mRNA was tested in the blood samp... In order to detect circulating cells of hepatocellular carcinoma(HCC) in the peripheral blood with reverse transcripition polymerase chain reaction (RT-PCR ), alpha-fetoprotein (AFP ) mRNA was tested in the blood samples of 113 cases of HCC and 69 controls (including 30 cases of liver cirrhosis, 9 cases of metastatic liver cancer and 30 normal subjects). 20/43 (46. 5% ) cases of HCC and 2/30 (6. 7% ) cases of liver cirrhosis are positive and the cases of nletastatic liver cancer and normal controls were negative for human AFP(hAFP) rnRNA. The presence of hAFP mRNA in the peripheral blood seems to be correlated with intrahepatic and distant nletastasls of HCC and portal vein thrombosis. It is concluded that the presence of hAFP mRNA in the peripheral hloocl is an indicator of circulating HCC cells and can be used to diagnose the rnetastasisof HCC through henlatogenous route and RT-PCR amplification of hAFP mRNA is a sensitive and specificprocedure for detecting circulating cells of HCC. 展开更多
关键词 hepatocellular carcinoma circulating cells ALPHA-FETOPROTEIN reverse transcription-polymerase chain reaction mRNA
全文增补中
Quantification of mRNA Levels by Fluorescently Labelled Reverse Transcription Competitive PCR
5
作者 Wen-ximHuang PingHuang 等 《激光生物学报》 CAS CSCD 2001年第2期140-146,共7页
A reproducible,quantitative,non-radioactive method for the analysis of mRNA expression is described.After RNA preparation and cDNA synthesis,the cDNA was co-amplified with an internal standard in the same PCR system.T... A reproducible,quantitative,non-radioactive method for the analysis of mRNA expression is described.After RNA preparation and cDNA synthesis,the cDNA was co-amplified with an internal standard in the same PCR system.The PCR products containing both targen and internal standard amplificates were electrophoresed and detected on an ABI 377 DNA Sequencer.For each sample,β-actin was also quantified by an identical procedure to compensate for relative differences between samples in the integrity of the individual RNA samples and for variations in reverse transcription.Due to the linear relationship between cDNA content and PCR product ratio of target cDNA template and competitive standard,a single PCR reaction was sufficient for quantification of a sample.The experimental results showed that the method is a mRNA quantitative RT-PCR method with high sensitivity and good reproducibility.It can be used in large-scale accurate quantitative analyses of mRNA expression of any gene. 展开更多
关键词 MRNA 定量测定 荧光标记 rt-pcr
下载PDF
复合探针实时荧光RT-PCR法检测小儿上呼吸道感染甲型流感病毒的价值 被引量:1
6
作者 杨彬彬 陈秋虾 郭丽清 《中国医药指南》 2024年第15期103-105,共3页
目的 分析小儿上呼吸道感染甲型流感病毒应用复合探针实时荧光反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测的临床价值。方法选择2023年1月至2023年12月流感监测信息系统两家监测点上呼吸道感染甲型流感病毒感染的患儿80例监测标本进行回顾性分析... 目的 分析小儿上呼吸道感染甲型流感病毒应用复合探针实时荧光反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测的临床价值。方法选择2023年1月至2023年12月流感监测信息系统两家监测点上呼吸道感染甲型流感病毒感染的患儿80例监测标本进行回顾性分析,均开展复合探针实时荧光RT-PCR法检测,分析其诊断价值。结果 根据监测标本最终诊断结果显示,阳性标本68例、阴性标本12例。经复合探针实时荧光RT-PCR法检出67例,检出率为83.75%,敏感度为95.59%、特异度为83.33%、准确度为93.75%、阳性结果预测值为97.01%、阴性结果预测值为76.92%;批间批内变异系数均小于5%。结论 小儿上呼吸道感染甲型流感病毒应用复合探针实时荧光RT-PCR技术具有较高的敏感度、特异度及准确度,且检查结果快速,可为小儿上呼吸道感染甲型流感病变提供可靠的诊断,有利于制订合理的治疗方案。 展开更多
关键词 复合探针 上呼吸道感染 实时荧光反转录聚合酶链反应 甲型流感病毒
下载PDF
Abnormal expression of VEGF and its gene transcription status as diagnostic indicators in patients with non-small cell lung cancer 被引量:1
7
作者 Yun Shi Yang Shi +4 位作者 Xuli Yang Jianrong Chen Qi Qian Dengfu Yao Guangzhou Wu 《Oncology and Translational Medicine》 CAS 2015年第5期201-207,共7页
Objective Angiogenesis is known to be essential for the survival,growth,invasion,and metastasis of lung cancer cells. Vascular endothelial growth factor(VEGF) is an important factor regulating angiogenesis of non-smal... Objective Angiogenesis is known to be essential for the survival,growth,invasion,and metastasis of lung cancer cells. Vascular endothelial growth factor(VEGF) is an important factor regulating angiogenesis of non-small cell lung cancer(NSCLC); however,its pathologic features and significance are unclear. In this study,the tissue VEGF expression levels and its gene transcriptional status,as well as circulating VEGF levels,were investigated in patients with lung disease. Methods VEGF protein and m RNA expression levels in 38 lung tissue samples were analyzed by immunohistochemistry and reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR),respectively. Circulating VEGF levels were detected quantitatively by an enzyme linked immuno-sorbent assay. Results The level of VEGF expression was significantly higher in lung cancer tissue than in the corresponding paracancerous or non-cancerous tissues. The average level of VEGF-positive staining was 76% in tissue samples from NSCLC patients; the levels were 89% in tissue samples from stage III patients and 92% in stage IV patients. High VEGF expression was also evident in cases with lymph node metastasis(84%),distant metastasis(90%),and lower differentiation degree(89%). VEGF m RNA in cancerous tissues was represented predominantly by the VEGF121 and VEGF165 isoforms. Circulating VEGF levels were significantly higher in NSCLC patients [(840 ± 324) pg/m L] than in patients with benign lung diseases [(308 ± 96) pg/m L] or in healthy individuals serving as controls [(252 ± 108) pg/m L]. Conclusion The over-expression of lung VEGF and its gene transcription status should be useful molecular indicators for NSCLC diagnosis. 展开更多
关键词 lung cancer vascular endothelial growth factor (VEGF) VEGF mRNA reverse transcription-polymerase chain reaction (rt-pcr IMMUNOHISTOCHEMISTRY
下载PDF
帕利亚姆病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
8
作者 杨恒 李占鸿 +5 位作者 宋子昂 高林 李卓然 廖德芳 肖雷 李华春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期395-400,共6页
本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,... 本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,对方法的特异性、灵敏性与重复性进行评估;以我国分离的28株PALV和90份核酸阳性血液样本评估检测方法的可靠性;利用建立的方法对采集库蠓样本中携带的PALV进行血清型鉴定。结果显示,建立的PALV血清型qRT-PCR检测方法具有良好的特异性与灵敏性,可检出核酸拷贝数下限在22至28 copies·μL^(-1)。对28株PALV的qRT-PCR检测结果与病毒测序鉴定结果一致;对PALV不同感染阶段哨兵动物血液(90份)中的qRT-PCR鉴定结果与分离病毒的血清型鉴定结果一致;建立的方法可准确鉴定库蠓中携带PALV的血清型。本研究建立的PALV血清型qRT-PCR定型方法具有良好的特异强、敏感性与重复性,可用于PALV感染动物与媒介中PALV血清型的鉴定,具有良好的应用价值。 展开更多
关键词 帕利亚姆病毒 血清型鉴定 实时荧光定量rt-pcr 检测方法
下载PDF
基于直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测方法的建立 被引量:1
9
作者 李浪 古莉冰 +6 位作者 朱丽 何建安 叶颖 张然 李华文 李福缘 顾大勇 《国际检验医学杂志》 CAS 2024年第3期358-364,共7页
目的建立基于直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术的寨卡病毒快速检测方法。方法采用特殊功能的DNA聚合酶,以及优选PCR增强剂,以此建立直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测5种样本(全血、血清、唾液、咽拭子和尿)的方法。结果... 目的建立基于直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术的寨卡病毒快速检测方法。方法采用特殊功能的DNA聚合酶,以及优选PCR增强剂,以此建立直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测5种样本(全血、血清、唾液、咽拭子和尿)的方法。结果5种样本检测限分别为血清103 PFU/mL,尿、咽拭子和唾液102 PFU/mL,全血104 PFU/mL,标准曲线的拟合优度的可决系数均在0.98以上,扩增效率均在90%~110%;寨卡病毒核酸成功扩增,非寨卡病毒核酸均未能扩增;尿、全血和唾液样本的重复性实验中106 PFU/mL和102 PFU/mL两个浓度的6个重复Ct值的变异系数均<5%。该研究建立的直扩RT-PCR技术的寨卡病毒检测方法与常规RT-PCR技术的检测结果一致,8个寨卡病毒样本,均只检测出2个血清样本,其余62个非寨卡病毒样本及12个阴性样本均未得到扩增。结论成功建立基于直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测方法,该方法简便快捷且灵敏度高、特异度强。 展开更多
关键词 寨卡病毒 直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术 DNA聚合酶
下载PDF
RT-PCR法在沙门菌检测及血清分型鉴定中的应用价值研究
10
作者 肖芳 周志强 刘冬梅 《黑龙江医药》 CAS 2024年第3期692-696,共5页
目的:探讨反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法在沙门菌检测及血清分型鉴定中的应用价值。方法:选择2022年8月至2024年1月本疾控中心收治的456例腹泻患者的粪便标本,均行细菌培养和RT-PCR检测,记录RT-PCR鉴定沙门菌血清分型结果,以细菌培养... 目的:探讨反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法在沙门菌检测及血清分型鉴定中的应用价值。方法:选择2022年8月至2024年1月本疾控中心收治的456例腹泻患者的粪便标本,均行细菌培养和RT-PCR检测,记录RT-PCR鉴定沙门菌血清分型结果,以细菌培养结果作为金标准,分析RT-PCR鉴定沙门菌的价值及其与细菌培养的一致性,对比细菌培养、RT-PCR鉴定沙门菌的费用及操作时间。结果:456例腹泻中经细菌培养共检出沙门菌78株,RT-PCR检出85株,RT-PCR检测敏感度为97.44%(76/78),特异度为96.83%(366/378),准确度为96.93%(442/456),阳性预测值为89.41%(76/85),阴性预测值为99.46%(366/368);RT-PCR鉴定沙门菌结果与细菌培养一致性较高(kappa值=0.897,P<0.001);RT-PCR鉴定结果与细菌培养完全一致有73株,符合率为93.59%,其中里森沙门菌、鼠伤寒沙门菌、德尔卑沙门菌、姆班达卡沙门菌4种优势血清型结果完全一致,而与细菌培养鉴定不一致菌株5株;RT-PCR鉴定沙门菌操作时间为(0.30±0.07)天,费用(100.22±6.52)元,细菌培养鉴定沙门菌的操作时间为(2.82±0.25)天,费用为(300.52±12.16)元,RT-PCR鉴定沙门菌的费用及操作时间均低于细菌培养,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:RT-PCR法可准确检出沙门菌,判断沙门菌血清分型,与细菌培养结果具有较高的一致性,且操作用时短、所需费用低,可应用于沙门菌检测。 展开更多
关键词 沙门菌 反转录-聚合酶链反应 血清分型 细菌培养
下载PDF
实时定量RT-PCR的原理及方法 被引量:34
11
作者 阳成波 印遇龙 +3 位作者 黄瑞林 李铁军 单计光 唐志如 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第S1期145-150,共6页
实时定量RT-PCR广泛应用于定量检测mRAN表达水平,为基础研究、分子药物学和生物技术研究提供了一种有力的方法。该法具有易操作、高通量、敏感性高和特异性强的特点,随着新酶、新探针和新仪器的发展而得到快速的发展。本文将对实时定量R... 实时定量RT-PCR广泛应用于定量检测mRAN表达水平,为基础研究、分子药物学和生物技术研究提供了一种有力的方法。该法具有易操作、高通量、敏感性高和特异性强的特点,随着新酶、新探针和新仪器的发展而得到快速的发展。本文将对实时定量RT-PCR的定量原理、仪器应用、探针种类的研究进展以及细胞因子mRNA表达水平检测上的应用作一综述。 展开更多
关键词 细胞因子 定量 实时定量rt-pcr
下载PDF
逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测轮状病毒 被引量:14
12
作者 倪艳秀 林继煌 +2 位作者 陆承平 江杰元 何孔旺 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期437-440,共4页
为了给轮状病毒感染的诊断和流行病学研究提供更为敏感和可靠的手段,选取A组轮状病毒VP7基因上的2段高度保守序列作为引物,在优化逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)条件的基础上,建立了检测轮状病毒的RT-PCR方法。通... 为了给轮状病毒感染的诊断和流行病学研究提供更为敏感和可靠的手段,选取A组轮状病毒VP7基因上的2段高度保守序列作为引物,在优化逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)条件的基础上,建立了检测轮状病毒的RT-PCR方法。通过对比试验,确定了PCR的最优模式:94℃变性1min→55℃退火1min→72℃延伸2min,30个循环后再在72℃下延伸10min。用此模式进行了RT-PCR的特异性和敏感性试验。检测的6株轮状病毒分离株(牛HN-7、BRV007、BRV014、BRV6555、猪Li99、Nan86)及2株参考株(牛NCDV、猴SA11),都能扩增出唯一的342bp的目的条带;对猪流行性腹泻病毒(PEDV)及传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染猪的粪样、正常MA104细胞检测结果均呈阴性;检测的敏感度可达1pg水平。对40份猪、牛、兔的腹泻粪样检测,30份呈阳性,而用作平行对照的夹心ELISA法检测,有25份呈阳性,两者符合率为87.5%。两法检测不符的5份粪样的PCR扩增产物,用地高辛标记探针进行了斑点杂交,结果均呈阳性,表明RT-PCR法比ELISA法敏感性高。 展开更多
关键词 轮状病毒 夹心ELISA PT-PCR 检测
下载PDF
RT-PCR检测猪瘟病毒初探 被引量:24
13
作者 罗廷荣 波丹 +7 位作者 黄宪高 梁家权 刘芳 黄伟坚 秦爱珍 温荣辉 陆芹章 余克伦 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2001年第1期17-20,共4页
本研究建立了反转录聚合酶链反应 ( RT PCR)技术检测猪瘟病毒 ( Hog Cholera Virus,HCV)方法。合成的二对引物 HCV 1 / HCV 2和 HCV A1 / HCV A2成功地扩增兔化弱毒株、法国株和石门株的核酸 ,并对采自博白县 3个、贵港市 1个和武宣县 ... 本研究建立了反转录聚合酶链反应 ( RT PCR)技术检测猪瘟病毒 ( Hog Cholera Virus,HCV)方法。合成的二对引物 HCV 1 / HCV 2和 HCV A1 / HCV A2成功地扩增兔化弱毒株、法国株和石门株的核酸 ,并对采自博白县 3个、贵港市 1个和武宣县 1个猪场共 1 3份病料进行检测。结果从博白县和贵港市的 1 1份材料中检测到 HCV的核酸。 展开更多
关键词 反转录-聚合酶链反应 猪瘟病毒 检测
下载PDF
半定量RT-PCR检测细胞因子表达的研究 被引量:11
14
作者 林仁勇 丁剑冰 +5 位作者 温浩 熊海波 王笑峰 陈新华 张琰 陈志芳 《新疆医科大学学报》 CAS 2003年第5期427-429,共3页
目的 :建立一种客观、敏感的检测IL 2 /IL 4细胞因子基因表达变化的方法。 方法 :采用TRIzol试剂提取免疫排斥 /免疫耐受大鼠脾脏组织总RNA ,分光光度计法定量。取 2 μg总RNA ,采用RT PCR法逆转录 扩增IL 2、IL 4和内参照 β actincDN... 目的 :建立一种客观、敏感的检测IL 2 /IL 4细胞因子基因表达变化的方法。 方法 :采用TRIzol试剂提取免疫排斥 /免疫耐受大鼠脾脏组织总RNA ,分光光度计法定量。取 2 μg总RNA ,采用RT PCR法逆转录 扩增IL 2、IL 4和内参照 β actincDNA ,扩增产物经电泳分离后 ,用凝胶图像分析仪照相和扫描分析 ,检测其相对表达量。 结果 :RT PCR产物经电泳后 ,β actin、IL 2和IL 4分别在 2 2 6bp、342bp和 332bp处出现明显条带 ,与预定条带大小相一致 ;免疫耐受组IL 4与免疫排斥组IL 2的表达有明显差异 ,在免疫耐受组中IL 4表达增高 ,而在免疫排斥组中IL 2表达增高 ,内参照 β actin扩增条带亮度在两组中相同 ,PCR产物量与扩增初始模板量之间存在良好的对应关系。 结论 :半定量RT PCR检测是一种从少量细胞中快速、简便。 展开更多
关键词 半定量rt-pcr 检测 细胞因子 基因表达 IL-2 IL-4
下载PDF
逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术同时检测水中多种肠道病毒 被引量:17
15
作者 张崇淼 刘永军 +1 位作者 王晓昌 薛小平 《环境科学研究》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第3期137-141,共5页
建立了一种利用通用引物RT-PCR技术检测水中肠道病毒的方法.利用脊髓灰质炎病毒1~3型,柯萨奇病毒B3型作为参考病毒株,根据肠道病毒RNA5′非编码区中具有高度同源性的序列来设计通用引物.比较了M-MLV酶和AMV酶的逆转录效果,AMV酶能够成... 建立了一种利用通用引物RT-PCR技术检测水中肠道病毒的方法.利用脊髓灰质炎病毒1~3型,柯萨奇病毒B3型作为参考病毒株,根据肠道病毒RNA5′非编码区中具有高度同源性的序列来设计通用引物.比较了M-MLV酶和AMV酶的逆转录效果,AMV酶能够成功地从地表水和生活污水中逆转录病毒RNA,更适于实际应用.对比研究了PCR过程中的退火温度,c(Mg2+)等因素对RT-PCR检测结果的影响,选择退火温度55℃,c(Mg2+)为2 mmol/L的反应条件,优化了RT-PCR检测方法.通过检测水样中接种的连续稀释的病毒,确定了该检测方法的灵敏度为38 CCID50.考察人工污染的地表水、污水、二级处理出水样品发现,检测灵敏度基本一致.该方法可应用在实际环境的肠道病毒检测中. 展开更多
关键词 肠道病毒 逆转录-聚合酶链反应(rt-pcr) 通用引物 同时检测
下载PDF
RT-PCR快速诊断禽流感 被引量:21
16
作者 刘明 于康震 +3 位作者 崔尚金 孔宪刚 唐秀英 徐宜为 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期176-177,共2页
根据禽流感病毒NP基因的序列分析结果,设计了一对NP基因特异的引物。采用该对引物,不经病毒分离,直接从禽流感病毒感染鸡的气管、泄殖腔棉拭子和组织样品中提取核酸, RT~PCR可以扩增出 326bp的 NP基因片段。采用... 根据禽流感病毒NP基因的序列分析结果,设计了一对NP基因特异的引物。采用该对引物,不经病毒分离,直接从禽流感病毒感染鸡的气管、泄殖腔棉拭子和组织样品中提取核酸, RT~PCR可以扩增出 326bp的 NP基因片段。采用该技术对14个亚型禽流感病毒标准参考株,4个亚型12株国内分离野毒株,RT-PCR检测的结果都呈阳性;对新城疫病毒、传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒以及减蛋综合症病毒,RT-PCR扩增结果都呈阴性。禽流感病毒 A/Goose/Guangdong(H5N1)和 A/African Starling/England(H7N1)实验感染鸡样品 RT-PCR检测与鸡胚病毒分离阳性率分别为34/42、32/42; 24/55、24/55, 二者符合率大于95%。 RT-PCR最少可检测到10pg的病毒核酸。对山东某地发病鸡场样品进行RT-PCR检测,只用6个小时就可得出准确的诊断结果,证明RT-PCR检测方法敏感特异,可用于禽流感的快速诊断。 展开更多
关键词 禽流感病毒 诊断 反转录-聚合酶链式反应
下载PDF
多重巢式RT-PCR和染色体核型分析技术在急性髓系白血病中的联合应用 被引量:10
17
作者 黄亮 李春蕊 +3 位作者 张恒 孙立石 刘文励 周剑峰 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1029-1033,共5页
背景与目的:细胞遗传学分析在白血病的诊断和预后判断中有重要价值,但常规显带不仅耗时,且难以获得良好的分裂相;而聚合酶链反应具有灵敏、快速的特点。本研究探讨联合应用多重巢式RT-PCR和染色体核型分析,对急性髓系白血病(acute myelo... 背景与目的:细胞遗传学分析在白血病的诊断和预后判断中有重要价值,但常规显带不仅耗时,且难以获得良好的分裂相;而聚合酶链反应具有灵敏、快速的特点。本研究探讨联合应用多重巢式RT-PCR和染色体核型分析,对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中融合基因的表达及其在各亚型的分布和克隆性染色体异常的检出情况。方法:采用多重巢式RT-PCR技术对60例AML病例进行检测,其中37例同时进行染色体R或G显带。结果:60例AML患者中检出融合基因28例(46.7%),包括AML1/ETO、PML/RARα、CBFβ/MYH11、MLL基因异常(包括MLL/AF6、MLL/AF9、MLL/AF10、MLL/MLL)、DEK/CAN、TEL/PDGFR、AML1/MDS1(EVI-1)。同时进行染色体R或G显带的37例病例中有30例可供分析,其中14例(46.7%)检出染色体结构和数目异常;联合多重RT-PCR可使AML克隆性染色体异常检出率增至59.5%(22/37)。结论:联合多重巢式RT-PCR和染色体核型分析技术可以提高克隆性染色体异常的检出率。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 染色体异常 逆转录-聚合酶链反应 核型分析
下载PDF
马铃薯Y病毒的RT-PCR检测 被引量:30
18
作者 李浩戈 吴元华 赵秀香 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 1999年第3期244-246,共3页
通过两种方法提取了烟草病叶中PVY病毒的RNA,然后针对PVY^N的CP基因序列,设计合成了一对特异性引物,运用反转录PCR技术对提取的PVY-RNA进行了体外扩增,结果得到与预期大小相一致的780bp片段,而对照未得到任何产物,从而建立了运... 通过两种方法提取了烟草病叶中PVY病毒的RNA,然后针对PVY^N的CP基因序列,设计合成了一对特异性引物,运用反转录PCR技术对提取的PVY-RNA进行了体外扩增,结果得到与预期大小相一致的780bp片段,而对照未得到任何产物,从而建立了运用RT-PCR手段检测植物中PVY的又一有效途径,并运用此方法对东北三省部分地区马铃薯种薯中PVY的带毒情况进行了检测。 展开更多
关键词 反转录PCR 马铃薯 Y病毒 检测
下载PDF
应用RT-PCR分子检测技术快速检测大蒜普通潜隐病毒 被引量:16
19
作者 张威 张匀华 +2 位作者 李学湛 高艳玲 白艳菊 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期133-137,共5页
根据大蒜普通潜隐病毒(Garlic common latent virus,GCLV)的外壳蛋白区域的保守序列设计合成一对寡核苷酸引物,以带毒植物的总RNA为模板,进行反转录和PCR扩增,通过反应体系和反应程序的建立与优化,扩增得到长300 bp的目的片段,并将目的... 根据大蒜普通潜隐病毒(Garlic common latent virus,GCLV)的外壳蛋白区域的保守序列设计合成一对寡核苷酸引物,以带毒植物的总RNA为模板,进行反转录和PCR扩增,通过反应体系和反应程序的建立与优化,扩增得到长300 bp的目的片段,并将目的片段转入大肠杆菌进行了克隆和序列测定。测序结果与GenBank中其他GCLV相应区域的序列同源性最高达98%。并对其检测的特异性和灵敏度进行了验证,从而建立了快速、灵敏、特异性强的GCLV分子生物学检测方法。 展开更多
关键词 大蒜普通潜隐病毒 反转录-聚合酶链式反应 病毒检测
下载PDF
脑脊液肠道病毒RT-PCR检测对病毒性脑炎患者的临床意义 被引量:7
20
作者 魏桂荣 张敏 +3 位作者 梅元武 董继华 陈运平 袁光雷 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期821-823,826,共4页
的了解脑脊液肠道病毒(EV)逆转录-聚合酶链式反应(RT—PCR)检测对病毒性脑炎患者的临床诊断和治疗意义。方法回顾分析2000~2003年进行了脑脊液EVRT—PCR检测的43例患者的临床特征,包括临床症状、体征、脑脊液生化常规及其他病毒... 的了解脑脊液肠道病毒(EV)逆转录-聚合酶链式反应(RT—PCR)检测对病毒性脑炎患者的临床诊断和治疗意义。方法回顾分析2000~2003年进行了脑脊液EVRT—PCR检测的43例患者的临床特征,包括临床症状、体征、脑脊液生化常规及其他病毒病原体检查、头颅影像学和脑电图检查,并进行统计学分析。结果脑脊液EVRT—PCR阳性者18例,占41.9%,男性较多,多发病于7~9月。脑脊液EVRT-PCR阳性者的临床症状与阴性者无明显差异,但脑脊液蛋白和细胞数较高,可同时合并血中其他病毒(单纯疱疹病毒、巨细胞病毒)抗体阳性。结论肠道病毒引起的病毒性脑炎发病率高,并可合并其他病毒感染,EVRT-PCR检查结果可指导临床诊断和针对性用药。 展开更多
关键词 病毒性脑炎 肠道病毒 逆转录一聚合酶链式反应
下载PDF
上一页 1 2 85 下一页 到第
使用帮助 返回顶部