重组嗜肺军团菌鞭毛蛋白A(rflaA)体外诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞分泌IL-6和IL-1β

目的探讨重组嗜肺军团菌鞭毛蛋白A(rflaA)对RAW264.7巨噬细胞分泌白细胞介素6(IL-6)、IL-1β的影响及其机制。方法采用(0.000、0.125、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000、8.000)μg/mL rflaA处理RAW264.7细胞,并设细胞对照组,用CCK-8法确定rflaA的半数效应剂量(EC_(50))。采用(0.04、0.08、0.16)μg/mL rflaA处理RAW264.7细胞24、36、48 h,采用ELISA检测IL-6、IL-1β分泌水平;(0.04、0.08、0.16)μg/mL rflaA处理RAW264.7细胞6、12、24、36、48 h,收集细胞,实时定量PCR检测IL-6、IL-1β、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)mRNA的含量;Western blot法检测NLRP3、caspase-1蛋白水平。结果 rflaA可促进RAW264.7细胞因子分泌,RAW264.7细胞被不同剂量的rflaA作用24、36、48 h,随rflaA剂量的递增,IL-6、IL-1β水平增加,以0.16μg/mL剂量时作用最显著,36 h达高峰;rflaA可增加RAW264.7细胞的IL-6、IL-1β、NLRP3、caspase-1 RNA水平,0.16μg/mL rflaA作用最显著,12 h达高峰;RAW264.7细胞被不同剂量的rflaA作用6、12、24、36 h,随rflaA剂量增加NLRP3、caspase-1表达水平增加,以0.16μg/mL剂量时作用最显著,24 h达高峰。结论 rflaA通过刺激NLRP3、caspase-1而增加RAW264.7细胞IL-6、IL-1β的分泌。