生物珊瑚、胶原和rhBMP-2合成人工骨修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的：研究生物珊瑚、胶原和ｒｈＢＭＰ－２复合人工骨修复兔下颌骨缺损的效果。方法：选择３６只兔下颌骨缺损模型，分别采用新鲜自体骨，生物珊瑚和生物珊瑚、胶原和ｒｈＢＭＰ－２复合人工骨修复，大体、组织切片、Ｘ线、统计学等方法进行分析。结果：修复兔下颌骨缺损，合成人工骨形成新骨的时间比生物珊瑚早，２个月时修复效果优于生物珊瑚；３个月时，复合骨修复效果与自体骨无明显差别。结论：生物珊瑚、胶原和ｒｈＢＭＰ－２复合人工骨能够引导和诱导新骨形成。

HA复合rhBMP-2转染的BMSCs对羊胫骨延长骨愈合的影响

目的评价HA复合rhBMP-2的腺病毒(adenovirus mediated rhBMP-2,Adv-rhBMP-2)转染的羊BMSCs对骨痂延长骨愈合的影响。方法成年山羊19只,雌雄不限,体重15～20kg。于每只羊髂嵴上穿刺抽取骨髓10mL,常规传代培养BMSCs。取第3代BMSCs,以感染复数200转染腺病毒。取0.25%胰蛋白酶消化转染后3d的细胞1×108个,与HA充分混匀制备Adv-rhBMP-2/BMSCs/HA。建立山羊右侧胫骨延长模型,术后立即于截骨部位注射自体细胞复合物。按术后注入物质不同随机分成4组:A组为Adv-rhBMP-2/BMSCs/HA组(n=6),B组为Adv-rhBMP-2/BMSCs组(n=5),C组为Adv-β-gal/BMSCs/HA组(n=4),D组为空白组(n=4)。术后第7天开始行胫骨延长,速度1mm/d,共延长4周。术后5、8、12周摄X线片观察骨痂生长情况,12周处死动物,取标本分别行骨密度检测、生物力学测定、组织学观察和骨形态计量学分析。结果X线片检查示,术后5、8周A、B组骨痂生成量明显多于C、D组,X线片定量评分A、B组明显高于C、D组,差异均有统计学意义(P<0.05);12周各组均在骨延长部位形成连续骨痂。骨密度测定:术后12周A、B、C、D组延长部位骨矿物质含量分别为(4.175±1.921)、(2.600±0.638)、(2.425±0.826)和(1.175±0.574)?g,骨矿物质密度分别为(0.612±0.196)、(0.630±0.159)、(0.450±0.166)和(0.266±0.113)g/cm2,A、B组显著高于C、D组(P<0.05)。生物力学测定:A、B、C、D组最大载荷分别为(490.20±155.08)、(350.59±80.48)、(221.95±68.79)和(150.65±92.29)N,弹性模量为(178.24±105.80)、(105.88±27.09)、(81.18±48.67)和(50.35±47.64)MPa,各指标A组显著高于C、D组(P<0.05)。组织学观察见A组骨延长处大量新生骨组织,骨小梁多为纵行网状排列。骨形态计量分析示A、B、C、D组新骨体积分别为72.35%±5.68%、67.58%±7.42%、49.63%±4.87%和38.87%±2.35%,A组新生骨生成量明显比D组多(P<0.05)。结论HA复合rhBMP-2修饰的BMSCs制备的组织工程骨可促进羊胫骨延长骨愈合。

中药增骨Ⅰ、Ⅲ号调节rhBMP-2对成纤维细胞的影响

目的 观察中药增骨Ⅰ、Ⅲ号调节体外重组人骨形态发生蛋白 2 (rhBMP 2 )对体外成纤维细胞的影响。方法 体外分离培养人成纤维细胞。然后用中药增骨Ⅰ、Ⅲ号及增骨Ⅰ、Ⅲ号复合rhBMP 2分别作用于成纤维细胞 ,使用倒置相差显微镜观察其形态 ,噻唑蓝 (MTT)比色分析其增殖、放免测定骨钙素 (BGP)含量。结果 增骨Ⅰ、Ⅲ号MTT比色结果与对照组差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,中药复合rhBMP 2组与对照组比色结果差异非常显著 (P <0 0 1)。增骨Ⅰ、Ⅲ号及中药复合rhBMP 2都可促进成纤维细胞BGP的表达 ,与对照组相比结果差异分别为有显著性 (P <0 0 5 )和非常显著性 (P <0 0 1)。结论 增骨Ⅰ、Ⅲ号能激活成纤维细胞向成骨细胞分化 ,能增强rhBMP 2诱导成骨 。

rhBMP-2/卵磷脂复合材料修复犬长骨节段性骨缺损的实验研究

目的 :观察rhBMP -2 /卵磷脂复合材料修复犬长骨节段性骨缺损的能力 ,检验rhBMP -2的诱导成骨活性。方法 :手术造成 2 0mm桡骨中上段骨缺损 ,实验组植入rhBMP -2 /卵磷脂的复合材料片 ,对照组植入单纯卵磷脂片。通过影像学、组织学观察及骨密度测定 ,评价rhBMP -2 /卵磷脂复合材料修复犬长骨节段性骨缺损的效果。结果 :影像学检查示实验组术后 12周骨痂桥接缺损 ,术后 2 4周皮质骨连接 ;对照组无骨痂形成。组织学检查示实验组术后 12周骨痂外层为板层骨 ,中央为编织骨 ,内有骨髓组织 ,术后 2 4周骨痂外层为皮质骨 ,中央为髓腔组织 ;对照组缺损区为纤维组织和肌组织充填。骨密度测定示术后 12周骨痂密度达正常值的 76 % ,2 4周达正常值的 85 %。结论 :rhBMP -2具有良好的诱导成骨活性 ,rhBMP -2 /卵磷脂复合材料能够很好的修复犬桡骨 2 0mm的骨缺损。

rhBMP-2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统对骨髓间充质干细胞的生物学效应

目的 制备rhBMP - 2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统 ,检测其对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的生物学效应。方法 采用改良的乳化溶液聚合法制备rhBMP - 2纳米微球 ;采用MTT法检测微球对BMSCs的增殖状况的影响 ;碱性磷酸酶 (ALP)检测试剂盒检测细胞ALP活性以反映微球对其分化状况的影响 ,并与单纯rhBMP - 2的作用进行比较。结果 该微球缓释系统有生物活性 ,能显著促进BMSCs的增殖及分化 ,并呈剂量依赖性。其效应高于单纯施加rhBMP - 2的效应。

rhBMP-2、胶原、珊瑚复合人工骨植入智齿牙槽窝的临床研究

目的 研究重组人骨形成蛋白 (rhBMP - 2 )、胶原、珊瑚复合人工骨在修复口腔颌面部骨缺损和整复颌面畸形的作用。方法 将rhBMP - 2、胶原、珊瑚复合人工骨植入阻生智齿拔除后的牙槽窝内 ,并设单纯珊瑚和空白对照组 ,术后进行临床和X线检查 ,记录邻近的第二磨牙远中牙槽嵴的高度。结果 术后 12周复合骨组牙槽窝骨缺损和牙槽嵴高度均得到良好的恢复 ,珊瑚骨组得到较好的恢复 ,而空白对照组结果不明显。结论 rhBMP- 2、胶原、珊瑚复合人工骨植入智齿牙槽窝可较好地修复牙槽窝骨缺损及邻近的第二磨牙远中牙槽骨缺损。

携载rhBMP-2微球的新型可注射自凝固复合人工骨的制备及特性研究

[目的]制备一种具有良好降解性和成骨活性、可注射的自凝固新型骨修复材料。[方法]制备携载rh-BMP-2的聚乳酸与聚乙醇酸共聚物(PLGA)微球,并将其与rhBMP-2/磷酸钙骨水泥(CPC)复合,制备出rhBMP-2/PLGA微球/CPC复合人工骨。探讨了材料的特性,包括形貌、固化时间、抗压强度及反映材料体外降解速度的指标—体外降解液Ca、P浓度变化,测定复合材料rhBMP-2的释药速度及体外诱导MSCs细胞成骨分化的能力。[结果]与单纯CPC-rhBMP-2相比,复合材料的固化时间少量增加,抗压强度下降明显。体外降解速度及体外释药明显提高,释放的rhBMP-2具有骨诱导活性。[结论]rhBMP-2/PLGA微球/磷酸钙骨水泥新型复合人工骨是具有良好应用前景的骨修复材料。

TGF-β增强rhBMP-2诱导成骨中Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA及碱性磷酸酶的表达

目的 :对TGF β增强rhBMP 2诱导成骨中CollagenⅠ、ⅡmRNA及碱性磷酸酶 (ALP)的表达进行研究。方法 :BALB/c小鼠 110只随机分 2组 ,每组 5 5只。rhBMP 2 /TGF β为实验组 ,rhBMP 2为对照组 ,于术后 3～2 1d 8个时间点取材 ,用原位杂交方法对新生骨组织中的Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA进行检测 ;对ALP活性进行定量分析 ,观察 2组在诱导成骨中CollageⅠ、ⅡmRNA及ALP的表达情况。结果 :(1)Ⅱ型胶原mRNA的出现是和成软骨、软骨细胞的出现相伴随的 ;(2 )做为成骨细胞成熟标志物的Ⅰ型胶原mRNA、ALP在软骨形成期即有表达 ,随着成骨细胞的出现 ,骨组织的形成Ⅰ型胶原mRNA仍表现为高表达 ,而ALP的表达则呈下降趋势 ;(3 )实验组CollagenⅠ、ⅡmRNA及ALP的表达早于对照组。结论 :TGF β增强了rhBMP 2诱导成骨中CollagenⅠ、ⅡmRNA及ALP的表达。

检测rhBMP-2/明胶复合材料的诱导成骨活性:修复兔长骨缺损的实验研究

目的观察rhBMP-2/明胶复合材料修复兔长骨节段性骨缺损的能力。方法手术造成桡骨中上段15mm骨缺损,实验组植入rhBMP-2/明胶复合材料片,其中rhBMP-2的含量为1.0mg,对照组植入单纯明胶片。通过影像学、组织学观察及骨密度测定。结果影像学检查示实验组术后4周时缺损区有大量新生骨痂形成,术后8周时新生骨痂将缺损区桥接,术后12周时达到皮质骨连接;对照组无骨痂形成。组织学检查示实验组术后4周时的骨痂为编织骨,术后8周时骨痂外层为板层骨,中央为编织骨,内有骨髓组织,术后12周时骨痂外层为皮质骨,中央为髓腔组织;对照组缺损区为结缔组织和肌组织充填。骨密度测定示术后12周时骨痂密度达到正常值的76%。结论rhBMP-2/明胶复合材料具有良好的诱导成骨活性,1.0mg的rhBMP-2能够很好的修复兔桡骨15mm的骨缺损。

TGF-β、rhBMP-2体外诱导下颌突外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化

目的 :探讨TGFβ、rhBMP - 2体外诱导外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化的能力。 方法 :取妊娠 12 .5d胎鼠第三代下颌突外胚间充质细胞 ,分别在含 60、10 0mmol/L的TGF - β和 1.6、3 .2mmol/L的rhBMP- 2的DMEM/F12中培养。相差显微镜下观察细胞的形态变化 ,免疫组化鉴定细胞性质。结果 :培养 2d ,60pmol/L的TGF - β组细胞形态发生明显变化 ,细胞变得大而扁平 ,培养 4d ,免疫组化鉴定约 70 %的细胞分化为平滑肌细胞。rhBMP - 2组细胞形态未见明显改变 ,1.6nmol/L组免疫组化鉴定约 5 %的细胞分化为平滑肌细胞 ,未能诱导分化出神经元细胞。未加LIF的对照组细胞出现向平滑肌细胞的自然分化。结论 :TGFβ、rhBMP

注射复合rhBMP-2骨水泥制作猕猴椎动脉型颈椎病模型

【目的】寻求一种安全、微创、可信的构建椎动脉型颈椎病动物模型的方法。【方法】高频超声监测正常猕猴（6只．雌雄各半，年龄3．5-5．5岁。体质量4～6kg）的椎动脉血流状况，在高频超声的引导下通过骨穿针在猕猴颈C5-6左侧椎动脉旁注射复合重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）的磷酸钙骨水泥1．5mL来制作椎动脉型颈椎病模型，并用高频超声监测造模后椎动脉收缩期峰值血流（vs）、舒张期末峰值血流（VD）、阻力指数（RI）、血管内径（D）并评价猕猴椎动脉血流的改变是否符合临床上椎动脉型颈椎病患者血流的改变。【结果】发现在造模2个月后猕猴椎动脉的血流变化较明显，且趋于稳定，造模2月后左侧椎动脉血流速度减慢，阻力指数增高，血管管径变窄，VS（6．30±1．52）cm／s、VD（2．41±0．66）cm／s、RI（0．71±0．04）、O（0．084-0．01）cm，同造模前比较，差异均具有统计学意义（P〈0．05）。右侧椎动脉代偿性的血流速增加，管径增粗。RI减低，VS（8．87±0．98）cm／s、VD（4．31±O．12）cm／s、RI（0．57±0．41）、D（0．09±0．01）cm，同造模前比较P〉0．05，差异均无统计学意义。【结论l高频超声引导注射骨水泥制作猕猴椎动脉型颈椎病模型是一种安全、可行的实验方法。

rhBMP-2对壳聚糖复合成骨细胞后的成骨活性影响

将重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP2)与壳聚糖为主要基质的支架材料相复合,γ射线辐射灭菌后接种上原代培养的大鼠成骨细胞。体外培养3天后扫描电镜观察细胞与材料的贴附情况,可见成骨细胞紧密贴附于材料孔隙内并保持良好的生长状态。将接种有成骨细胞的复合材料植入裸鼠背部皮下,植入8周后Xray摄片、组织学染色观察植入部位骨形成及支架材料降解情况。Xray下可见与植入物大小、位置相符的高密度影,组织学染色证实材料的降解及孔隙内硬骨的生成。

rhBMP-2体外诱导骨质疏松大鼠BMSCs成骨及VEGF表达的研究

目的 :观察骨形态发生蛋白-2对骨质疏松时骨髓基质干细胞(BMSCs)体外成骨及成骨因子VEGF表达的影响,为骨质疏松证的防治提供新的方法。方法:将20只6月龄,体重(300±20)g雌性SD大鼠双侧卵巢切除,术后3个月利用双能X线骨密度仪测量大鼠全身骨密度并与术前比较,确保造模成功,并运用全骨髓贴壁法培养骨质疏松大鼠BMSCs,倒置相差显微镜下观察BMSCs形态。随机把骨质疏松大鼠BMSCs第2代(p2)细胞分成实验组和对照组,分别加入完全培养基(含rh BMP-2)、成骨诱导液进行成骨诱导。2周后茜素红染色法检测各组细胞钙结节的形成,酶标仪测定碱性磷酸酶活性及RT-PCR法检测VEGF的表达量。结果:(1)大鼠全身骨密度:手术前后大鼠全身骨密度分别为(0.179±0.007),(0.158±0.006)g/cm2,差异有统计学意义(t=4.180,P<0.05)。(2)茜素红染色:BMSCs(P2)成骨诱导2周后实验组染色效果明显强与对照组。(3)碱性磷酸酶活性:BMSCs(P2)成骨诱导2周后碱性磷酸酶活性实验组明显高于对照组,分别为(15.62±1.27),(8.62±0.93)μg/prot,差异有统计学意义(t=7.709,P<0.01)。(4)BMSCs(P2)成骨诱导2周后VEGF表达:实验组明显高于对照组,分别为3.723±0.143,0.950±0.072,差异有统计学意义(t=29.462,P<0.01)。结论 :rh BMP-2能提高去卵巢骨质疏松大鼠BMSCs的体外成骨能力,可促进成骨因子VEGF的表达,调控VEGF的表达可能是骨形态发生蛋白-2参与骨代谢的机制之一。

rhBMP-2在种植体周围骨缺损修复中应用的组织学观察

目的:研究rhBMP-2及不同载体在种植体周围骨缺损修复中的应用。方法:在beagle犬下颌骨植入种植体,颊侧形成裂开性骨缺损,置入复合了不同浓度rhBMP-2的珊瑚羟基磷灰石人造骨(CHA)或可吸收胶原海绵(ACS)。种植体植入后2、4、8、12周,获取含种植体骨标本,进行组织学观察。结果:2周时,rhBMP-2组可见极少量的新生骨组织。4周时,rhBMP-2/ACS组新骨组织由牙槽骨顶端向缺损区中心方向生长;rhBMP-2/CHA组人造骨颗粒内部和周围出现呈岛状生长的新生骨组织。8周时,rhBMP-2/ACS组的新骨形成大片状结构;rhBMP-2/CHA组人造骨颗粒周围较多骨岛形成。12周时,rhBMP-2组的缺损区内骨量和骨高度进一步增加,与种植体形成骨性结合。浓度为0.05 mg/ml和0.2 mg/ml,载体为CHA或ACS促进骨再生作用差异无统计学意义。结论:以CHA或ACS为载体rhBMP-2能促进种植体周围骨缺损区内的骨组织再生并与种植体表面较好地结合。

rhBMP-2/PLA复合涂层种植体骨内诱导成骨的实验研究

目的 :观察基因重组人骨形成蛋白 - 2 (recombinanthumanbonemorphogeneticprotein - 2 ,rhBMP - 2 )和聚乳酸 (polylacticacid ,PLA)复合形成的活性涂层种植体骨内诱导成骨活性。 方法 :将rhBMP - 2与聚乳酸复合构建活性涂层种植体 ,植入兔股骨内 ,分别于 4,8,12 ,16周处死动物 ,进行组织学及扫描电镜及组织化学观察 ,检测其成骨活性。结果 :构建的活性涂层种植体具有骨诱导能力 ,PLA为rhBMP - 2的良好控释载体。结论 :rhBMP - 2 /PLA涂层具有良好的生物相容性和骨诱导活性 ,是一种理想的种植体形式。

rhBMP-2及rhbFGF对兔骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶表达的影响

目的:检测rhBMP-2和rhbFGF单独、联合及序贯作用对兔骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶作用的长期效应。方法:在细胞培养技术下,采用碱性磷酸酶检测试剂盒检测单独、联合及序贯施加rhBMP-2和rhbFGF后,兔骨髓间充质干细胞在第2、5、7及10天时碱性磷酸酶的活性水平,以反映对细胞分化作用的影响,并进行统计学分析。结果:rhBMP-2能长期显著地促进细胞的碱性磷酸酶活性,而rhbFGF则起到抑制作用,且均呈剂量依赖性。rhBMP-2单独作用与2种生长因子联合作用的效应相近,且均高于rhbFGF单独作用或2种因子序贯作用的效应。结论:不同生长因子的不同应用方式.对骨髓间充质干细胞分化作用的长期效应不同。

rhBMP-2对兔骨髓基质细胞VEGF表达及成骨潜能的影响

目的 :观察经不同剂量重组人骨形态发生蛋白 2 (recombinanthumanbonemorphogeneticpro tein 2 ,rhBMP 2 )刺激后的兔骨髓基质细胞 (marrowstromalcell,MSC) ,其血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)表达及成骨潜能变化的情况。方法 :取兔双侧股骨骨髓基质细胞体外培养 ,分别以不同剂量rhBMP 2刺激细胞 ,并设立空白对照组。培养 5d后 ,进行细胞形态 (HE染色 )、增殖情况 (细胞记数法与MTT法 )、碱性磷酸酶 (组化染色与活性测定 )、钙化结节 (图像分析 )、VEGF阳性细胞率 (免疫组化染色 )等项目的检测。结果 :不同剂量组间在碱性磷酸酶活性、矿化面积百分率、VEGF阳性细胞率三项观测指标上差异显著 ,rhBMP 2剂量为 10 0ng/ml左右时效果最佳 ;在细胞记数与MTT检测上各组差别不显著。结论 :应用rhBMP 2在促进基质细胞成骨潜能的同时 ,还可促进VEGF的表达 ,其应用剂量与效果之间存在明显相关关系 ,应用剂量为 10 0ng/ml左右时 ,其促进VEGF表达及成骨潜能作用同时达到最佳效果 ,超过此应用剂量 ,两者则有下降趋势。应用rhBMP

磷酸钙骨水泥/rhBMP-2修复犬股骨头软骨下骨缺损重建力学性能的实验研究

目的研究应用组织工程技术修复股骨头骨缺损后力学性能的变化。方法20只犬随机分为A、B两组,各组对侧作为C组。用活门法(Trapdoor)造骨缺损模型,通过活门在骨缺损区A组植入磷酸钙骨水泥/rhBMP2;B组植入多孔磷酸钙骨水泥;C组缺损区不做处理。回植活门区软骨瓣与骨关节面平齐。16周后进行组织标本观察、组织学检查、生物力学测试。结果A组,关节面光滑,无活门区软骨瓣塌陷,活门区软骨瓣色泽与周围关节软骨相近,缺损区磷酸钙骨水泥几乎完全吸收由新生骨组织替代,力学强度明显高于B、C组;B组,6只软骨瓣塌陷(1～36mm),软骨瓣色苍白,质软易碎,力学强度低于A组,骨缺损区尚残存部分磷酸钙骨水泥;C组,几乎所有软骨瓣塌陷(16～55mm),色灰白,软易碎,表面有细小的裂纹,力学强度最低,缺损区有纤维组织填充。结论新型生物活性材料多孔磷酸钙骨水泥/rhBMP2能明显加快股骨头软骨下骨缺损的修复并有效的恢复股骨头的力学性能。

聚乳酸、rhBMP-2复合体在牙槽骨修复中作用的实验研究

目的研究聚乳酸与rhBMP-2的复合体在牙槽骨修复中作用,寻找一种适合临床应用促进牙槽骨再生的新型的生物材料。方法杂种犬6只,随机分为2组,拔除每只犬的上下颌前磨牙,右侧拔牙创填入聚乳酸与rhBMP-2的复合体,左侧拔牙创自然愈合作对照,于2周、6周和10周行X线检查,于6周和10周分别处死2组犬,取拔牙创标本行光镜和扫描电镜观察对比两组成骨状况及植入材料在组织内的反应。结果X线检查及病理结果显示右侧拔牙创愈合快,成骨速度及成骨质量明显优于左侧自然愈合的拔牙创。电镜显示该材料组织相容性好,无炎性刺激反应,可降解。结论聚乳酸与rhBMP-2复合体是一种促牙槽骨再生的新型生物复合材料,可望成为临床实际应用的修复牙槽骨缺损的新型材料。

局部注射唑来膦酸和rhBMP-2对兔骨质疏松模型血清生化指标及骨小梁生长速率的影响

目的研究局部注射唑来膦酸和rh BMP-2对兔骨质疏松模型血清生化指标及骨小梁生长速率的影响。方法 30只5月龄雌性新西兰大白兔,随机选取24只摘除双侧卵巢制造骨质疏松模型,另外6只切开暴露卵巢后即关腹,作为假手术对照组。造模成功后,24只骨质疏松兔按注射药物不同分为BMP组(rh BMP-2)、ZOL组(唑来膦酸)、B+Z组(rh BMP-2+ZOL)、空白对照组(生理盐水)及假手术组,每组6只动物。分别在注射后当天、2周、4周、6周、8周、10周、12周,由兔耳缘静脉取血,分离血清,使用相应试剂盒检测血清碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)活性;同时应用四环素-钙黄绿素荧光标记在第6周、第12周处死取材,观察并测量骨小梁生长速率。结果 1注射后第4周,BMP、B+Z组ALP活性均明显高于ZOL组和NON组(P<0.05);从第6周开始,BMP与B+Z组的ALP活性与假手术组均无明显差异(P>0.05);2在第8、10周,B+Z组TRACP活性明显低于假手术组(P<0.05);ZOL和B+Z组TRACP活性较早即开始下降,并且与BMP组相比下降更快(P<0.05)。3 BMP组骨小梁生长速率在各个时间点均明显高于其他三组(P<0.05)。结论 rh BMP-2+ZOL联合应用,能够更好地抑制破骨细胞的骨吸收作用,而rh BMP-2则能够增强成骨细胞的成骨作用,提高骨小梁的生长速率。