rhCD40L联合化疗药物对乳腺癌细胞株生物学行为的影响

为了研究人重组CD40L(rhCD40L)对乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞生物学行为的影响,运用多种细胞生物学、分子生物学方法检测细胞生长、细胞周期、细胞膜分子、凋亡相关基因Bcl-Xl、Bax及趋化因子RANTESmRNA水平的改变,并观察了rhCD40L联合IFN-γ、阿霉素(ADM)对MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果发现rhCD40L抑制MDA-MB-435、MDA-MB-231细胞增殖,与剂量呈负相关(P<0.05);两株乳腺癌细胞分别在CD40配基化(ligation)作用48、72h进入G1期细胞阻滞;MDA-MB-231细胞CD54、CD95(Fas)、CD120b等分子表达均显著上调,CD95L(FasL)表达下调(P<0.05);MDA-MB-435细胞CD49e、CD95L、CD120a、HLA-DR等分子有显著性变化。两株乳腺癌细胞经rhCD40L作用4、24h后,RT-PCR半定量Bax/Bcl-Xl的比率、RANTES的表达与对照组相比均上调。rhCD40L联合IFN-γ、阿霉素对MDA-MB-231细胞增殖有较强的抑制作用(P<0.05)。由此表明,CD40信号影响乳腺癌细胞周期及TNF家族成员及MHCII类分子的表达,上调凋亡相关基因Bax/Bcl-Xl的比值和趋化因子RANTESmRNA水平,直接或间接介导抗肿瘤作用。同时,rhCD40L还可增强肿瘤细胞对细胞因子和化学药物的敏感性。

CD40配体激活增强Docetaxel对乳腺癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨rhCD40L联合化疗药Docetaxel对乳腺癌细胞增殖的影响。方法用MTT法测定CD40+的乳腺癌细胞株M231、M435细胞经rhCD40L+Docetaxel处理后的增殖状况;采用碘化丙啶(PI)掺入法测定细胞周期;流式细胞仪检测癌细胞膜分子CD54、CD95及CD95L表达变化。结果 rh-CD40L可抑制M231、M435增殖,合用Docetaxel时M231、M435的增殖受到进一步抑制,G1期细胞数量明显增加(P<0.05),S期细胞数量下降(P<0.05)。CD95表达上调(P<0.05),CD54、CD95L表达下调(P<0.05)。结论 rhCD40L可提高Docetaxel对乳腺癌细胞的抗肿瘤效应,其机制可能与rh-CD40L将乳腺癌细胞增殖阻滞在G1期、上调CD95、下调CD54、CD95L表达有关。

活化CD40-CD40L通路联合Docetaxel对乳腺癌细胞增殖的影响

目的:探讨活化淋巴细胞活化的共刺激通路CD40-CD40L联合化疗药Docetaxel对乳腺癌细胞增殖的影响。方法:用rhCD40L活化CD40-CD40L共刺激通路,联合Docetaxel,用MTT法测定CD40+的乳腺癌细胞株M231、M435细胞的增殖;采用碘化丙啶(PI)掺入法测定细胞周期。结果:rhCD40L可抑制乳腺癌细胞M231、M435增殖,合用Docetaxel时乳腺癌细胞M231、M435的增殖受到进一步抑制,测定细胞周期G1期细胞数量明显增加(P<0.05),S期细胞数量下降(P<0.05)。结论:活化CD40-CD40L通路能抑制孔腺癌细胞的增殖,这种抑制作用具周期特异性,主要将乳腺癌细胞增殖阻滞在G1期,可提高乳腺癌细胞对Docetaxel的敏感性,两者具有抑制肿瘤细胞的协同效应。

以重组人类CD40配体为主的细胞因子体外诱导急性髓系白血病完全缓解患者及健康人外周血单个核细胞来源的树突状细胞形态及表型分析

目的以健康人AB血清与以重组人类CD40配体（rhCD40L）为主的细胞因子体外诱导急性髓系白血病完全缓解（AML—CR）患者及健康人外周血的单个核细胞，并分析其形态及表型差异。方法以健康人AB血清为基础的培养体系中加入GM-CSF、rhIL-4、rhCD40L等细胞因子，诱导单个核细胞分化形成树突状细胞（DC）。瑞特-吉姆萨染色观察形态；流式细胞术鉴定表型；M3T法检测DC对淋巴细胞抗原刺激能力；ELISA法检测DC培养上清IL-12的分泌。结果培养7d后的细胞具有典型的MoDC形态，并上调表达MoDC特征性表面分子CD83及共刺激分子CD40CD80CD86，AML-CR组与健康人组相比差异无统计学意义（均P〉0．05），但加rhCD40L组较未加rhCD40L组间差异有统计学意义（均P〈0．05）。培养后的MoDC可较强地刺激同种自体淋巴细胞增殖，AML．CR组与健康人组间刺激淋巴细胞增殖作用的差异无统计学意义（P〉0．05），但加rhCD40L组较未加rhCD40L组间差异均有统计学意义（均P〈0．05）。培养的MoDC自培养第5天始即有IL-12的分泌，AML-CR组与健康人组相比IL-12分泌水平差异无统计学意义（P〉0．05），加rhCD40L组与未加rhCD40L组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论以rhCD40L为主的细胞因子体外可诱导AML-CR患者及健康人外周血DC生成，两者在形态及表型上无明显差异，DC可刺激白血病特异毒性T细胞增殖，尤以由rhCn40L诱导的DC作用明显。

健康人外周血树突状细胞的体外诱导及其功能分析

目的分析以健康人AB血清与rhCD40L体外诱导健康人外周血树突状细胞（Dc）的功能。方法对健康人外周血单个核细胞进行体外培养，在以健康人AB血清为基础的培养体系中加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、重组人白细胞介素（rhIL）-4、rhCDnoL等细胞因子，诱导单个核细胞分化形成DC，采用倒置显微镜及瑞特-吉姆萨染色观察，流式细胞术行DC表型鉴定，四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法进行混合淋巴细胞反应（MLR），检测其抗原刺激能力，酶联免疫吸附（ELISA）法检测DC培养上清IL-12的分泌。结果培养7d后的细胞具有典型的DC形态，并上调表达DC特征性表面分子CD83及共刺激分子CD40、CD80、CD86，第0、1、3、5、7天，5个时间点间CD83、CD40、CD80、CD86、CD14表达差异有统计学意义（F值分别为50．253、243．769、248．181、191．267、226．339，均P〈0．05）。培养后的DC可较强地刺激同种自体淋巴细胞增殖，GM-CSF加rhIL-4、rhCD40L组较GM—CSF加rhIL-4组刺激反应能力强。培养的DC自培养第5天始即有IL-12分泌，未加CD40L组IL-12p40分泌量为（42．92±1．54）Pg／ml，加CD40L组为（136．18±5．27）Pg／ml；培养第7天，IL-12p40分泌明显增多，两组分别为（60．09±2．27）pg／ml及（322．30±30．60）Pg／ml，差异有统计学意义（t=-44．941、-22．611，均P〈0．05）。结论健康人外周血单个核细胞可在以健康人AB血清与rhCD40L为主的培养体系中诱导成DC。