rhBMP-4与rhIGF-Ⅰ联合应用对人牙周膜成纤维细胞增殖及分化能力的影响

目的:探讨rhBMP-4与rhIGF-Ⅰ联合应用对人牙周膜成纤维细胞增殖及分化能力的影响。方法:将人牙周膜成纤维细胞分别与10ng/ml rhBMP-4、10ng/ml rhIGF-Ⅰ、10ng/ml rhBMP-4+10ng/ml rhIGF-Ⅰ、无血清DMEM共同培养3d,用MTT法测定细胞增殖情况,用碱性磷酸酶试剂盒检测细胞碱性磷酸酶的活性,用羟脯氨酸试剂盒检测细胞分泌Ⅰ型胶原的量。结果:第3天,10ng/ml rhBMP-4+10ng/ml rhIGF-Ⅰ组人牙周膜成纤维细胞的生长增殖能力最强,并与其它3组比较有显著性差异(P<0.05),但其增强细胞碱性磷酸酶的活性及促进细胞分泌Ⅰ型胶原的能力并不比两者单独作用强。结论:rhBMP-4与rhIGF-Ⅰ联合应用,能协同促进人牙周膜成纤维细胞增殖,但不能协同促进细胞分化。

rhIGF-Ⅰ、rhTGF-β1对骨髓基质细胞增殖分化成软骨细胞的实验研究

目的研究重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF-1)、重组人转化生长因子(rhTGF-β1)和重组人胰岛素样生长因子(rhIGF-Ⅰ)体外对骨髓基质细胞生物学活性的影响,并在体内诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化。方法单独或联合应用细胞因子对细胞进行体外诱导培养,进行常规染色、MTT、免疫组织化学染色观察细胞因子对骨髓基质细胞的作用。体内将rhTGF-β1和rhIGF-Ⅰ,骨髓基质细胞复合于纤维蛋白凝胶,植入到兔膝关节实验性关节软骨缺损,观察软骨修复效果。结果常规形态学观察,rhTGF-β1和rhIGF-Ⅰ联合应用诱导的细胞在形态上类似于软骨细胞,免疫组化染色提示诱导细胞具有软骨细胞表型。rhTGF-β1和rhIGF-Ⅰ在体内能诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化,修复缺损的软骨。结论rhT-GF-β1和rhIGF-Ⅰ联合应用可作为诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化的最佳组合。

RHIGF-Ⅰ对体外单层培养的肝细胞PEPCK mRNA丰度的影响

根据牛肝细胞中持家基因表达的恒定性,选用β肌动蛋白(β-actin)作为内参照,检测外源性添加不同质量浓度的重组人胰岛素样生长因子(RHIGF-Ⅰ)对体外培养牛肝细胞磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA表达水平的变化情况。选用体外培养的犊牛单层肝细胞为实验模型,当细胞贴壁后在无血清培养液中添加RHIGF-Ⅰ,其终质量浓度分别为0、5、10、15、20、30、40、50、60、100、150μg/L,待添加8h后,提取总RNA,反转录,用相同的模板扩增PEPCK基因及β内参,再比较各梯度目的基因与内参的灰度。结果表明,随着添加RHIGF-Ⅰ质量浓度的升高,PEPCK mRNA表达呈下降趋势,且均低于对照组。

rhBMP-2/rhbFGF和rhBMP-2/rhIGF-I对牙种植体周围新骨形成的影响

目的观察rhBMP-2/rhbFGF和rhBMP-2/rhIGF-I对种植体周围新骨形成的影响。方法64枚种植体平分为四组,Ⅰ组应用rhBMP-2和rhbFGF;Ⅱ组rhBMP-2和rhIGF-Ⅰ;Ⅲ组仅rhBMP-2;Ⅳ组不应用任何生长因子。种植体植入动物体内后4周、8周,分别注射钙黄绿素和茜素红;12周,处死动物。组织块MMA包埋,激光共聚焦显微镜观察。结果Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组中标记物均多于Ⅳ组;Ⅰ和Ⅱ组未发现差异;Ⅱ组标记物均多于Ⅲ组;而Ⅰ组黄绿色与Ⅲ组无差别。结论rhBMP-2可明显促进种植体周围新骨生成,与rhbFGF、rhIGF-Ⅰ复合,可促进骨结合。

体外冲击波联合重组人胰岛素样生长因子Ⅰ对MG63细胞的作用

目的:探讨体外冲击波(extracorporal shockwave,ESW)和重组人胰岛素样生长因子Ⅰ(recombinant human insulin-like growth factor-1,rhIGF-Ⅰ)联合作用对成骨细胞增值及骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)表达的影响。方法:体外培养人成骨肉瘤细胞株(MG63),制备细胞悬液(1×106cells/m l),实验组分别经ESW、rhIGF-Ⅰ、ESW联合rhIGF-Ⅰ处理,对照组不处理,用MTT比色法检测细胞增殖,ELISA法测定细胞培养上清液中的BMP-2含量。结果:24小时后,ESW组和rhIGF-Ⅰ组与对照组相比细胞明显增殖、BMP-2表达增多(P<0.05),两组间48小时后BMP-2分泌量差异具有统计学意义(P<0.05)。两者联合作用后能显著促进MG63细胞表达BMP-2,并持续到48小时后,与各自单独作用相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:ESW和rhIGF-1均能促进MG63细胞增殖及自分泌BMP-2;ESW与rhIGF-1联合应用对促进MG63细胞自分泌BMP-2具有协同作用,但是两者联合作用在细胞增殖和活力上协同作用不明显。

重组人胰岛素样生长因子I对大鼠成骨细胞增殖、凋亡及I型胶原蛋白合成的影响

目的 观察胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、凋亡及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响，探讨IGF-Ⅰ对骨代谢影响的可能机制。方法 不同浓度rhIGF-Ⅰ刺激体外培养的大鼠成骨细胞，采用噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖能力；肿瘤坏死因子α（TNF-α单独或与rhIGF-Ⅰ共同刺激成骨细胞，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率；rhIGF-Ⅰ刺激成骨细胞，免疫细胞化学结合计算机图像分析系统检测Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果 一定浓度IGF-Ⅰ能明显增加成骨细胞数量（P〈0．05），在0．1～100ng／ml这种作用与IGF-Ⅰ的浓度呈正相关；TNF-α在0．1～100ng/ml浓度范围内呈剂量依赖性地促进成骨细胞凋亡（P〈0．05），并使S期细胞减少（P〈0．05），而IGF-Ⅰ能抑制，TNF-α对成骨细胞的促凋亡作用（P〈0．05）；经IGF-Ⅰ的刺激，成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达明显高于对照组（P〈0．05）。结论 IGF-Ⅰ对大鼠成骨细胞有明显的促增殖作用，在0．1～100ng/ml之间呈浓度依赖性，IGF-Ⅰ能抑制，TNF-α诱导的大鼠成骨细胞凋亡，IGF-Ⅰ能促进大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的合成。

生长因子缓释微球的制备及对人牙周膜成纤维细胞作用的研究

目的:制备重组人胰岛素样生长因子缓释明胶微球(rhIGF-Ⅰ-GMs),观察其一般性质、体外释药特性、对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的增殖及Ⅰ型胶原合成的影响。方法:改良乳化冷凝聚合法制备rhIGF-Ⅰ-GMs,扫描电镜(SME)观察其一般性质;ELISA法测定rhIGF-Ⅰ的含量,计算微球包封率和载药率及绘制微球体外释药曲线。体外培养HPDLFs,四唑盐比色法(MTT)和羟脯氨酸试剂盒消化法动态观察rhIGF-Ⅰ和rhIGF-Ⅰ-GMs梯度含量分别对HPDLFs增殖及Ⅰ型胶原合成的影响。结果:微球表面光滑圆整,球体均匀度好,平均粒径为(12.51±3.53)μm,冻干粉剂为白色粉末状,再分散性良好,微球载药量和包封率分别为920ng/g和92.0%,体外7d内药物缓释72.5%;rhIGF-Ⅰ和rhIGF-Ⅰ-GMs均明显促进HPDLFs增殖及Ⅰ型胶原分泌(P<0.05);rhIGF-Ⅰ-GMs较单独应用rhIGF-Ⅰ的效果更加显著(P<0.01),呈浓度及时间依赖性。结论:rhIGF-Ⅰ-GMs及其冻干粉剂制备良好;rhIGF-Ⅰ-GMs通过对rhIGF-Ⅰ的缓释作用促进HPDLFs增殖及Ⅰ型胶原分泌的效果明显优于单独使用rhIGF-Ⅰ。