rhTNFα加rhIL-2诱导小鼠CNE3细胞凋亡和抑制增殖的体内实验研究

目的：研究重组人肿瘤坏死因子（rhTNF－α）对鼻咽癌细胞敏感性、重组人白细胞介素－2（rhIL－2）协同抗瘤效应及抗瘤机理。方法：利用我室建立的鼻咽癌细胞株（CNE3）制成的裸鼠鼻咽癌模型，rhTNFα通过与rhIL－2配伍瘤内注射以观察移植瘤超微结构及免疫组织化学的改变，探讨其作用机理。结果：鼻咽癌裸鼠移植瘤经治疗后出现坏死、体积缩小、甚至消失；超微结构观察凋亡细胞缩皱，核内异染色质边集；免疫组化研究发现：rhTNF－α有下调（突变型）p53和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达，其可能与rhTNF－α的抗癌机理有关；rhIL－2能增强rhTNF－α的抗瘤作用。结论：rhIL－2增强rhTNF－α的抗瘤机理可能与IL－2诱导癌细胞表达TNF受体作用有关，该研究为临床在鼻咽镜下进行TNF局部治疗提供实验依据。

肿瘤浸润淋巴细胞和低剂量rhIL-2综合治疗进展期肿瘤的初步研究

对20例经手术切除的进展期肿瘤患者用活化的自身肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）和重组人白细胞介素－2（rhIL－2）治疗，并检测治疗前后细胞免疫变化。患者的PBL对同种异体相同组织学类型靶细胞的细胞毒性明显升高（P＜0．05），而对无关靶细胞的细胞毒性无明显变化（P＞0．05）；外周血淋巴细胞产生IL－2的能力均有明显的提高，从12．3U／ml到19．8U／ml（P＜0．01）；对植物血凝素（PHA）皮试反应性明显增强，反应直径从8．6mm升高到13．5mm（P＜0．01）。TIL输注过程中，11例有一过性寒战、发热（T＜38℃），其中6例伴轻度恶心、呕吐。结果提示：单次输注TIL和小剂量rhIL－2综合治疗后，可明显提高进展期肿瘤患者的细胞免疫功能，而无严重毒副作用，可能成为进展期肿瘤术后重要的辅助治疗方法。

大剂量rhIL-2疗法对恶性肿瘤患者免疫功能的影响

目的：观察大剂量重组人白细胞介素Ⅱ（ｒｈＩＬ－２，欧耐特）治疗对恶性肿瘤患者免疫功能的影响。方法：采用ｒｈＩＬ－２×１０６Ｕ，溶于２００ｍｌ生理盐水中，静脉滴注，１次／ｄ，连续５ｄ，停２ｄ，四周为一疗程。所有患者治疗前后均静脉采血进行Ｔ细胞亚群及血清ＴＮＦ－α和ＳＯＤ含量测定。结果：６例未行手术治疗患者，有２例完全反应（ＣＲ）；２１例患者治疗前细胞免疫功能严重障碍，治疗后各项指标均更趋于正常水平。２１例患者共输注治疗４２０次，发生不良反应率仅为８．６％。１４例患者治疗后生活质量明显提高（占６６．７％）。结论：大剂量ｒｈＩＬ－２静脉输注治疗恶性肿瘤对改善免疫功能。

rhIL-2与阿霉素长循环热敏脂质体靶向治疗肿瘤的协同作用

目的:观察重组人白细胞介素-2(rhIL-2)与阿霉素长循环热敏脂质体(ALTSL)联合靶向治疗荷H22瘤小鼠的协同作用,并探讨其抑瘤作用的机制。方法:以荷H22瘤小鼠的瘤重为指标,评价药物的抑瘤活性。以荷H22瘤小鼠的存活天数计算生命延长率。以乳酸脱氢酶释放法测定NK细胞的杀伤活性。以MTT比色法检测淋巴细胞的转化率。以流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡及p53、Fas、FasL和caspase-3的表达。用RT PCR法测定IL-2mRNA及IL-12mRNA的表达。镜下观察荷H22瘤小鼠肿瘤、心、肝及肾脏组织的病理变化。结果:rhIL2+ALTSL的抑瘤率显著高于单用ALTSL,分别为73.5%和67.0%;ALTSL和rhIL2+ALTSL均可显著延长荷瘤小鼠的存活时间(P<0.05～P<0.01)与对照组和游离阿霉素(FADM)组相比较,ALTSL组NK细胞的杀伤活性显著增加,rhIL2+ALTSL组NK细胞的杀伤活性更高。与FADM组比较,rhIL-2+ALTSL组淋巴细胞的转化率明显提高(P<0.01)。应用ALTSL组和rhIL-2+ALTSL组均可增强脾细胞中IL-2mRNA和IL-12mRNA的表达,但后者的增强作用高于前者。病理切片检查显示,热敏脂质体配合肿瘤局部加热,使肿瘤细胞凝固坏死,联合应用rhIL-2肿瘤组织溶解,细胞破碎,可见大量的淋巴细胞浸润。结论:ALTSL能提高ADM的抑瘤效果,降低ADM心肺的毒性。

rhIL-15和rhIL-2诱生的LAK细胞特性比较

目的：研究ｒｈＩＬ－１５激活的ＬＡＫ细胞的增殖、细胞毒作用及相关表型的变化。方法：通过用不同浓度的ｒｈＩＬ－１５和ｒｈＩＬ－２分别诱生 ＬＡＫ细胞，研究二者诱生的 ＬＡＫ细胞的增殖状况；当 ｒｈＩＬ－２和 ｒｈＩＬ－１５为 １５００ Ｕ／ｍｌ时，ＭＴＴ法检测 ＬＡＫ细胞的细胞毒作用，利用流式细胞仪检测细胞表面ＣＤ分子表达情况。结果：ＬＡＫ细胞的增殖对ｒｈＩＬ－２和ｒｈＩＬ－１５均具有时间和剂量依赖性，且无明显差异；终浓度为 １５００ Ｕ／ｍｌ时，ｒｈＩＬ－１５诱生的 ＬＡＫ细胞杀伤 Ｋ５６２细胞的能力强于 ｒｈＩＬ－２诱生的 ＬＡＫ细胞，而对Ｒａｊｉ细胞的杀伤活性，ｒｈＩＬ－２诱生的ＬＡＫ细胞却明显高于 ｒｈＩＬ－１５诱生的 ＩＡＫ细胞，且二者杀伤活性均具有时间依赖性；同时ｒｈＩＬ－１５诱生的ＬＡＫ细胞的ＣＤ３－ＣＤ５６＋细胞、Ｃｄ９４＋细胞百分率均高于ｒｈＩＬ－２诱生的ＬＡＫ细胞。结论：ｒｈＩＬ－１５在体内对ＮＫ细胞功能可能具有较强的调节作用。

CD_3 McAb联合rhIL-2激活的骨髓对白血病细胞杀伤净化作用的研究

目的 探讨CD3单克隆抗体 (CD3McAb)联合重组人白细胞介素 2 (rhIL 2 )激活的骨髓对白血病细胞的杀伤及净化作用。方法 用MTT法检测激活骨髓的细胞毒作用 ;半固体集落培养法观察激活骨髓CFU GM水平和对白血病细胞的净化作用 ;采用间接荧光法测定激活骨髓的免疫标记。结果 CD3McAb与rhIL 2联合激活的骨髓对白血病细胞株K5 6 2、HL 6 0均有明显的杀伤净化作用 ,且优于rhIL 2或CD3McAb单用组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。rhIL 2和 (或 )CD3McAb对激活骨髓的CFU GM水平无明显影响。CD3McAb +rhIL 2激活的骨髓 ,与活化前及rhIL 2或CD3McAb组相比 ,CD3+ 、CD8+ 、CD1 9+ 、CD2 5+ 、CD38+ 、CD56+ 细胞显著升高。结论 CD3McAb能增强rhIL

rhIL-2对动物瘢痕成纤维细胞的影响

目的 :研究rhIL -2对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响以及与病理改变的关系 ,以探讨细胞因子对瘢痕的作用机理 .方法 :应用rhIL -2对大鼠动物创伤模型进行体内实验 ,采用Mallory胶原纤维染色、透射电镜等方法进行观察、分析 .结果 :rhIL-2促进成纤维细胞的生长增殖 ,刺激胶原纤维的合成、增生和沉积 .结论 :作为成纤维细胞正性调节因子 ,rhIL -2在创伤早期有利于伤口愈合 ,但过度作用可能导致瘢痕的形成和增生 .

rhIL-2膀胱灌注后血浆cAMP、cGMP的变化和意义

cAMP和cGMP作为生物分子活动的第二信使参与机体的多种生理,病理过程。在肿瘤细胞及肿瘤患者的体液和淋巴细胞中cAMP和cGMP均发生改变,而且和病情及机体的免疫状态有密切关系。我们在临床工作中发现膀胱肿瘤患者血浆cAMP、cGMP异常,IL-2膀胱灌注可减少膀胱肿瘤复发。本文旨在观察IL-2膀胱灌注对cAMP、cGMP的影响,从而探讨IL-2膀胱灌注防治膀胱肿瘤复发的机制。

rhIL-2/GM-CSF融合蛋白抗体制备、鉴定及其生物学活性研究

目的 :制备 rh IL - 2 / GM- CSF融合蛋白的抗体 ,并观察该抗体的特异性及对融合蛋白生物学活性的影响。方法 :用纯化的融合蛋白 (rh IL - 2 / GM- CSF)作为抗原 ,免疫新西兰兔后制备抗血清 ,用 EL ISA和 Dot- EL ISA检测抗体滴度和特异性。用依赖株细胞增殖实验检测抗体对 rh IL - 2 / GM- CSF生物学活性的影响。 结果 :此抗体效价高 ,特异性好 ,不仅与融合蛋白(rh IL - 2 / GM- CSF)、IL - 2以及 GM- CSF发生反应 ,而且能够竞争抑制 rh IL - 2 / GM- CSF的生物学活性。 结论 :此抗体可用于融合蛋白 (rh IL - 2 / GM- CSF)

rhIL-2对人骨髓CFU-GM与CFU-E和BFU-E的影响

目的:为了探索rhIL-2对人骨髓造血干祖细胞体外增殖的影响。方法:本文采用甲基纤维素体外半固体培养法。结果:证明了50～1000U/ml rhIL-2单用时对人骨髓造血祖细胞的CFU-GM、CFU-E及BFU-E无直接刺激增生作用,当与GM-CSF联合应用时,100～400U/ml rhIL-2其CFU-GM集落形成率明显高于单用GM-CSF(100U/ml)的对照组(P<0.05),当与EPO(2U/mi)联合应用时其CFU-E,及BFU-E集落形成率也明显高于单用EPO对照组(P<0.05),而1000U/ml rhIL-2其三种集落形成数目呈下降趋势,可能有抑制作用。结论:以上结果说明100～400U/ml rhIL-2可应用于协同GM-CSF及EPO体外扩增骨髓干/祖细胞来进行骨髓移植。

抗rhIL-2单克隆抗体高效亲和色谱填料的制备及其应用

目的 制备抗基因重组人 IL- 2 (rh IL- 2 ) m Ab的高效亲和色谱填料并用于 rh IL- 2的纯化 .方法 以硅胶为基质 ,使用 γ-缩水甘油氧基丙基三甲氧基硅烷对其表面进行化学改性 ,然后在 1,1-碳化二咪唑的作用下 ,与抗 rh IL- 2的 m Ab进行偶联 ,制备高效亲和色谱填料 .结果 使用该填料对大肠杆菌表达的 rh IL - 2进行了纯化 ,纯化后的 IL - 2经 CTL L细胞活性测定和 SDS- PAGE的纯度测定 ,确定其活性回收率为92 % ,比活为 2 .0× 10 9IU· g- 1 蛋白质 ,纯度为 95 % .结论 以硅胶为基质制备的抗 rh IL - 2的 m Ab高效亲和色谱填料纯化 rh IL- 2是一个好的方法 .

rhTNF-NB与rhIL-2联合应用治疗恶性胸腔积液的疗效观察

目的 比较rhTNF -NB与rhIL -2胸腔内联合注射 ,治疗恶性胸腔积液与单纯应用rhTNF -NB的疗效和毒副反应 ,寻求高效低毒治疗恶性胸腔积液的方法 ,以提高晚期癌症患者的生活质量。方法 对符合治疗条件的 5 0例恶性胸腔积液患者采用随机分组研究方法 ,观察联合应用 (方法 :先尽量抽取胸腔积液 ,先后将rhTNF -NB 2 0 0万单位用生理盐水 2 0ml稀释和rhIL -2 2 0万单位用生理盐水 2 0ml稀释注入胸腔。为减轻局部反应 ,可加 2 %利多卡因 10ml一并注入。每周 2次 ,2周为一疗程。如疗程中胸腔积液消失 ,即停止治疗。)与单独应用 (方法同上 ,每次仅注入rhTNF -NB 30 0万单位 )的临床疗效和毒副反应。结果 联合组有效率为92 0 % ,对照组为 44 0 % ,两组有显著性差异 (P <0 0 5 )。副作用有发热、寒战、恶心、呕吐、胸痛、乏力、血球变化及一过性肝肾损害等 ,两组无显著性差异。结论 rhTNF -NB与rhIL -2联合应用协同作用 ,疗效肯定 ,方法简单 。

rhIL-1β、rhIL-2和rhIL-6对体外培养海马神经胶质细胞c-fos表达的影响

采用免疫组织化学方法观察了重组人白细胞介素-1β、重组人白细胞介素-2和重组人白细胞介素-6对体外培养大鼠海马神经胶质细胞c-fos表达的影响。结果证明，培养12d的海马神经胶质细胞与重组人白细胞介素-1β（100U／ml）、重组人白细胞介素-2（200U／ml）和重组人白细胞介素-（200U／ml）一起孵育2h后出现FOS-免疫反应阳性的细胞核，随着所给剂量的逐渐加大，FOS反应阳性胞核数量也逐渐增多．图象分析的结果显示，FOS反应阳性胞核的平均光密度亦随剂量的逐渐加大而逐渐增加．本研究的结果提示：重组人白细胞介素-1β、-2及-6均能诱导体外培养大鼠海马神经胶质细胞c-fos的表达。说明三者对体外培养的海马神经胶质细胞具有生物学作用。推测c－fos表达可能是这些细胞因子发挥生物效应的重要中间途径。

腹腔热灌注化疗联合rhIL-2序贯疗法治疗恶性腹腔积液的近期疗效观察

目的评价腹腔热灌注化疗联合rhIL-2序贯疗法治疗恶性腹腔积液的近期疗效,分析疗效差异原因。方法收集2012年6月-2017年6月湖南省肿瘤医院收治的72例恶性腹腔积液患者的完整临床资料,随机分为序贯治疗组和对照组。序贯治疗组38例,采用氟尿嘧啶+顺铂腹腔热灌注化疗联合序贯腹腔灌注rhIL-2;对照组34例,采用氟尿嘧啶+顺铂腹腔热灌注化疗。分析并比较两组患者的腹水缓解率及化疗不良反应。结果对照组有效率为41.2%,腹水中位缓解时间为7.4个月,序贯治疗组有效率为73.7%,腹水中位缓解时间为11.3个月,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论相比单纯腹腔热灌注化疗,腹腔热灌注化疗联合rhIL-2序贯治疗可在局部达到更好的控制效果,且未增加不良反应,患者耐受性好,可用于恶性腹腔积液患者的姑息治疗。

rhIL-2治疗单纯疱疹性角膜炎实验研究

目的应用人重组白细胞介素Ⅱ（ｒｈＩＬ２）配合常规药物治疗兔单纯疱疹性角膜炎（ＨＳＫ）预防复发。方法给兔接种ＨＳＶ前１０天应用ｒｈＩＬ２提高免疫功能治疗，待形成ＨＳＫ后配合常规药物治疗，同时设对照组。应用ＰＣＲ技术检测观察兔感染ＨＳＶ１体内动态变化，依据ＨＳＫ诊断标准观察其疗效。结果实验组与对照组相比有延长潜伏感染期、发病轻、病程短、恢复快，ＨＳＶ在三叉神经节潜伏率低。结论应用ｒｈＩＬ２能治疗兔ＨＳＫ和预防复发，无不良反应。

亚甲基兰法检测人白介素-2(rhIL-2)活性

用亚甲基兰法、3 H TdR掺入法和MTT法 3种方法对 2 0批检品重组人白介素 2 (rhIL 2 )活性进行检测 ,结果差异不显著 ( p >0 .0 5)。与3 H -TdR掺入法和MTT法相比较 ,亚甲基兰法具有经济、快捷、对操作者无损害和对环境无污染等特点 ,是一种值得采用的重组人白介素 2活性检测方法 ,适合重组人白介素 2生产过程中中间品的质量监控。

Lys-2-rhTNFα及^(125)Ser-rhIL-2促进小鼠腹腔巨噬细胞的肿瘤杀伤活性的研究

研究了 L ys- 2 - rh TNFα(1)及 1 2 5 Ser- rh IL- 2 (2 )对小鼠腹腔巨噬细胞杀伤肿瘤的促进作用。2单用能激活小鼠巨噬细胞对小鼠肥大细胞瘤 P815的细胞毒性 ,1单独无此作用 ,但与 2联合使用能促进 2对巨噬细胞的激活作用。腹腔非粘附细胞的存在是 2或 2联合