rhBMP2和rhTGF-β1联合应用对人牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的 :探讨rhBMP2和rhTGF - β1联合应用对人牙髓细胞ALPase活性的影响。 方法 :采用酶动力学的方法 ,比较不同浓度rhBMP2和rhTGF - β1单独或联合应用对人牙髓细胞的ALPase活性的影响。 结果 :rhBMP2对人牙髓细胞的ALPase活性呈浓度依赖性增强 ,rhTGF - β1对人牙髓细胞ALPase活性的影响与其本身浓度有关。当rhTGF - β1浓度为 1μg/L与rhBMP2联合应用时 ,ALPase活性比rhBMP2单独应用明显增高。结论 :rhBMP2、rhTGF - β1单独及联合应用于人牙髓细胞时 ,对人牙髓细胞的ALPase活性作用不同 。

rhIGF-Ⅰ、rhTGF-β1对骨髓基质细胞增殖分化成软骨细胞的实验研究

目的研究重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF-1)、重组人转化生长因子(rhTGF-β1)和重组人胰岛素样生长因子(rhIGF-Ⅰ)体外对骨髓基质细胞生物学活性的影响,并在体内诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化。方法单独或联合应用细胞因子对细胞进行体外诱导培养,进行常规染色、MTT、免疫组织化学染色观察细胞因子对骨髓基质细胞的作用。体内将rhTGF-β1和rhIGF-Ⅰ,骨髓基质细胞复合于纤维蛋白凝胶,植入到兔膝关节实验性关节软骨缺损,观察软骨修复效果。结果常规形态学观察,rhTGF-β1和rhIGF-Ⅰ联合应用诱导的细胞在形态上类似于软骨细胞,免疫组化染色提示诱导细胞具有软骨细胞表型。rhTGF-β1和rhIGF-Ⅰ在体内能诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化,修复缺损的软骨。结论rhT-GF-β1和rhIGF-Ⅰ联合应用可作为诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化的最佳组合。

大黄素和rhTGF-β1联合诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

目的探讨不同的方法对人骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化的影响。方法采用不同方法诱导第三代人骨髓MSCs向成骨细胞分化,对照组:采用基础诱导培养液:地塞米松(10^(-8) mol/L)、β-甘油磷酸钠(10 mmol/L)、L-抗坏血酸(50μg/L);大黄素组:基础诱导培养+大黄素(10^(-6) mol/L);大黄素rhTGF-β1组:基础诱导培养液+大黄素(10^(-6) mol/L)+重组人转化生长因子-β1(recombinant human transforming growth factor-betal,rhTGF-β1)5 ng/ml。结果大黄素和rhTGF-β1对人骨髓MSCs增殖的影响:对照组和大黄素组与大黄素+rhTGF-β1组比较均具有显著差异(P<0.05)。大黄素和rhTGF-β1对人骨髓MSCs分化的影响:对照组、大黄素组与大黄素+rhTGF-β1组比较均具有显著差异(P<0.01)。结论基础诱导培养液加rhTGF-β1 5 ng/ml和大黄素(10^(-6) mol/L是理想的具有临床实用价值的成人骨髓MSC体外诱导为成骨细胞的培养体系。

rhPDGF-BB与rhTGF-β_1联合应用对大鼠正畸牙压力侧破骨细胞FAK mRNA表达的影响

目的:观察外源性的血小板衍生生长因子-BB(rhPDGF-BB)与转化生长因子-β1(rhTGF-β1)联合应用对大鼠正畸牙压力侧破骨细胞FAK mRNA基因水平的表达变化。方法:将160只SD大鼠随机分为实验组和对照组。每组又根据检测时间点不同分为5个小组(n=16),分别建立正畸牙移动模型。实验组从加力第1天开始在正畸牙颊侧黏膜下隔日注射rhPDGF-BB 10 ng与rhTGF-β15 ng,对照组注射相同容量的PBS。加力后1、4、7、10和14 d分别处死每大组的一小组大鼠。收集标本,用TRAP染色观察压力侧破骨细胞数量的变化,实时定量PCR(RT-PCR)检测FAK mRNA基因的表达。结果:rhPDGF-BB及rhTGF-β1联合注射明显促进压力侧破骨细胞数目的增加(P<0.05);破骨细胞内FAK mRNA基因量的表达7 d前增加(P<0.05),7 d后逐渐降低,14 d时与对照组无显著差异(P>0.05)。结论:外源性PDGF-BB和TGF-β1联合应用促进正畸牙压力侧破骨细胞增殖,增加了破骨细胞内FAK mRNA基因表达。

rhbFGF、rhTGF-β、rhBMP-2对骨髓基质细胞体外培养增殖的影响

目的 :探讨重组人骨形成蛋白 (rhBMP 2 )、重组人转化生长因子 beta(rhTGF β1)、重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rhbFGF)单独或联合应用对骨髓基质细胞体外培养生物特性的影响。方法 :体外培养大鼠骨髓基质细胞 ,分别用特定浓度的rhBMP 2 (2 0 0 μg/L ,简称b )、rhTGF β1(5 μg/L ,简称t)和rhbFGF(1μg/L ,简称f)单独或联合作用 ,观察它们对骨髓基质细胞增殖的影响 ,进行细胞计数测定细胞生长曲线 ,计算细胞倍增时间 ,用四唑盐比色法 (MTT)法测定细胞增殖情况。结果 :细胞计数测定显示所有各组在第 3天细胞数增加 ,对照组、t组、f组、f +t组和f +t +b组第 4天进入平顶期 ,而b组和f +b组细胞仍保持较高的增殖活性 ,细胞倍增时间f +b组最短为 3 2h ,MTT法测定结果与细胞计数法相似 ,b组和f +b组与对照组相比细胞增殖有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 :生长因子rhbFGF(1μg/L)和rhBMP 2 (2 0 0 μg/L)结合使用可以促进骨髓基质细胞的增殖 。

rhBMP-2和rhTGF-β_1联合应用对人牙髓细胞增殖的影响

目的 :观察不同浓度的rhBMP - 2和rhTGF - β1单独或联合应用对体外培养人牙髓细胞增殖的影响。方法 :MTT法。结果 :rhBMP - 2对人牙髓细胞无增殖作用 ,rhTGF - β1在浓度为 1.0 μg/L时对人牙髓细胞有增殖效应。两者联合应用各浓度组对人牙髓细胞增殖无交互效应 (P >0 .0 5 )。结论 :rhBMP - 2和rhTGF- β1联合应用对人牙髓细胞增殖无叠加或抵消作用。

rhTGF-β_1对异常应力下兔颈椎间盘组织中蛋白多糖的影响

目的:探讨外源性重组人转化生长因子-β1(recombinant human transforming growth factor-β1,rhTGF-β1)对异常应力环境下兔椎间盘组织蛋白多糖(PG)的影响,寻找预防和延缓椎间盘退变的方法。方法:将24只日本大耳兔随机分为正常组、模型治疗组和模型组。按要求处理8周后,测出颈椎间盘C5/6组织蛋白多糖主要组成糖氨多糖(glycosaminoglycan,GAG)的量。结果:正常组、模型治疗组中GAG含量明显高于模型组(P<0.05);而正常组与模型治疗组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:椎间盘组织退变的早期,rhTGF-β1可以抑制颈椎间盘(intervertebral disc,IVD)组织GAG的含量降低,从而起到预防和延缓椎间盘退变的作用。

重组人转化生长因子β_1诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

用不同剂量的rhTGF－β1与人肝癌细胞SMMC－7721共同繁育不同时间后，用荧光显微镜进行形态学观察；提取细胞DNA经琼脂糖凝胶电泳分析电泳条带；用流式细胞仪分析细胞周期变化；用免疫组化法检测bcl－2、c－myc基因表达的变化。结果显示：细胞经rhTGF－β1作用后体积缩小、核染色质固缩或成碎片状；细胞DNA电泳呈典型的“阶梯状”条带；细胞周期分析显示rhTGF－β1先使SMMC－7721细胞停滞在G0／G1期，继而诱发细胞产生凋亡；免疫组化检测发现rhTGF－β1可下调bcl－2和c－myc蛋白的表达。研究表明：rhTGF－β1诱导人肝癌细胞凋亡与G0／G1期阻滞密切相关；bcl－2、c－myc基因产物的下调在rhTGF－β1诱导的细胞凋亡过程中可能起重要的调控作用。

SELEX技术筛选入rhTGF—βsRⅡ亲和核酸库方法的建立

目的建立SELEX技术筛选rhTGF-βsRⅡ单链DNA亲和核酸库的方法，为后续分离rhTGF-βsRⅡ的单一核酸适体奠定基础。方法体外构建了一个长度为108nt、含60个随机核苷酸序列的ssDNA随机库。将靶蛋白rhTGF-βsRⅡ预先吸附到固相栽体Phenyl-Agarose上，再与ssDNA随机库温育，洗脱未结合核酸片段，回收与rhTGF-βsRⅡ结合的ssDNA。行PCR扩增时，采用5’端生物素化的下游引物，使PCR产物偶联上生物素。变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化PCR产物。利用Immobilized Streptavidjrr-Agarose捕获dsDNA，0．15N的NaOH使双链变性，释放非生物素标记的ssDNA，回收后用于下一轮筛选。随着筛选的进行，严谨度不断增加。结果经过8轮筛选后，富集库对靶蛋白的亲和力从0.76％上升到17.18％。结论成功建立了SELEX技术筛选rhTGF-βsRⅡ亲和核酸库的方法。

外源性TGF-β1与PDGF-BB联合应用对正畸牙压力侧Pyk2蛋白和基因表达的影响

目的:探讨外源性生长因子-β1与外源性血小板衍生生长因子BB联合应用对牙周组织破骨细胞内Pyk2表达的影响.方法:160只SD大鼠随机分为2组,建立正畸牙移动模型.A组注射含rhTGF-β1与rhPDGF-BB的混合液0.1 mL,B组注射相同容量的PBS.加力后1、4、7、10、14 d,分别处死每大组的1小组大鼠.测量牙移动距离变化,TRAP染色行破骨细胞计数,Pyk2蛋白和基因水平分别用免疫组织化学染色法和RT-PCR检测.采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析.结果:2组牙移动距离在第4、7、10、14天均具有统计学差异(P<0.05).A组压力侧破骨细胞计数显著高于B组,除第14天外,其余各时间点均具有显著差异(P<0.05).A组Pyk2蛋白和基因表达均比B组高,2组均在第7天达到最高峰,除第1天外,其余时间点Pyk2蛋白表达均具有统计学差异(P<0.05).第4、7天,2组Pyk2基因表达均具有统计学差异(P<0.05).结论:外源性TGF-β1与PDGF-BB联合应用可从蛋白和分子水平上调正畸牙牙周组织压力侧Pyk2的表达,这可能是加速正畸牙移动速率的原因之一.

半枝莲黄酮对复合Aβ所致大鼠皮层细胞凋亡抑制作用及线粒体凋亡通路的调节机制

目的:探讨半枝莲黄酮(SBF)对淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)联合三氯化铝(AlCl3)和人类重组转移因子-β1(RHTGF-β1)(复合Aβ)所致大鼠皮层细胞凋亡及线粒体凋亡通路中细胞色素-C及其下游凋亡因子Apaf-1、Caspase-9和Caspase-3的调节机制。方法:雄性SD大鼠,脑室注射复合Aβ建立记忆障碍模型,术后第45天进行记忆障碍模型筛选,模型成功大鼠随机分为模型对照组和SBF35,70,140 mg·kg-1剂量组。SBF药物组大鼠连续灌胃给药36 d,模型和假手术组连续灌胃生理盐水36 d。吉姆萨染色(Giemsa)法检测皮层细胞凋亡情况;RT-PCR法检测皮层细胞胞液中细胞色素-C(Cyt-C)、凋亡蛋白酶激活因子-1(Apaf-1)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)mRNA水平;Western blotting检测皮层细胞胞液中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)蛋白水平。结果:大鼠脑室注射复合Aβ能够引起大鼠皮层细胞凋亡,伴随着胞液中Cyt-C、Apaf-1和Caspase-9 mRNA及Caspase-3蛋白表达的增加。而SBF可显著抑制复合Aβ所致大鼠皮层细胞凋亡、逆转胞液中Cyt-C、Apaf-1、Caspase-9和Caspase-3表达的增加(P<0.01)。结论:SBF通过减少线粒体对Cyt-C的释放及逆转Apaf-1、Caspase-9和Caspase-3的表达抑制复合Aβ所致大鼠皮层细胞凋亡。