可溶性GS-TrhTRAIL_(55-281)最佳表达条件及凋亡活性研究

将本室构建的重组质粒pGEX-5X-TRAIL55-281转入大肠杆菌JM109和HB101中,鉴定后诱导表达,然后针对培养温度、培养时间及诱导剂IPTG浓度设立梯度试验,发现重组质粒pGEX-5X-TRAIL在JM109与HB101中的表达情况相近,可溶性的人GSTr-hTRAIL55-281最佳表达条件为26℃,0.06mmol/L IPTG,200r/m in.利用亲和层析法纯化出大量可溶性GSTr-hTRAIL55-281后,通过Western Blot及流式细胞仪检测发现GSTr-hTRAIL55-281有较好的免疫学活性与生物学活性.为今后TRAIL作为抗肿瘤药物的开发做必要的准备.

重组蛋白rhTRAIL_(55-281)与GST-rhTRAIL_(55-281)有肝细胞毒性

目的:检测重组蛋白rhTRAIL55-281与GST- rhTRAIL55-281的对肝细胞的毒性,以确定其是否可以开发为抗肿瘤药物．方法:采用胰酶消化与机械分离结合的方法, 获取原代成人肝细胞和胎肝细胞．用Factor- Xa切除重组蛋白GST-rhTRAIL55-281的GST 标签获取rhTRAIL55-281蛋白,然后分别利用 rhTRAIL55-281与GST-rhTRAIL55-281干预肝细胞株L-02、原代成人肝细胞、原代胎肝细胞及对照组正常人外周血单个核细胞(PBMC),最后利用流式细胞仪检测细胞的凋亡率．结果:获得的原代成人肝细胞和胎肝细胞细胞活力达95％以上．无GST标签的 rhTRAIL55-281蛋白纯度达到97％;rhTRAIL55-281 与GST-rhTRAIL55-281使肝细胞株L-02及原代成人肝细胞、胎肝细胞大量凋亡．在10 mL／L 的浓度下,48 h后凋亡率分别为79．1％,72．8％, 42．2％与80．3％,74．7％,47．2％,而对照组正常人PBMC基本不凋亡．结论:重组蛋白rhTRAIL 55-281与GST- rhTRAIL55-28I有肝细胞毒性．