Alkaloid profiling of the traditional Chinese medicine Rhizoma corydalis using high performance liquid chromatography-tandem quadrupole time-of-flight mass spectrometry

Since alkaloids are the major active constituents of Rhizoma corydalis(RC),a convenient and accurate analytical method is needed for their identification and characterization.Here we report a method to profile the alkaloids in RC based on liquid chromatography-tandem quadrupole time-of-flight mass spectrometry(LC–Q-TOF-MS/MS).A total of 16 alkaloids belonging to four different classes were identified by comparison with authentic standards.The fragmentation pathway of each class of alkaloid was clarified and their differences were elucidated.Furthermore,based on an analysis of fragmentation pathways and alkaloid profiling,a rapid and accurate method for the identification of unknown alkaloids in RC is proposed.The method could also be useful for the quality control of RC.

土壤有效元素含量与延胡索(Corydalis yanhusuo)品质的相关性研究

延胡索乙素是相关延胡索(Corydalis yanhusuo)品质的重要化学成分,在中国药典中作为延胡索质量控制指标,分析不同产地延胡索中延胡索乙素含量与根际土壤有效性元素含量的相关性,对指导延胡索合理化种植栽培有重要科学意义。采用土壤农化法对不同产地延胡索根际土壤中10种元素(大量元素N、P、K、Ca、Mg;微量元素Zn、Mn、Fe、Cu、B)有效性含量进行了测定,同时采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)测定不同产地延胡索中延胡索乙素含量。结果表明:不同产地延胡索根际土壤中有效性元素含量存在显著性差异(P<0.05)。大量元素中,重庆市开县(S2)产地根际土壤有效磷、有效钙含量最高,浙江省东阳市(S4)产地根际土壤有效钾、有效镁含量最高;微量元素中,陕西省汉中市(S3)、浙江省磐安县(S5)产地根际土壤有效铁、有效铜含量显著高于其他产地。不同产地延胡索块茎中的延胡索乙素含量均达0.07%以上,高于药典中的限定标准。相关分析结果表明,延胡索乙素含量与有效钙含量存在极显著正相关(r=0.97,P<0.01),与有效铁存在显著负相关(r=-0.87,P<0.05),延胡索乙素含量主要受根际土壤有效钙含量影响。

延胡索传统炮制工艺与京帮炮制特色探析

本文探讨了延胡索传统炮制工艺与京帮炮制经验特色。采用文献考证与古法重现相结合的方法,发现古人在延胡索的产地加工、净制、切制、清炒、酒制、醋制、盐制、米制等方面积累了丰富的经验。京帮继承了传统的醋煮法,在添加醋的比例、加水量、煮制的时间与火候、切制方法等均有发挥,该法沿用至今,仍为业内主流的炮制方法,显示其强大的生命力。

延胡索通过靶向CXCL17激活AMPK信号通路下调PD-L1抑制EB病毒感染诱导的胃癌免疫逃逸

目的探讨延胡索对EB病毒(EBV)阳性胃癌细胞免疫逃逸的作用及其靶向CXCL17影响EBV阳性胃癌细胞免疫逃逸的机制。方法GEO2R在线分析软件筛选EBV阳性胃癌组织中的差异表达基因。采用EBV阴性胃癌AGS细胞和EBV阳性胃癌SUN-719细胞进行实验。实时qPCR和Western blotting检测EBV阴性和EBV阳性胃癌细胞中CXCL17表达。将CXCL17 siRNA转染EBV阳性胃癌细胞,Western blotting检测细胞PD-L1表达;将EBV阳性胃癌细胞与T细胞共培养,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。用延胡索提取物(2、4、8μg/mL)处理EBV阳性胃癌细胞,Western blotting检测细胞CXCL17和PD-L1表达;将EBV阳性胃癌细胞与T细胞共培养,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。将CXCL17过表达质粒转染延胡索提取物(8μg/mL)处理的EBV阳性胃癌细胞,Western blotting检测细胞PD-L1和p-AMPK表达;将EBV阳性胃癌细胞与T细胞共培养,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果CXCL17在EBV阳性胃癌组织和细胞中表达上调(P<0.05)。沉默CXCL17降低EBV阳性胃癌细胞PD-L1表达,抑制与T细胞共培养的EBV阳性胃癌细胞增殖并促进细胞凋亡(P<0.05)。延胡索处理降低EBV阳性胃癌细胞CXCL17和PD-L1表达,抑制与T细胞共培养的EBV阳性胃癌细胞增殖并促进细胞凋亡(P<0.05);过表达CXCL17逆转了延胡索处理对EBV阳性胃癌细胞PD-L1表达和细胞增殖的抑制作用及细胞凋亡的促进作用(P<0.05);过表达CXCL17还降低了延胡索处理的EBV阳性胃癌细胞p-AMPK表达(P<0.05)。结论CXCL17在EBV阳性胃癌细胞中表达上调,延胡索通过下调EBV阳性胃癌细胞CXCL17表达抑制胃癌细胞免疫逃逸,其机制可能与激活AMPK信号通路有关。

黄枫治疗腰痛用药规律的数据挖掘

【目的】利用数据挖掘方法分析黄枫教授治疗腰痛的用药规律。【方法】收集并筛选黄枫教授门诊治疗腰痛的有效病例的病案资料。采用Microsoft Excel 2019对纳入的处方药物进行用药频次及性味归经分布的分析,采用IBM SPSS Modeler 18.0进行关联规则分析,采用IBM Statistics 26.0进行聚类分析。【结果】共纳入239首处方,涉及75味中药。使用频次≥20次的高频中药有23味,居前10位的中药为甘草、醋延胡索、狗脊、白术、两面针、盐牛膝、生地黄、续断、薏苡仁、丹参。药性分布以温性药物占比最高,药味分布以甘、苦、辛为主,归经以归肝、胃、脾经为主。关联规则分析得到的支持度居前20位的药物组合中,醋延胡索、狗脊、白术、两面针为核心药物。聚类分析得到6个聚类组合。【结论】黄枫教授治疗腰痛以三因制宜、治病求本为原则,多采用活血行气止痛、滋补肝肾药物,兼顾益气健脾,其辨治腰痛的思路可为临床腰痛的治疗提供参考。

浙江道地延胡索优质品种性状及其生物碱含量研究

延胡索是我国传统中药材中的常用大宗药材之一,产地多且适应性强,其中浙江省为其主要的道地产区之一.延胡索生产中多采用自繁自种的无性繁殖,易产生种质退化等问题,导致其产量和品质良莠不齐.采用基因条形码ITS2序列检测技术、田间延胡索性状记录及高效液相色谱分析等技术,对浙江省3个主要品种来源的延胡索浙胡1号(YHS-1)、浙胡2号(YHS-2)和延胡索3号(农户自保种,YHS-3)进行延胡索的基源鉴定、田间性状分析和主要苄基异喹啉型生物碱的含量分析,以筛选浙江地区延胡索的优良品种.基源鉴定数据结果显示,YHS-2与延胡索Corydalis Yanhusuo W. T. Wang(NCBI编号MH260617.1和MH260618.1)的亲缘关系较近,YHS-3次之,而YHS-1亲缘关系较远.田间数据结果显示,与另外2个品种相比,YHS-2具有花多且密,花期短以及块茎产量高的优良生产性状.建立6种苄基异喹啉型生物碱的快速检测方法分析3个品种中生物碱的含量.结果显示,YHS-2中各生物碱的含量显著优于YHS-1和YHS-3(p<0.05).表明3个品种中YHS-2更为适合浙江地区的生存环境,可作为目前延胡索浙江栽培的优质品种推广种植和使用.

不同产地初加工方式对延胡索药材品质的影响

目的:考察不同加工方式对延胡索外观性状和内部成分的影响,筛选其合理的产地初加工方法。方法:采用晒干、阴干、冷冻干燥、热风干燥、远红外干燥及微波干燥法处理新鲜延胡索,HPLC法测定原阿片碱、海罂粟碱、延胡索乙素、延胡索甲素、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、去氢紫堇碱含量,色差仪测定粉末颜色,分析复水比、折干率、浸出物及外观性状。化学计量法综合评价各方法对药材品质的影响。结果:晒干延胡索外观性状最佳,生物碱含量较高,但耗时长;热风和远红外干燥耗时缩短,60℃干燥外观性状与晒干法接近,生物碱含量较高;微波干燥法耗时最短,生物碱含量最高;阴干法耗时最长,生物碱含量较低,性状差;冷冻干燥药材质轻、内部多孔松泡,生物碱总含量最低。结论:热风60℃干燥法可大幅度提高干燥效率,确保药材性状及成分含量,可用于延胡索规模化产地加工;微波干燥设备改进后应用前景广阔。

延胡索叶片愈伤组织诱导及其2种活性成分含量测定

目的:以叶片为外植体诱导延胡索(Corydalis yanhusuo)形成愈伤组织,测定愈伤组织生长指标,检测生物碱类成分含量,为研究延胡索生物碱代谢调控机制和培育优良品系提供依据。方法:运用2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)与6-苄基氨基嘌呤(6-BA)诱导形成愈伤组织,采用重量法测定生物量,组织化学染色法定位生物碱,高效液相色谱法测定延胡索乙素和脱氢紫堇碱含量。结果:延胡索叶片经MS+2 mg/L 2,4-D+1 mg/L 6-BA处理,愈伤组织诱导率可达75%;外观呈黄白色,表面呈颗粒状,生长迅速;继代培养的愈伤组织鲜重(2.7153±0.4398)g,增殖倍数4.43;干重(0.1552±0.0207)g,含水量94.16%。愈伤组织薄壁细胞内含能被碘化铋钾染色的橘黄色斑块,提示生物碱的存在;愈伤组织中延胡索乙素含量达(0.8600±0.3502)mg/g DW(干重),脱氢紫堇碱含量为(0.1744±0.0372)mg/g DW。结论:利用叶片作为外植体获得的延胡索愈伤组织诱导率高、生长迅速,是快速、稳定获取延胡索乙素等生物碱类活性成分的适宜材料。

田间机收元胡离散元模型参数标定与试验

为提高机收元胡所用离散元仿真模型参数准确性,通过物理试验与仿真试验结合的方法对元胡离散元参数进行标定。首先,采用物理试验确定元胡基本物性参数范围;其次,依据物理试验测定的参数范围进行休止角的显著性试验,得到对元胡休止角影响由大到小的顺序为元胡间滚动摩擦系数、元胡与钢板间滚动摩擦系数、元胡间碰撞恢复系数;再通过最陡爬坡试验缩小显著性参数取值范围,并通过响应面试验建立休止角与显著因素的最优二阶回归方程;以物理试验休止角为目标获取最佳参数组合:元胡间滚动摩擦系数0.08、元胡与钢板间滚动摩擦系数0.32、元胡间碰撞恢复系数0.49。最后,在对比标定模型参数下仿真堆积体与实际堆积体,测得二者的休止角和堆体外形轮廓无明显差异,表明该最佳参数组合可作为元胡机收过程中离散元仿真模型参数。

复方延胡索汤剂治疗急性心肌梗死合并恶性室性心律失常

目的:观察复方延胡索汤剂治疗早期急性心肌梗死合并恶性心律失常的临床疗效。方法:将106例早期急性心肌梗死合并恶性室性心律失常患者按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组各53例。对照组予以盐酸胺碘酮片治疗,观察组在对照组治疗的基础上给予复方延胡索汤剂治疗。比较两组患者的临床疗效、不良反应发生率及治疗前后中医证候积分、心肌酶谱指标[肌酸激酶同工酶-MB(creatine kinase isoenzymes,CK-MB)、N末端脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)、肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponinⅠ,cTnⅠ)]、血管内皮功能指标[一氧化氮(nitric oxide,NO)、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)、血管性假血友病因子(Von willebrand factor,vWF)]、心电图检查以及炎性因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-C reactive protein,hs-CRP)]变化情况。结果:观察组有效率为90.57%,对照组有效率为75.47%,两组患者有效率比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后中医证候积分、CK-MB、NT-proBNP、cTnⅠ、QT、Tp-Te、Tp-Te/QT、TNF-α、IL-6及hs-CRP水平低于本组治疗前,且治疗后观察组低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后NO高于本组治疗前,ET-1、vWF低于本组治疗前,且治疗后组间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:复方延胡索汤剂治疗早期急性心肌梗死合并恶性心律失常,可缓解患者的临床症状,有效减轻患者心肌缺血程度,改善其血管内皮功能,降低炎性因子水平。

硝英洗剂质量标准研究

目的 建立硝英洗剂的质量标准。方法 采用薄层色谱法(TLC)对硝英洗剂中的蒲公英、黄柏、延胡索进行定性鉴别;采用高效液相色谱(HPLC)法对硝英洗剂中黄柏的主要成分盐酸小檗碱进行含量测定。结果 TLC图谱显示,蒲公英、黄柏、延胡索的鉴别斑点清晰可辨,且阴性对照无干扰。盐酸小檗碱在0.0125~0.25μg浓度范围内线性关系良好(r=1,n=6),平均加样回收率为103.9%(RSD=4.0%,n=6)。结论 本研究建立的方法有效,适用于硝英洗剂的质量控制。

王济华运用角药治疗类风湿关节炎经验

王济华教授认为,类风湿关节炎早期多因外感风、寒、湿三邪,三者之间相互促进、互相转化,风寒表邪入里日久或郁而化热;病程日久多虚实夹杂,肝肾亏虚、气血不足,同时兼有寒湿痹阻、痰瘀互结。故王教授治疗痹证早期以祛邪散寒为主,兼顾清热利湿、化痰散结,中晚期则偏于滋养气血、补益肝肾。王济华教授运用角药治疗痹证颇有心得,组方精妙、配伍严谨,常用角药川芎-延胡索-白芍行气活血、柔筋止痛;忍冬藤-络石藤-青风藤清热通络、祛风除湿;半夏-陈皮-竹茹燥湿化痰、理气和中;白术-薏苡仁-茯苓益气健脾、利湿消肿;桑寄生-续断-杜仲滋补肝肾、强筋壮骨;酸枣仁-合欢皮-首乌藤宁心安神、解郁除烦。王教授临证时,追求阴阳调和平衡、气机升降有度,临床用药有药简力专、增效减负之功。

不同产地延胡索饮片炮制前后有效成分含量的测定

目的：比较不同产地延胡索生品和炮制品中延胡索乙素、含水量及醇溶性浸出物的含量。方法：将14批不同产地的延胡索生品，按照中国药典醋煮法进行炮制。采用高效液相色谱法测定生品和炮制品中延胡索乙素的含量，并对含水量及醇溶性浸出物的含量进行考察。结果：14批延胡索饮片生品的水分含量、醇溶性浸出物及延胡索乙素的含量分别在12．8％～14．8％、16．5％-19．6％和0．043％～0．075％；延胡索经醋煮后，水分含量、醇溶性浸出物及延胡索乙素的含量分别在7．58％-11．7％、17．8％-23．5％和0．046％～0．079％。结论：由于各地栽培延胡索土壤、气候等差异，不同产地延胡索炮制前后延胡索乙素、含水量及醇溶性浸出物的含量有所不同。

HPLC测定延胡索不同炮制品中延胡索乙素含量

目的 :比较炮制对延胡索中延胡索乙素含量的影响。方法 :采用高效液相色谱法 ,色谱柱为C1 8,流动相为 [甲醇 水(70∶30 ) ]∶磷酸缓冲液 (1 0 0∶1 .8) ,检测波长为 2 80nm。结果 :各样品中 ,以醋制品中延胡索乙素含量为高。加样回收率为 99.0 7% ,RSD为 1 .81 % ,相关系数r =0 .9998。结论

夏天无总碱中抗胆碱酯酶活性成分的研究

夏天无为罂粟科植物伏生紫堇Corydalis decumbens (Thunb.) Pers.的干燥块茎,是我国常用中草药,有活血通络、行气止痛之功效,用于中风偏瘫、跌打损伤、风湿性关节炎和坐骨神经痛等[1,2],现代药学研究认为其主要有效部位为生物碱[2,3].

苏元胡的生物碱成分研究

应用多种色谱方法从苏元胡Corydalis humosa Migo的块茎的乙醇提取物中分离得到6个化合物,它们的结构分别被鉴定为:四氢巴马汀(1)、药根碱(2)、小檗碱(3)、四氢小檗碱(4)、巴马汀(5)及(-)-四氢黄连碱(6).化合物1～3为从本植物中首次分离得到.

元胡中延胡索乙素的离子液体-毛细管电泳法测定

建立了以离子液体为电解质,测定元胡药材中延胡索乙素含量的毛细管电泳新方法。探讨了离子液体浓度、pH值、分离电压对分离效果的影响以及分离的机理。在以石英毛细管为分离柱,50 mmol/L 1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐（pH 7.1）为电泳介质,分离电压20 kV的条件下,延胡索乙素可与其它组分在5m in内完全分离。延胡索乙素的线性范围为31.25-500 mg/L,检出限为4.86 mg/L,回收率为95%-102%。

延胡索与全叶延胡索的红外光谱鉴别

目的：研究延胡索与全叶延胡索红外光谱的鉴别依据。方法：用统一的方法测定和比较了上述２种样品的石油醚、乙醚和水提取物的红外光谱。结果：这２种样品的红外光谱有明显而稳定的差异。结论：该光谱差异可以作为鉴别延胡索和全叶延胡索的根据。

延胡索乙素和延胡索炮制品提取物的药动学比较

目的:研究延胡索乙素、延胡索生品和醋炙品提取物在大鼠体内的药动学。方法:高效液相色谱法测定血浆中延胡索乙素的血药浓度,采用3p97药动学处理软件,计算药动学参数,CmaxTmax采用实测值。结果:延胡索乙素单体、延胡索药材生品和醋炙品T1/2为(5.66±1.92)、(4.24±1.54)、(4.35±1.34)h;Tmax为(1.5±0.5)、(1.0±0.55)、(0.5±0.68)h;Cmax为(0.71±0.29)、(0.37±0.11)、(0.67±0.35)μg/ml;AUCo-t为(2.58±0.85)、(1.96±0.69)、(2.95±1.61)μg/ml。结论:延胡索生品和醋炙品均能缩短延胡索乙素的达峰时间,说明其两者能起效迅速。

不同采收期和不同加工方法对延胡索药材的影响

目的:优选出延胡索药材的最佳采收期和最佳产地加工方法。方法:以延胡索乙素和折干率为主要指标,采用HPLC法测定不同采收期和不同加工方法样品中的延胡索乙素含量。C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺调pH至6.0)(58∶42),流速为1.0 mL/min,紫外检测波长为280 nm。结果:不同采收期对延胡索乙素含量的影响差异不大,5月21日采收折干率最高;蒸制法加工的延胡索药材中延胡索乙素含量最高,达到0.11%。结论:延胡索药材以地上部分植株全部枯萎后10 d左右采收为好,产地加工方法以蒸制为好。