磁共振T1rho序列、T2 mapping技术在膝关节早期软骨退变早期诊断中的评估价值

目的探讨磁共振T1rho序列、T2 mapping技术在膝关节早期软骨退变早期诊断中的评估价值。方法选取2020年1月至2022年11月在我院治疗的110例膝关节早期软骨退变患者(观察组),按照疾病严重程度分为轻度退变组及重度退变组,另选取同期在我院进行体检的64例健康者为对照组,受试者均行磁共振T1rho序列、T2 mapping技术扫描,测量受试者T2值及T1ρ值,探讨磁共振T1rho序列、T2 mapping技术在膝关节早期软骨退变早期诊断中的评估价值。结果观察组股骨外侧面、股骨内侧面、胫骨外侧面、胫骨内侧面、髋骨面T2值均明显高于对照组(P<0.05),重度退变亚组患者股骨外侧面、股骨内侧面、胫骨外侧面、胫骨内侧面、髋骨面T2值显著高于轻度退变者(P<0.05);观察组股骨内踝负重区、股骨内踝非负重区、股骨外踝负重区、股骨外踝非负重区、胫骨外侧平台区、胫骨内侧平台区、髌后软骨区磁共振T1ρ值明显高于对照组(P<0.05),重度退变亚组患者股骨内踝负重区、股骨内踝非负重区、股骨外踝负重区、股骨外踝非负重区、胫骨外侧平台区、胫骨内侧平台区、髌后软骨区磁共振T1ρ值明显高于轻度退变亚组患者(P<0.05);磁共振T1rho序列在膝关节早期软骨退变中早期诊断及严重程度评估中的的诊断ROC值及特异度明显高于T2 mapping技术(P<0.05),但后者具有更高的敏感度(P<0.05)。结论磁共振T1rho序列、T2 mapping技术均能有效反映膝关节早期软骨退变中软骨组织学成分变化情况,还可为膝关节软骨退变严重程度评估提供客观依据,二者具有一定互补价值。

Rho A-Rock 1信号通路对传染性脾肾坏死病毒感染的调控及作用

【目的】探究传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)复制增殖与Rho A-Rock 1通路的关系。【方法】采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ISKNV感染CPB细胞12,24,48,72和96 h后病毒DNA拷贝数的变化;同时采用RT-qPCR和蛋白免疫印迹方法检测病毒感染CPB细胞12,24,48和72 h后Rho A与Rock 1转录及蛋白表达水平的变化;通过Rho A抑制剂(CCG-1423和Rhosin)、Rock 1抑制剂(Thiazovivin和Y-27632)及siRNA抑制Rho A-Rock 1通路,研究Rho A-Rock 1通路抑制对ISKNV复制增殖的影响。【结果】ISKNV感染12~48 h,病毒的DNA拷贝数无显著变化,感染72 h病毒DNA拷贝数显著上升,感染96 h病毒的拷贝数上升变缓,说明ISKNV感染72 h时病毒正处于复制增殖的高峰期。RT-qPCR及蛋白免疫印迹结果表明,ISKNV感染72 h时,Rho A和Rock 1 mRNA转录水平和蛋白水平均显著上调。Rho A抑制剂Rhosin和CCG-1423及Rock 1抑制剂Y-27632和Thiazovivin均可使ISKNV基因组拷贝数和病变的CPB细胞数显著下调;利用siRNA敲降Rho A和Rock 1时,ISKNV的基因组拷贝数也显著下调。【结论】Rho A-Rock 1信号通路可正调控ISKNV的感染,抑制Rho A-Rock 1通路可显著抑制ISKNV复制增殖。

生物钟基因BMAL1通过促进ROCK1调控滋养层细胞功能障碍的研究

目的 分析生物钟基因脑和肌肉组织芳香烃受体核转运蛋白类似蛋白1(BMAL1)对Ras同源物基因组成员A(RhoA)/Rho相关激酶1(ROCK1)信号通路的影响以及对滋养层细胞生物学功能的调控机制。方法 选择滋养层细胞系JEG3细胞,根据转染BMAL1过表达质粒以及添加1μmol/L、2μmol/L、5μmol/L ROCK1抑制剂Y27632,分为对照组、BMAL1组、BMAL1+1μmol/L Y27632组、BMAL1+2μmol/L Y27632组、BMAL1+5μmol/L Y27632组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BMAL1、RhoA、ROCK1以及上皮-间充质转化(EMT)标记物N-cadherin、Vimentin和转录因子Snail、Slug的mRNA表达水平;Western blot检测蛋白表达水平;CCK8法检测细胞的增殖活力;流式细胞术分别检测细胞周期、凋亡以及胞内活性氧(ROS)水平。结果 JEG3细胞过表达BMAL1后,与对照组相比,ROCK1 mRNA表达显著增加(P<0.01),RhoA mRNA表达增加但差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,BMAL1组N-cadherin、Vimentin、Snail的mRNA表达水平显著增加(P<0.01)。在蛋白水平,BMAL1组ROCK1、RhoA及Snail蛋白表达较对照组显著增加(P<0.05),Y27632处理可以显著降低Vimentin及Snail蛋白表达(P<0.05)。此外,与对照组相比,BMAL1组细胞活力显著增加(P<0.001),BMAL1+Y27632各浓度组较BMAL1组细胞活力显著降低(P<0.01)。流式细胞术结果显示,与对照组相比,BMAL1组细胞周期由G0/G1期向S+G2/M期转化,细胞总凋亡率有降低趋势但差异无统计学意义(P>0.05),胞内ROS水平显著降低(P<0.01);与BMAL1组相比,BMAL1+1μmol/L Y27632组和BMAL1+2μmol/L Y27632组细胞早期凋亡率及总凋亡率显著增加(P<0.05),BMAL1+1μmol/L Y27632组细胞ROS平均荧光强度增加但差异无统计学意义(P>0.05),BMAL1+2μmol/L Y27632组细胞ROS平均荧光强度较BMAL1组显著增加(P<0.001)。结论 生物钟基因BMAL1通过促进ROCK1表达参与调控滋养层细胞增殖、DNA合成、凋亡及氧化应激水平。

沙蟾毒精激活Rho A/ROCK1信号通路诱导急性白血病细胞凋亡的分子机制研究

目的研究沙蟾毒精(arenobufagin,ARE)对急性白血病细胞的凋亡诱导作用及可能的分子机制。方法急性白血病细胞Jurkat和MV-4-11经不同浓度(0、10、20、40、80 nmol/L)ARE作用24 h,80 nmol/L ARE作用不同时间(0、6、12、18、24 h)或ROCK1抑制剂Y-27632(20μmon/L)预处理1 h后80 nmol/L ARE作用24 h,采用MTT检测ARE抑制急性白血病细胞增殖的能力;采用流式细胞术检测ARE诱导急性白血病细胞凋亡的能力;采用Western blot和CoIP实验检测急性白血病细胞经ARE作用后细胞中凋亡相关蛋白和Rho A/ROCK1信号通路相关蛋白的变化情况。结果ARE对Jurkat和MV-4-11细胞的抑制增殖作用呈剂量依赖性和时间依赖性(P<0.01),对Jurkat和MV-4-11细胞凋亡诱导作用亦呈剂量和时间依赖性(P<0.01);Western blot检测结果显示:ARE可激活ROCK1信号通路,促进BAX移位至线粒体,Cytochrome c(Cyto c)和AIF由线粒体释放入细胞质,增加Caspase 3和Caspase 7剪切激活,增加PARP1剪切,并减少XIAP表达,其上述作用具有剂量依赖性和时间依赖性(P<0.01);使用Y-27632抑制ROCK1信号通路可明显阻断ARE诱导的BAX移位至线粒体、Cyto c和AIF向细胞质的释放、Caspase 3和Caspase 7的剪切激活、PARP1的剪切、XIAP表达的下调以及细胞凋亡(P<0.01)。结论ARE通过激活Rho A/ROCK1信号通路有效诱导急性白血病细胞(Jurkat、MV-4-11)发生凋亡。

白介素-1β诱导小型猪冠状动脉内膜增殖时Rho激酶表达与通心络干预的研究

目的观察白介素-1β(IL-1β)诱导小型猪冠状动脉内膜增殖时Rho激酶和MCP-1 mRNA表达与通心络干预作用。方法24头小型猪随机分为假手术组(n=8)、模型组(n=8)和通心络组(n=8)。假手术组和模型组喂养普通饲料,通心络组喂养普通饲料+通心络[1g/(kg·d)]。2周后麻醉、左侧开胸手术,选择左前降支及回旋支近端管腔外径近似相同的两处节段进行仔细分离,假手术组在血管外膜包裹吸附生理盐水纸巾,模型组和通心络组包裹吸附白细胞介素-1β(2.5μg)纸巾,术后继续以上喂养方法。2周后采用冠状动脉造影观察各组管腔狭窄情况。造影结束后处死动物,截取包裹血管段,进行病理学检查,并采用RT-PCR方法,测定各组手术处理血管段Rho激酶、MCP-1 mRNA的表达。结果冠状动脉造影显示,模型组冠脉管腔20%～30%狭窄,病理学检查可见模型组内膜增殖、炎性细胞浸润,平滑肌细胞内膜下迁移。通心络组管腔狭窄程度、内膜增埴及炎性细胞浸润现象较模型组明显减轻。通心络组Rho激酶、MCP-1 mRNA表达强度低于模型组(P<0.05)。结论IL-1β诱导冠状动脉内膜增殖时Rho激酶和MCP-1表达明显增强,通心络抑制其表达可能是其抑制冠状动脉内膜增殖和炎症反应的重要机制之一。

肝脏T1rho MRI扫描优化及对肝纤维化的诊断价值初探

目的:探讨3.0T肝脏T1rho MRI最简自旋锁定时间(SLT)扫描方案及用于诊断肝纤维化的可行性。方法:前瞻性搜集20例正常志愿者(正常组)和20例慢性肝病且临床疑诊为肝纤维化者(肝纤维化组),均行肝脏T1rho MRI扫描。自旋锁定脉冲设定为500Hz,SLT为1、10、20、30、40和50ms。扫描结束后分别采用所有6-SLT(1、10、20、30、40和50ms)和5种简化SLT组合,即最大SLT为40ms的5-SLT(1、10、20、30、和40ms)、最大SLT为50ms的3-SLT(1、10、50ms;1、20、50ms;1、30、50ms;1、40、50ms),生成T1rho mapping。通过兴趣区(ROI)放置法测量各组合肝脏的T1rho值。采用配对样本t检验比较各简化SLT组合与6-SLT所测肝脏T1rho值的差异;采用Bland-Altman法分析各简化SLT组合与6-SLT所测肝脏T1rho值的一致性。采用ROC曲线分析6-SLT与简化SLT组合对肝纤维化诊断效能的差异。结果:正常组、肝纤维化组6-SLT和5种简化SLT组合所测肝脏T1rho值分别为(44.86±2.65)ms vs(53.01±5.79)ms、(43.07±3.15)ms vs(50.90±5.62)ms、(45.24±2.62)ms vs(53.22±5.25)ms、(45.11±2.53)ms vs(53.85±5.13)ms、(45.11±2.60)ms vs(52.80±5.53)ms和(45.22±2.64)ms vs(53.68±5.78)ms,两组间的差异均有统计学意义(P值均<0.001),用于诊断肝纤维化的曲线下面积(AUC)分别为0.910、0.895、0.910、0.933、0.917和0.923;5种简化SLT组合与6-SLT相比,诊断效能差异均无统计学意义(P值均>0.05)。其中正常组和肝纤维化组最大SLT为50ms的3-SLT所测肝脏T1rho值与6-SLT差异均无统计学意义(P>0.05),最大SLT为40ms的5-SLT所测肝脏T1rho值与6-SLT差异有统计学意义(P<0.01)。Bland-Altman分析结果显示所有3-SLT组合与6-SLT差值的散点分布在正常组和肝纤维化组中均较集中,且3-SLT(1、10、50ms)组合的差值和95%一致性区间最小,分别为-0.37(-2.12～1.37)、-0.2(-3.7-3.3)。结论:3-SLT和5-SLT均能简化6-SLT(1～50ms)以测量肝脏T1rho值,可用于诊断肝纤维化,且最大SLT为50ms的3-SLT测量的肝脏T1rho值与6-SLT(1～50ms)差异无统计学意义,其中3-SLT(1、10、50ms)组合的测量变异度最小。

Rho激酶-1在变应性鼻炎小鼠上下呼吸道表达特点及布地奈德的干预作用

目的观察Rho激酶-1在变应性鼻炎上下呼吸道表达特点及布地奈德对其表达影响,探讨Rho激酶-1在变应性鼻炎上下呼吸道炎症反应中的作用。方法应用卵清蛋白致敏建立小鼠变应性鼻炎模型,30只小鼠随机分为:变应性鼻炎组,布地奈德组和正常对照组。所有小鼠于末次激发后24小时处死,收集鼻腔灌洗液和肺泡灌洗液查炎症细胞计数,应用免疫组化方法检测鼻黏膜和肺组织中Rho激酶-1蛋白表达。结果变应性鼻炎组鼻黏膜和肺组织内Rho激酶-1蛋白阳性表达水平显著高于正常对照组(P<0.05)。变应性鼻炎组小鼠鼻腔灌洗液和肺泡灌洗液中以炎症细胞总数和嗜酸粒细胞增加明显(P<0.05)。应用布地奈德干预治疗后,小鼠鼻黏膜和肺组织内Rho激酶-1蛋白阳性表达较变应性鼻炎组水平降低,小鼠鼻腔灌洗液和肺泡灌洗液中以炎症细胞总数和嗜酸粒细胞数较变应性鼻炎组减少。Rho激酶-1蛋白表达与炎症细胞和嗜酸粒细胞数呈正相关(P<0.01)。结论 Rho激酶-1蛋白参与变应性鼻炎上下呼吸道炎症反应过程,布地奈德可通过调节Rho激酶-1的表达减轻炎症反应。

Rho A蛋白通路在DLC-1基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制

目的:探讨Rho A蛋白通路在DLC-1(frequently deleted in liver cancer-1)基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制。方法:构建pcDNA3.1-DLC1质粒载体,脂质体法转染HT29细胞,筛选稳定细胞系;pull-down方法分析Rho A蛋白活性;实时定量PCR检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、p21的表达变化;流式细胞仪检测细胞周期分布。结果:野生型人结肠癌HT29细胞DLC-1基因表达呈阴性,经转染获得DLC-1稳定表达细胞系。与野生型及空载组HT29细胞相比,转染组细胞RhoA蛋白活性下降;Cyclin D1表达下调,p21表达上调;G1期及凋亡细胞数增加,而G2期细胞数下降。结论:转染DLC-1基因引起人结肠癌HT29细胞Rho A蛋白活性下调,进而可能通过对Cyclin D1、p21表达的调控使细胞周期G1期阻滞并诱导凋亡,同时分裂前期细胞数减少,细胞增殖受抑。

冠状动脉介入患者围手术期血清Rho激酶-1变化分析

目的评价接受冠状动脉介入术(PCI)患者血清Rho激酶-1(ROCK-1)围术期水平的变化情况。方法纳入接受PCI的患者84例,其中急诊PCI组28例,择期PCI组56例;另纳入有不典型心绞痛症状但冠脉造影正常者24例作为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定各组PCI术前、PCI术后4h/1d/4d患者血清ROCK-1、hs-CRP和TNF-α水平。结果急诊PCI组患者术前血清ROCK-1、hs-CRP和TNF-α表达均高于择期PCI组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);择期PCI组患者术前血清ROCK-1、hs-CRP和TNF-α表达浓度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。急诊PCI组和择期PCI组患者在接受PCI手术治疗后的三种炎性因子表达均增加,以急诊PCI更为明显,但术后1d急诊PCI组的炎症因子表达即明显回落,水平低于择期PCI组。对照组在冠脉造影前后三种炎症因子表达无统计学差异(P>0.05)。结论介入治疗可导致机体ROCK-1、hs-CRP和TNF-α水平一过性升高,且病变范围越广则炎症反应水平越高。

Rho激酶抑制剂法舒地尔对肺动脉高压大鼠内皮素-1水平的干预研究

目的探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对肺动脉高压(PH)大鼠内皮素-1水平的干预作用。方法 32只成年Wistar大鼠均分为对照3周组(C3)、PH模型3周组(P3)、6周组(P6)及干预组(F组)。予野百合碱建模,第22日始F组予法舒地尔腹腔内注射干预。C3、P3、P6、F组大鼠分别于造模后3、6周末测定大鼠右心室收缩压(RVSP)、血浆内皮素-1(ET-1)水平,观察肺小动脉病理。结果①C3、P3、P6、F组大鼠RVSP分别为(31.2±7.6)、(43.3±8.3)、(56.9±6.9)、(47.3±6.3)mmHg。血浆ET-1分别为(1.09±0.39)、(1.83±0.29)、(2.34±0.65)、(1.90±0.33)ng.mL-1;②造模后大鼠RVSP、ET-1随时间延长而升高,法舒地尔干预后上述指标明显下降。③造模后肺小动脉平滑肌增殖,管腔狭窄,F组较P6组管腔明显增大,增殖减轻;④RVSP与ET-1存在明显正相关(r=0.721,P<0.01)。结论 Rho激酶抑制剂法舒地尔能显著降低PH大鼠血浆ET-1水平,有效降低肺动脉压力。

Rho激酶信号通路参与ET-1诱导的人气道平滑肌细胞迁移和细胞骨架的变化

目的研究Rho激酶信号通路在内皮素-1(ET-1)诱导的人气道平滑肌细胞(ASMCs)迁移及细胞骨架变化中的作用。方法组织块贴壁法培养人ASMCs,改良的Boyden小室检测ASMCs的迁移能力;激光共聚焦扫描显微镜观察细胞骨架的变化;Western blotting检测ET-1刺激不同时间后Rho激酶底物肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1(MYPT1)的磷酸化水平。结果ET-1在0.1、1、10、100nmol/L浓度具有趋化ASMCs的迁移能力,10nmol/L的ET-1趋化ASMCs迁移的能力最强(与对照组相比,P<0.01)。Rho激酶抑制剂Y-27632可浓度依赖性地抑制ET-1趋化的ASMCs跨膜迁移,与ET-1组相比,10μmol/L的Y-27632显著抑制了ASMCs迁移(P<0.01);ET-1(10nmol/L)刺激后ASMCs细胞骨架和形态改变,伪足生成,应力纤维形成增多,Y-27632可显著抑制ET-1诱导的上述改变;ET-1刺激15、30min后p-MYPT1表达显著增高(与对照组相比,P<0.01),随着刺激时间的延长,p-MYPT1表达下降(P>0.05)。结论Rho激酶信号通路在ET-1诱导的ASMCs迁移和细胞骨架变化中发挥重要的作用。

miR-153-3p靶向下调Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)基因抑制乳腺癌细胞增殖及迁移

目的探究miR-153-3p调节乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭的分子机制。方法利用生物信息学软件检索预测miR-153-3p的候选靶基因;采用双荧光素酶报告实验分析miR-153-3p与候选基因的靶向关系;应用实时荧光定量PCR和Western blot法检测miR-153-3p对MDA-MB-231细胞mRNA和蛋白质表达水平的影响;通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,并以TranswellTM检测细胞的迁移和侵袭能力。结果软件预测显示miR-153-3p与Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)有连续的结合区域;共转染miR-153-3p模拟物(miR-153-3p mimics)与ROCK1野生型报告载体的细胞相对荧光素酶活性降低;转染hsa-miR-153-3p-mimics后,MDA-MB-231细胞的miR-153-3p表达水平显著增高,且ROCK1蛋白的表达量明显降低。与对照组相比,转染组MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力均减弱。结论miR-153-3p通过靶向下调ROCK1的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

养心颗粒对易损斑块Rho/Rho激酶信号通路血清LDL-C、TC、ET-1、TNF-α含量的影响

目的:观察养心颗粒对易损斑块Rho/Rho激酶信号通路血清LDL-C、TC、ET-1、TNF-α含量的影响。方法:随机将32只雄性家兔分为空白对照组、模型对照组、养心颗粒组、法舒地尔组。分别给予普通饲料及高脂饮食喂养8周,采用球囊损伤颈总动脉并注射P53基因转染建立易损斑块模型。药物治疗2周后采用ELISA法检测LDL-C、TC、ET-1、TNF-α水平。结果:与模型组比较,养心颗粒组和法舒地尔组血清中LDL-C、TC、ET-1、TNF-α含量下降(P <0. 05);养心颗粒组与法舒地尔组比较,血清中LDL-C,TC、ET-1、TNF-α含量,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论:养心颗粒可降低易损斑块Rho/Rho激酶信号通路血清中LDL-C、TC、ET-1、TNF-α的含量。

酿酒酵母rho1活性突变细胞株的构建

酿酒酵母CWI信号途径中,包含了一个与细胞表面感受器配对的小G蛋白家族,叫做RHO1.作者采用定点突变的方法,构建了rho1活性突变细胞株,为进一步研究Rho1功能奠定了基础.

过量维甲酸对小鼠胚胎神经管RhoA和Rac1表达的影响

目的:探讨过量维甲酸(RA)对小鼠胚胎神经管Rho A、Rac 1蛋白表达的影响.方法:应用免疫组织化学染色和图像分析方法检测Rho A、Rac 1蛋白的表达,分析在正常对照组和实验组小鼠胚胎神经管上皮的分布状况和表达水平的变化.结果:在各正常对照组和实验组,Rho A在神经管腔面、神经上皮细胞的细胞膜以及胞质均呈不同程度的阳性着色;比较有趣的是,在两侧神经褶靠拢的部位,Rho A的表达水平较神经管其它部位要强.统计学显示:Rho A在正常神经管的表达有时间依赖性;而且与正常对照组相比,其在实验组的表达水平明显高于正常对照组.在正常对照组,Rac 1的表达随着孕龄的增加在减弱;在各实验组,Rac1的表达都是阴性的.结论:过量RA会导致胚胎神经管Rho A和Rac1的表达异常,这两种蛋白与过量维甲酸致神经管畸形有关.

磁共振T_1rho成像技术对膝关节骨性关节炎半月板损伤的定量研究

目的通过对膝关节骨性关节炎半月板损伤患者进行分析,采用T1rho成像技术进行定量研究。方法通过选取在本次研究中的膝关节骨损伤性关节炎患者60例,采用MRI扫描仪进行应用,并采用标准膝关节线圈行矢位扫描。在矢状位T1rho序列对于扫描应以一次扫描完成,随后生成T1rho彩图,并进行图像分析。结果通过对T1rho序列半月板相关stoller分级和弛豫时间比较,其中正常患者个数为20个,T1rho均值为22.03 ms,标准差为3.04 ms。Ⅰ级患者个数为12个,T1rho均值为23.56 ms,标准差为2.68 ms。Ⅱ级患者个数为15个,T1rho均值为26.80 ms,标准差为1.46 ms。Ⅲ级患者个数为13个,T1rho均值为30.24 ms,标准差为2.69 ms;通过对半月板不同分级之间T1rho差异检验,其中正常患者T1rho分级中I度和正常患者差异性为0.001,Ⅰ度和正常患者差异为0.001,Ⅱ度和Ⅰ度患者差异为0.003,Ⅲ度和正常患者差异为0.000。结论T1rho抽持续时间随半月板损伤程度加重,则升高表现和关节软骨类似,通过对膝关节骨性关节炎患者半月板损伤进行相关研究其具有一定意义。

艾塞那肽通过SDF-1/CXCR-4/Rho GTPase通路增强脂肪来源间充质干细胞的趋化性迁移

目的探究艾塞那肽对脂肪来源间充质干细胞(ADSCs)迁移的影响,并证实Rho GTPase为SDF-1/CXCR-4迁移通路的下游效应蛋白。方法分离并培养大鼠来源ADSCs并通过流式细胞术及体外诱导分化鉴定。应用RTCA x CELLigence系统检测艾塞那肽对ADSCs增殖能力的影响。Transwell观察不同浓度艾塞那肽,AMD3100(CXCR-4阻断剂),CCG-1423(Rho GTPase阻断剂)处理对ADSCs趋化性迁移能力的影响。流式细胞术及Western blot技术分别检测不同艾塞那肽浓度处理组细胞CXCR-4蛋白表达水平。活化的Rho蛋白pull-down检测试剂盒检测艾塞那肽处理组和AMD3100阻断组Rho GTPase表达情况。激光共聚焦显微镜观察不同处理组细胞应力纤维形成情况。结果 RTCA x CELLigence系统提示艾塞那肽处理24h内对ADSCs的增殖能力无明显影响。艾塞那肽呈浓度依赖性的增加ADSCs的趋化性迁移能力,AMD3100及CCG-1423可阻断这种效应(P<0.05)。流式细胞术及Western blotting结果都表明CXCR-4蛋白随艾塞那肽处理浓度升高而表达上调。此外,Western blot实验证实Rho GTPase的表达受SDF-1/CXCR-4通路影响。共聚焦显微镜观察到应力纤维的形成与SDF-1/CXCR-4/Rho GTPase通路相关。结论艾塞那肽能增强ADSCs的趋化性迁移能力,Rho GTPase为SDF-1/CXCR-4经典归巢通路的下游效应蛋白。

Rho/ROCK信号通路在HIV-1 Tat诱导血脑屏障破坏及β淀粉样蛋白沉积中的作用

目的探讨Rho/ROCK信号传导通路在人类免疫缺陷病毒-1型反式转录激活因子(HIV-1 transactivator of transcription,HIV-1 Tat)诱导血脑屏障破坏及对β淀粉样蛋白(Amyloid-beta,Aβ)沉积中的作用。方法将培养的人脑微血管内皮细胞(human cerebral microvascular endothelial cells,h CMEC/D3)予以不同浓度的Rho/ROCK信号传导通路抑制剂盐酸法舒地尔(Hydroxyfasudil,HF)刺激细胞,并设立对照组,观察其对细胞活力的影响,分别予以HIV-1 Tat、HF刺激细胞,以蛋白免疫印迹法和实时反转录聚合酶链式反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测h CMEC/D3中紧密连接蛋白Occludin、晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE,转移血液Aβ到脑组织)的蛋白和mRNA表达的变化。结果 HF在30μmol/L(0.17±0.02)以下时对h CMEC/D3活力无明显影响(P>0.05)。HIV-1 Tat能抑制h CMEC/D3的Occludin蛋白(0.71±0.03、P<0.001)与mRNA(0.41±0.05、P<0.05)表达,同时上调RAGE蛋白(0.83±0.01、P<0.001)和mRNA(1.93±0.66、P<0.05)表达。HF预处理细胞2 h后与HIV-1 Tat共培养可以显著增加Occludin蛋白与mRNA的表达(0.93±0.03、P<0.001;1.04±0.45、P<0.05),同时可以明显减少RAGE蛋白与mRNA的表达(0.54±0.01、P<0.001,1.08±0.43、P<0.05)。结论 HIV-1 Tat可使紧密连接蛋白Occludin蛋白和mRNA表达下调导致血脑屏障破坏,诱导Aβ转运受体RAGE的蛋白和mRNA过度表达,从而可能导致Aβ在脑内沉积增加;阻断Rho/ROCK信号传导通路可抑制HIV-1 Tat诱导血脑屏障破坏作用,阻止RAGE蛋白和mRNA的过度表达。

Rho激酶抑制剂对急性冠脉综合征患者MCP-1、hs-CRP和MMP-2水平的影响

目的:观察法舒地尔对急性冠脉综合征(ACS)患者外周血MCP-1、hs-CRP和MMP-2水平的影响,探讨Rho激酶抑制剂对ACS患者斑块的稳定作用。方法:选择未行介入治疗的ACS患者82例,稳定型心绞痛(SAP)患者20例及正常对照组20例。ACS患者随机分为常规治疗组和法舒地尔治疗组,治疗14 d,比较各组及ACS患者治疗前、后外周血MCP-1、hsCRP和MMP-2水平的差异。结果:ACS组患者MCP-1、hs-CRP及MMP-2水平明显高于SAP组及正常对照组(P<0.01);ACS患者治疗14 d后,同常规治疗组相比,法舒地尔组MCP-1、hs-CRP及MMP-2水平显著降低(P<0.01)。结论:法舒地尔能够降低ACS患者血MCP-1、hs-CRP及MMP-2水平,发挥稳定粥样斑块的作用。

小鼠胚胎神经管发育过程中Rho A和Rac 1的表达及其意义

目的探讨Rho A、Rac 1在小鼠胚胎神经管发育过程中的作用及意义。方法应用免疫组织化学染色和图像分析方法,检测Rho A、Rac 1蛋白的表达,分析在不同胎龄小鼠胚胎神经管上皮及其周围间充质的分布状况和变化规律。结果在小鼠胚胎神经管发育过程中,Rho A在胚胎神经管上皮及其周围间充质都有表达;Rac 1仅在孕7.5 d和8.5 d小鼠胚胎神经管腔面表达,而在孕9.5 d和10.5 d,Rac 1表达是阴性的。RhoA和Rac 1的表达都呈现规律性变化:Rho A在整个神经管发育过程中呈现逐渐下降的趋势;Rac 1仅在神经管关闭期间表达,神经管关闭后,Rac 1的表达呈阴性。结论 Rho A和Rac 1直接或间接参与了小鼠胚胎神经管形态构建过程,并且在神经管关闭期间起着重要的调节作用。