UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究

目的探讨尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)/miR-122-5p/pcDNA-胞质多聚腺苷酸元件结合蛋白1(CPEB1)轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究。方法通过实时荧光反转录定量PCR(RT-qPCR)检测UCA1相关miRNA分子,并通过细胞转染获得miR-122-5p和CPEB1相关细胞株。通过双荧光素酶报告实验分别验证UCA1与miR-122-5p、CPEB1与miR-122-5p的结合。药物敏感性实验获得顺铂药物半抑制浓度(IC50);通过肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析CPEB1在肺腺癌中的表达情况以及与免疫细胞功能的关系。结果miR-122-5p在肺腺癌细胞中的表达水平明显升高,并通过双荧光素酶报告实验以验证UCA1与miR-122-5p结合,构建miR-122-5p抑制物和模拟物转染肺腺癌细胞株,发现miR-122-5p抑制后,顺铂IC50浓度下降,而miR-122-5p过表达后,顺铂IC50浓度升高。CPEB1在肺腺癌细胞中的表达水平明显降低,双荧光素酶报告实验证实CPEB1是与miR-122-5p结合,CPEB1过表达后,顺铂IC50浓度减低;对TCGA数据库分析显示肺腺癌组织CPEB1 mRNA明显低于癌旁组织,ROC曲线分析显示CPEB1表达水平能较好地用于诊断肺腺癌(AUC=0.849),进一步分析显示CPEB1表达水平与肺腺癌患者的细胞功能如T细胞、B细胞、CD8+T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞、肥大细胞存在密切关联。结论UCA1与miR-122-5p存在结合位点,后者可影响肺腺癌的顺铂耐药,并与靶基因CPEB1结合;肺腺癌中CPEB1呈低表达,降低肺腺癌顺铂药物的敏感性。UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴有望为干预肺腺癌顺铂耐药的靶点。

妊娠期肝病患者外周血25(OH)D_(3)、HMGB1、miR-122表达与凝血功能的相关性

目的 探讨妊娠期肝病患者外周血25-羟基维生素D_(3)[25-hydroxy vitamin D_(3),25(OH)D_(3)]、高迁移率蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)、微小RNA-122(microRNA-122,miR-122)表达与凝血功能的相关性。方法 选取2019年2月至2021年2月东营区人民医院收治的78例妊娠期肝病患者作为研究组,另选取同期78例健康孕妇作为对照组。比较两组25(OH)D_(3)、HMGB1、miR-122、凝血酶原时间(prothombin time,PT)、活化部分凝血活酶时间(activited partial thomboplastin time,APTT)、纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,GGT)水平,分析25(OH)D_(3)、HMGB1、miR-122与凝血功能指标的相关性,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评价25(OH)D_(3)、HMGB1、miR-122与凝血功能指标对妊娠期肝病的评估价值,比较两组患者的妊娠结局。结果 研究组患者25(OH)D_(3)[(54.17±9.47)nmol/Lvs(65.98±11.02)nmol/L]和FIB[(2.74±0.69)g/L vs (5.31±1.49)g/L]水平低于对照组,HMGB1[(8.52±1.93)μg/L vs (6.17±1.59)μg/L]、miR-122 (13.49±4.07vs 8.28±2.50)、PT[(15.84±5.13)s vs (12.69±3.46)s]、APTT[(40.12±7.41)s vs (32.19±8.03)s]、ALT[(22.49±3.56)U/L vs (8.31±2.64)U/L]、AST[(78.29±12.75)U/L vs (21.69±7.28)U/L]、GGT[(42.49±11.16)U/L vs (20.69±6.24)U/L]水平高于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。妊娠期肝病患者25(OH)D_(3)、FIB与ALT、AST、GGT呈负相关,HMGB1、miR-122、PT、APTT与ALT、AST、GGT呈正相关(P均<0.05)。妊娠期肝病患者25(OH)D_(3)与PT、APTT呈负相关,与FIB呈正相关,HMGB1、miR-122与PT、APTT呈正相关,与FIB呈负相关(P均<0.05)。25(OH)D_(3)、HMGB1、miR-122与凝血功能指标联合评估妊娠期肝病的ROC曲线下面积为0.884;研究组患者不良妊娠结局发生率高于对照组[16.67%(13/78) vs 2.56%(2/78);χ^(2)=8.925,P=0.003]。结论 妊娠期肝病患者外周血25(OH)D_(3)、HMGB1、miR-122水平与凝血功能间存在良好线性关系,对患者外周血25(OH)D_(3)、HMGB1、miR-122水平及凝血功能进行检测在妊娠期肝病评估方面具有一定辅助作用。

miR-122-5p通过靶向CREB1抑制食管癌细胞及移植瘤的生长

背景与目的:miR-122在多种肿瘤中表达异常,参与肿瘤细胞增殖、凋亡等,而cAMP反应元件结合蛋白1(cAMP response element-binding protein 1,CREB1)参与食管癌发展过程,研究miR-122-5p通过靶向CREB1对食管癌细胞及移植瘤生长的作用及机制。方法:选取2017年11月—2019年11月于福建医科大学附属泉州第一医院行肿瘤切除术后保存在液氮中的食管癌及相应癌旁正常组织(距癌边缘3~5 cm)标本43例。采用实时荧光定量聚合酶链反应(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测食管癌组织和细胞中miR-122-5p mRNA和CREB1 mRNA的表达。将细胞分为对照组、miR-NC组、pc-NC组、miR-122-5p mimic组、pc-CREB1组、miR-122-5p mimic+pc-CREB1组,根据LipofectamineTM2000说明书将miR-NC、pc-NC、miR-122-5p mimic、pc-CREB1质粒分别或联合转染进入EC109细胞中。采用双萤光素酶报告基因实验分析靶向关系,采用MTT法检测细胞增殖情况,采用克隆形成实验检测细胞生长能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Ki-67、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、活化胱天蛋白酶-3、Bax、Bcl-2、CREB1蛋白的相对表达水平。所有裸鼠分为4组:control组、miR-122-5p mimic组、pc-CREB1组、miR-122-5p mimic+pc-CREB1组。在裸鼠左腋下皮下注射各转染过的EC109细胞。30 d后处死裸鼠,完整取出皮下肿瘤,测定移植瘤体积和质量,采用免疫组织化学法检测Ki-67标记指数和胱天蛋白酶-3的表达水平。结果:miR-122-5p在食管癌组织和细胞中低表达,而CREB1在食管癌组织和细胞中高表达(P均<0.01)。miR-122-5p靶向下调CREB1表达。与对照组相比,miR-122-5p组食管癌细胞克隆数目减少,PCNA和Ki-67标记指数降低,细胞凋亡率增加,活化胱天蛋白酶-3和Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,食管癌EC109移植瘤体积和质量减小,Ki-67阳性细胞比率增加,活化胱天蛋白酶-3阳性细胞比率减少(P均<0.01)。过表达CREB1可逆转miR-122-5p对食管癌细胞和移植瘤增殖和凋亡的影响。结论:miR-122-5p通过靶向下调CREB1来抑制食管癌细胞增殖,并诱导细胞凋亡,从而抑制食管癌细胞和移植瘤的生长。

血清miR-122a表达、HMGB1水平对脓毒症并发肝损伤患儿预后的预测效能

目的探讨血清微小RNA-122a(miR-122a)表达、高迁移率族蛋白1(HMGB1)水平对脓毒症并发肝损伤(SALI)患儿预后的预测效能。方法198例脓毒症患儿,根据是否合并肝损伤分为肝损伤组(80例,其中重度37例、中度23例及轻度20例)和无肝损伤组118例,取同期60例体检健康儿童为对照组。采集各组外周静脉血,检测血清miR-122a、HMGB1,采用多因素Logistics回归分析SALI患儿不良预后的影响因素,绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-122a、HMGB1水平对SALI患儿不良预后的预测价值。结果与对照组比较,肝损伤组血清miR-122a、HMGB1水平均升高,与无肝损伤组、对照组比较,肝损伤组血清miR-122a、HMGB1水平均升高(P均<0.05)。与轻度组比较,中度组血清miR-122a表达、HMGB1水平高(P均<0.05),与中、轻度组比较,重度组血清miR-122a表达、HMGB1水平高(P均<0.05)。重度肝损伤、miR-122a、HMGB1为SALI患儿不良预后独立危险因素(OR分别为2.535,1.807,1.367;95%CI分别为1.345~5.293,1.375~2.466,1.035~1.806;P均<0.05);miR-122a+HMGB1(AUC=0.921,95%CI:0.839~0.970)预测SALI患儿不良预后的敏感度、特异度高于miR-122a表达(AUC=0.793,95%CI:0.688~0.875)、HMGB1(AUC=0.788,95%CI:0.682~0.871)。结论随肝损伤严重程度升高,脓毒症患儿血清miR-122a表达、HMGB1水平升高表达。SALI患儿不良预后的独立危险因素为重度肝损伤、血清miR-122a表达及HMGB1水平升高。血清miR-122a表达、HMGB1水平联合检测可用于预测SALI患儿的不良预后。

大鼠颅脑损伤后脑组织miR-122-5p含量变化及其对神经功能的影响

目的探讨大鼠颅脑损伤后脑组织miR-122-5p含量变化及其对神经功能的影响。方法将40只成年SD大鼠随机分为假手术组,TBI模型组,乱序miRNA组,miR-122-5p模拟物组。采用Feeney法制备TBI大鼠模型;乱序miRNA组造模24 h后,立体定向注射乱序miRNA 5μl(20μmol/L);miR-122-5p模拟物组造模24 h后,立体定向注射miR-122-5p模拟物组5μl(20μmol/L)。q RT-PCR法检测大鼠脑组织miR-122-5p的表达变化;免疫印迹法法检测p53蛋白表达水平;水迷宫法检测学习记忆功能;TUNEL法检测脑组织细胞凋亡情况;流式细胞术检测脑细胞线粒体膜电位的变化。结果与假手术组大鼠比较,模型组和乱序miRNA组大鼠脑组织miR-122-5p表达明显减少,p53蛋白显著上调,脑组织细胞凋亡数明显增多,线粒体膜电位下降显著,水迷宫测试大鼠寻找隐形平台时间显著延长;与模型组大鼠比较,miR-122-5p模拟物组大鼠miR-122-5p表达明显增加,并伴随p53蛋白低表达,细胞凋亡水平下降,神经功能障碍得到明显逆转。结论颅脑损伤后miR-122-5p的表达下调可能导致p53蛋白的表达升高,促进神经细胞凋亡。

miR-122靶向调控CREB1对膀胱癌细胞增殖、侵袭能力的影响及其分子机制

目的观察微小RNA122(miR-122)通过靶向调控环磷腺苷效应元件结合蛋白1(CREB1)对膀胱癌细胞增殖和侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用通路。方法TargetScan7.1软件预测程序显示,miR-122与CREB1启动子区存在连续的结合位点,双荧光素酶基因报告实验结果显示,在膀胱癌J82细胞中miR-122可靶向负调控CREB1。将J82细胞分为三组,共转染组采用Lipofectamine TM 2000转染miR-122 mimic及CREB1过表达质粒,miR-122 mimic组转染miR-122 mimic,对照组转染对照质粒,转染48 h。采用MTS法和平板克隆实验检测细胞增殖能力(分别以增殖OD值和克隆形成数表示),Transwell小室实验检测细胞侵袭能力(以穿膜细胞数表示),Western blotting法检测细胞CREB1及蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达。结果与对照组比较,miR-122 mimic组和共转染组细胞增殖OD值、克隆形成数、穿膜细胞数均降低,且miR-122 mimic组降低更明显(P均<0.05)。与对照组比较,miR-122 mimic组和共转染组细胞CREB1、p-Akt、p-mTOR蛋白表达降低,且miR-122 mimic组降低更明显(P均<0.05)。与对照组比较,miR-122 mimic组和共转染组细胞Akt、mTOR表达均无明显变化(P均>0.05)。结论miR-122通过作用靶点CREB1负向调控Akt/mTOR通路,从而抑制膀胱癌细胞的增殖和侵袭。

食管癌组织miR-122-5p、CREB1 mRNA表达变化及其临床意义

目的观察食管癌组织微小RNA-122-5p(miR-122-5p)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1(CREB1)mRNA表达变化,并探讨其临床意义。方法选择食管癌患者92例,取手术切除的食管癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-qPCR技术检测miR-122-5p、CREB1 mRNA表达。比较食管癌组织与癌旁正常组织miR-122-5p、CREB1 mRNA表达差异,分析食管癌组织miR-122-5p表达与CREB1 mRNA表达的关系以及二者表达与患者临床病理特征的关系。所有患者术后定期随访3年,统计术后3年总生存率,比较食管癌组织不同miR-122-5p、CREB1 mRNA表达者术后3年总生存率差异。采用Cox比例风险回归模型分析食管癌患者预后不良的危险因素。结果食管癌组织miR-122-5p相对表达量明显低于癌旁正常组织,CREB1 mRNA相对表达量明显高于癌旁正常组织(t分别为-22.481、18.004,P均<0.01)。食管癌组织miR-122-5p表达与CREB1 mRNA表达呈负相关关系(r=-0.562,P<0.01)。食管癌组织miR-122-5p、CREB1 mRNA表达均与TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、病理类型、肿瘤直径、组织分化程度无关(P均>0.05)。所有患者术后随访3年,随访期间死亡38例。以食管癌组织miR-122-5p、CREB1 mRNA相对表达量的均数为临界值,将患者分为miR-122-5p高表达者(≥0.346,44例)与低表达者(<0.346,48例)、CREB1 mRNA高表达者(≥3.488,42例)与低表达者(<3.488,50例),miR-122-5p高表达者术后3年总生存率高于miR-122-5p低表达者,CREB1 mRNA高表达者术后3年总生存率低于CREB1 mRNA低表达者(χ^(2)分别为7.327、7.582,P均<0.01)。Cox比例风险回归分析发现,TNM分期Ⅲ、Ⅳ期及有淋巴结转移、CREB1 mRNA表达≥3.488为食管癌患者预后不良的独立危险因素,而miR-122-5p表达≥0.346为其独立保护因素(P均<0.05)。结论食管癌组织miR-122-5p表达下调、CREB1 mRNA表达上调,二者表达变化与TNM分期、淋巴结转移以及患者预后有关。

miR-122对局灶性脑缺血小鼠脑组织NLRP3表达的影响

目的:探讨微小RNA-122(miR-122)在小鼠急性缺血性脑卒中的影响及其作用机制。方法:80只健康雄性C57BL/6小鼠随机分为4组,假手术组(sham)、大脑中动脉阻塞组(MCAO)、miR-122模拟物注射组(MACO+miR-122 mimics)和miR-122抑制物注射组(MACO+miR-122 inhibitor)。电凝法建立永久性局灶性小鼠MCAO模型,脑室注射miR-122模拟物、miR-122抑制物后采用Longa神经功能评分评估小鼠神经功能缺损程度;real time RT-PCR检测各组小鼠脑组织NOD样受体蛋白家族炎症小体3(NLRP3)的受体蛋白NLRP3、白介素1β(IL-1β)mRNA的表达差异;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评估小鼠脑梗死体积;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠血清NLRP3、IL-1β蛋白表达。结果:Longa神经功能评分结果显示脑室注射miR-122模拟物后可显著改善小鼠神经功能评分,差异有统计学意义(P<0.05)。与sham组相比MCAO组脑组织NLRP3、IL1βmRNA表达显著升高;real time RT-PCR、ELISA的结果显示脑室注射miR-122模拟物后NLRP3和IL-1β表达量降低,差异均有统计学意义(P<0.05),脑室注射miR-122抑制物后NLRP3和IL-1β表达量增高,差异均有统计学意义(P<0.05);TTC染色结果显示脑室注射miR-122模拟物可减小小鼠脑梗死体积,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MCAO模型小鼠中miR-122通过下调炎症因子NLRP3和IL-1β的表达发挥神经保护作用,从而减轻小鼠脑梗死体积。

miR-122-5p对滑膜肉瘤细胞株SW982增殖及放疗敏感性的影响

目的:探讨miRNA-122-5p对人滑膜肉瘤细胞株SW982增殖及放疗敏感性的影响。方法:采用脂质体法分别转染miR-122-5p mimic和inhibitor至SW982细胞。流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,MTT法检测细胞活力。通过γ-射线干预细胞,分析其对放疗的敏感性。结果:与癌旁组织相比,滑膜肉瘤miR-122-5p明显低表达,而且在转移者及低分化型中水平最低,而甲基化CpG结合蛋白2(MeCP2)的表达与之呈显著负相关(均P<0.05)。与对照组相比,miR-122-5p mimic可上调miR-122-5p水平,下调MeCP2蛋白表达,抑制SW982细胞增殖,并增加SW982细胞对射线的放疗敏感性(均P<0.05);而过表达MeCP2却能阻断miR-122-5p的作用,增加细胞对放疗的抵抗(均P<0.05)。结论:miR-122-5p在滑膜肉瘤中低表达,miR-122-5p/MeCP2轴参与调控肿瘤细胞增殖以及肿瘤细胞对γ-射线的放疗敏感性。

急性呼吸窘迫综合征患者血清Cc16蛋白和miRNA-122表达及其临床意义

目的:探讨急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者血清Cc16蛋白、miRNA-122的表达水平及其与预后的关系。方法:回顾性分析68例ARDS患者的临床资料,其中死亡组53例,存活组15例,另选取同期健康体检者45例为对照组。采用Kaplan-Meier法分析患者的生存期,应用Logistic分析影响患者预后的因素。结果:ARDS存活组与死亡组平均肺动脉压、平均气道压、肺损伤评分、C反应蛋白、降钙素原、丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素、Cc16蛋白和miRNA-122表达水平显著高于对照组,且死亡组C反应蛋白、降钙素原、ALT、AST、总胆红素、Cc16蛋白及miRNA高于存活组(均P <0. 05)。Kaplan-Meier分析显示Cc16蛋白低表达组总体生存率显著高于高表达组(51. 85%vs 18. 15%,P <0. 01),miRNA-122低表达组生存率显著高于高表达组(60. 92%vs20. 13%,P <0. 05);Logistic单因素分析显示ARDS预后与C反应蛋白、降钙素原、ALT、AST、总胆红素、Cc16、miRNA-122相关;Logistic多因素分析显示ALT、Cc16、miRNA-122是影响ARDS预后的独立危险因素。结论:ARDS患者血清Cc16蛋白和miRNA-122表达量异常增高与预后不良密切相关。

环状RNA叉头框蛋白O3靶向微小RNA-122-5p对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状RNA叉头框蛋白O3(circFOXO3)靶向微小RNA(miRNA)-122-5p对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响。方法(1)选取38例结直肠癌患者结直肠癌组织、癌旁组织,采用实时定量PCR法检测结直肠癌组织、癌旁组织中circFOXO3、miRNA-122-5p的表达水平,并分析结直肠癌组织中circFOXO3与miRNA-122-5p表达水平的相关性。(2)取人结直肠癌细胞HCT116分为6组并给予相应干预,包括si-NC组(转染si-NC)、si-circFOXO3组(转染si-circFOXO3)、miRNA-NC组(转染miRNA-122-5p-NC)、miRNA-122-5p组(转染miRNA-122-5p模拟物)、si-circFOXO3+抗miRNA-NC组(共转染si-circFOXO3与抗miRNA-122-5p-NC)、si-circFOXO3+抗miRNA-122-5p组(共转染si-circFOXO3与抗miRNA-122-5p)。分别采用细胞计数法、平板克隆形成实验、Transwell小室实验检测人结直肠癌细胞HCT116的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力,采用蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达水平。(3)通过生物信息学数据库starBase预测circFOXO3的靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验检测circFOXO3与miRNA-122-5p的靶向关系。结果(1)与癌旁组织相比,结直肠癌组织中的circFOXO3表达水平升高,miRNA-122-5p表达水平降低,结直肠癌组织中的circFOXO3与miRNA-122-5p表达水平呈负相关(均P<0.05)。(2)与si-NC组比较,si-circFOXO3组的miRNA-122-5p表达水平升高,细胞活力降低,克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少,MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(均P<0.05)。与miRNA-NC组比较,miRNA-122-5p组的细胞活力降低,克隆形成数、迁移及侵袭细胞数均减少,MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(均P<0.05)。与si-circFOXO3+抗miRNA-NC组比较,si-circFOXO3+抗miRNA-122-5p组的细胞活力升高,克隆形成数、迁移及侵袭细胞数均增多,MMP-2、MMP-9蛋白表达水平升高(均P<0.05)。(3)circFOXO3与miRNA-122-5p存在结合位点,转染miRNA-122-5p模拟物可明显降低野生型载体WT-circFOXO3的荧光素酶活性(P<0.05),而对突变型载体MUT-circFOXO3的荧光素酶活性无明显影响(P>0.05)。结论干扰circFOXO3的表达可通过靶向调控miRNA-122-5p从而抑制结直肠癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力。

miR-122抑制Sprouty2促进肾癌细胞增殖

目的研究miR-122在肾癌中的作用及其与Sprouty2的相互关系。方法使用Western blot检测4个肾癌组织和相邻正常组织中Sprouty2的表达水平,RT-qPCR检测42个肾癌组织和相邻正常组织中的miR-122表达水平。下调miR-122或敲低Sprouty2后通过CCK-8实验检测肾癌细胞增殖情况,并使用双荧光素酶基因实验明确miR-122和Sprouty2之间的关系。结果肾癌组织中Sprouty2表达水平低于正常组织(P<0.05),miR-122表达水平高于正常组织(P<0.05)。miR-122下调后肾癌细胞的增殖能力下降(P<0.05)。敲低Sprouty2表达水平能促进肾癌细胞的体外增殖(P<0.05)。miR-122抑制剂能与Sprouty23′-UTR结合,共转染后增强Sprouty2基因的活性。结论Sprouty2基因是miR-122的靶基因。miR-122可以通过抑制Sprouty2基因的活性,促进肾癌的发生、发展。

胆石症患者血清微小RNA-122、高迁移率族蛋白1和角蛋白-18水平及其临床意义

目的探讨胆石症患者血清微小RNA-122(miR-122)、高迁移率族蛋白1(HMGB 1)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶裂解角蛋白-18(CCK-18)水平变化及其临床意义。方法 2015年1月～2018年2月我院收治的201例胆石症患者和健康体检者103例,比较两组人群血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平差异。采用Logistic回归分析影响单纯性胆石症进展为复杂性胆石症的相关因素。采用受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)分析血清指标诊断复杂性胆石症的效能。结果胆石症患者血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平分别为4.7(0.9,14.3)、(2.5±0.7) ng/mL和(126.8±20.5)U/L,显著高于健康人【0.9(0.4,3.1)、(2.1±0.4) ng/mL和(101.4±18.7) U/L,均P<0.05】;97例单纯性胆石症组血清miR-122、HMGB 1和CCK-18分别为3.5(0.7,8.5)、(2.2±0.5)ng/m L和(112.4±19.4)U/L,显著低于104例复杂性胆石症组【分别为5.8(0.9,16.2)、(2.8±0.8) ng/m L和(140.2±23.5) U/L,均P<0.05】;单因素和多因素Logistic回归分析显示,肝硬化、腹腔积液、血清miR-122、HMGB 1和CCK-18为单纯性胆石症进展为复杂性胆石症的危险因素;血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平三者联合检测诊断复杂性胆石症的AUC为0.819(0.758～0.962),显著高于miR-122【0.724(0.657～0.815)】、HMGB 1【0.701(0.633～0.804)或CCK-18【0.767(0.702～0.873)】单指标检测。结论对血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平升高的胆石症患者,应想到复杂性胆石症的可能,而给予更仔细的检查和特别处理。

γ射线对大鼠肝脏代谢酶CYP3A1的多水平影响

目的探究γ射线对肝脏核心药物代谢酶CYP3A1在mRNA、蛋白以及代谢活性多水平的影响。方法Wistar大鼠随机分为对照组、辐射后24 h组、辐射后72 h组。6 Gyγ射线单次全身辐射实验组大鼠,于辐照后24 h、72 h眼眶静脉丛取血,进行血常规检测与血生化分析;取肝脏组织,RT-PCR定量CYP3A1 mRNA以及肝脏特异性的microRNA(miR-122-5p),Western blot分析CYP3A1蛋白表达水平;利用特异性底物咪达唑仑与液质联用方法检测CYP3A1代谢活性水平。结果与对照组相比,辐射组大鼠体重明显降低;白细胞数量明显减少;谷丙转氨酶活性持续降低,碱性磷酸酶活性明显降低,总胆红素、总胆汁酸水平明显升高,表明辐射后大鼠肝脏可能受损。CYP3A1 mRNA相对表达量在辐射后24 h、72 h持续明显升高;CYP3A1蛋白表达及代谢活性水平在辐射后24 h呈现较明显的升高趋势,在辐射后72 h较对照组明显上升。同时,监测到辐射24 h组和72 h组大鼠肝脏miR-122-5p表达量快速且持续下降。结论γ射线辐射对肝脏可能具有一定的损伤作用,其造成肝组织中关键代谢酶CYP3A1在mRNA和蛋白表达水平的持续上调,以及代谢活性水平的升高,调控机制可能与miR-122-5p有关。

肺炎支原体对大环内酯类抗生素的耐药分子机制

目的了解肺炎支原体(MP)对大环内酯类抗生素的耐药分子机制。方法对370例咽拭子标本进行MP分离培养,应用巢式PCR扩增MP种特异16S rRNA基因对临床分离株进行分子鉴定;通过体外药物敏感试验测定MP临床分离株对红霉素的最小抑菌质量浓度(MIC),并筛选出耐药株;除23S rRNA结构域Ⅴ区外,通过PCR扩增与大环内酯类抗生素耐药性有关的23S rRNA结构域Ⅱ区及核糖体蛋白L4、L22的基因,扩增产物进行全自动DNA测序,测得序列与美国国立生物信息中心已登录的MP标准株M129的相应基因序列作比对。结果370例咽拭子标本中分离MP50株。其中敏感株4株,耐药株46株。耐药株的红霉素MIC显著升高。50株临床分离株和标准株FH均未出现23S rRNA结构域Ⅱ区的基因突变。在核糖体蛋白L4中,其中6株临床分离株和标准株FH分别出现了58位C→A、66位T→G、81位G→T、162位C→A和(或)430位A→G点突变。在核糖体蛋白L22中,50株临床分离株和标准株FH均出现了508位T→C点突变,且其中11株和标准株FH还分别出现了62位C→A、65位T→A和(或)279位T→C点突变。结论MP对大环内酯类抗生素耐药现象严重,23S rRNA结构域Ⅴ区中心环的药物作用靶位基因突变是耐药性产生的主要机制。在使用大环内酯类药物治疗的过程中,有体内诱导出耐药株的可能性。

绝经后女性非酒精性脂肪肝患者miR-122-5p及FOXO3水平与骨质疏松的相关性研究

目的探讨绝经后女性非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)患者miR-122-5p及FOXO3为叉头框蛋白O3(forkhead box protein O3,FOXO3)水平与骨质疏松(osteoporosis,OP)的相关性研究。方法收集30例绝经后女性NAFLD患者与48例绝经后女性非NAFLD患者的临床资料及血清。qRT-PCR检测血清中miR-122-5p、FOXO3水平。生化自动分析仪检测甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白。骨密度分析仪检测第1~4腰椎、Wards三角骨、股骨颈、大转子、全髋5个部位的骨密度。分析以上临床指标与骨质疏松的相关性。结果miR-122-5p在绝经后女性NAFLD患者中表达为0.76±0.28,较非NAFLD患者的1.00±0.31表达低(t=3.43,P=0.001)。借助生物信息学网站分析得出miR-122-5p的下游靶基因FOXO3。FOXO3在绝经后女性NAFLD患者中表达为1.31±0.30,较非NAFLD患者的1.00±0.27表达升高(t=4.73,P<0.001)。Student’s t检验与Logistic回归分析显示甘油三酯、miR-122-5p、FOXO3水平是NAFLD患病的危险因素(均P<0.05)。Pearson相关系数显示miR-122-5p水平与股骨颈(r=0.49,P=0.006)、大转子(r=0.37,P=0.046)、全髋(r=0.40,P=0.027)的骨密度呈显著正相关,FOXO3水平与股骨颈(r=-0.45,P=0.014)、全髋(r=-0.51,P=0.004)骨密度呈显著负相关,其余指标相关性不明显(均P>0.05)。结论绝经后女性NAFLD患者血清miR-122-5p水平降低、FOXO3水平升高可能增加患者患骨质疏松的风险。

乙型肝炎病毒X蛋白通过miR-122调节肝癌细胞增殖及细胞周期的研究

乙型肝炎病毒中的功能蛋白乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)在促进肝细胞恶性改变中起到重要作用,但目前HBx调控肝癌细胞生长的具体机制仍未完全阐明。miR-122是具有抑癌特性的一类miR,在乙肝相关肝癌中表达减少。为了研究HBx通过微小RNA(microRNA,miR)-122调节肝癌细胞增殖及细胞周期的作用,本研究培养肝癌HepG2细胞株并进行分组,NC组转染NC慢病毒载体、HBx组转染HBx慢病毒载体、HBx+NC模拟物组转染HBx慢病毒载体及NC模拟物、HBx+miR-122模拟物组转染HBx慢病毒载体及miR-122模拟物、NC模拟物组转染NC模拟物、miR-122模拟物组:转染miR-122模拟物。通过MTS法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期,PCR检测miR-122表达量,western blot检测细胞周期蛋白G1(CyclinG1)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达量。结果显示HBx组细胞的OD值、细胞周期G2/M期比例及细胞中CyclinG1、XIAP、β-catenin的表达量均明显高于NC组(P<0.05),细胞周期G0/G1期、S期比例及细胞中miR-122表达量均明显低于NC组(P<0.05);HBx+miR-122模拟物组细胞的OD值、细胞周期G2/M期比例及细胞中CyclinG1、XIAP、β-catenin的表达量均明显低于HBx+NC模拟物组(P<0.05),细胞周期G0/G1期、S期比例及细胞中miR-122表达量均明显高于HBx+NC模拟物组(P<0.05);miR-122模拟物组CyclinG1、XIAP、β-catenin荧光素酶报告基因的荧光活性明显低于NC模拟物组(P<0.05)。本研究结果充分说明HBx能够增强肝癌细胞的增殖活力及明显加速细胞周期,且该作用部分由miR-122的下调所介导。本研究首次阐明了HBx调节肝癌细胞生长的分子机制,也初步探明了具有抑癌活性的miR-122在肝癌细胞中可能靶向CyclinG1、XIAP、β-catenin等基因。

IL-33、HMGB1、microRNA-122在脓毒症中的表达及意义

目的:探究白细胞介素(interleukin,IL)-33、高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、microRNA-122在脓毒症中的表达及意义。方法:选取2016年5月至2018年5月于上海市第六人民医院金山分院接受治疗的脓毒症患者60例,并根据患者脓毒症严重程度分为脓毒症组(32例)和重症脓毒症组(28例),随机选取同期于我院进行体检的健康人作为对照组(30例)。抽取三组研究对象清晨空腹静脉血5 mL并进行离心处理,酶联免疫吸附试验法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测IL-33水平,免疫透射比浊法检测HMGB1水平,Western blot法检测microRNA-122表达,并对IL-33、HMGB1、microRNA-122在脓毒症中相关性进行研究。结果:脓毒症组和重症脓毒症组患者血清IL-33、HMGB1表达水平和microRNA-122相对表达量较正常对照组明显升高,差异具有统计学意义(F值分别为36.39,22.06和56.43,P值均<0.05)。重症脓毒症患者血清IL-33、HMGB1表达水平和microRNA-122相对表达量明显高于脓毒症患者,差异具有统计学意义[(14.87±2.03)pg/mL比(12.66±1.97)pg/mL,(137.69±24.51)μg/L比(80.66±12.97)μg/L,(1.63±0.08)比(1.35±0.05),t值分别为4.27,11.46和16.47,P值均<0.05)]。对IL-33、HMGB1、microRNA-122在脓毒症中表达进行相关分析,结果显示IL-33与HMGB1,IL-33与microRNA-122,HMGB1与microRNA-122表达水平变化均呈正相关(r值分别为0.73、0.76、0.59,P值均<0.05)。结论:IL-33、HMGB1、microRNA-122在脓毒症中表达异常,并且三者之间具有一定相关性,对IL-33、HMGB1、microRNA-122表达水平进行检测能够为脓毒症患者疾病严重程度的临床诊断提供一定的帮助。

上皮性卵巢癌患者血清miR-122-5p和HE4及CA125诊断价值

目的探讨上皮性卵巢癌(EOC)患者血清miR-122-5p表达及其联合糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)诊断EOC的价值。方法选取2017-01-01-2019-12-31海南西部中心医院妇产科收治的131例EOC患者作为EOC组,上皮性卵巢良性肿瘤患者110例作为良性组和健康体检者65名作为对照组,采用实时定量聚合酶链反应检测miR-122-5p表达水平,化学发光法测定血清HE4及CA125水平。比较EOC组、良性组和对照组血清miR-122-5p、HE4及CA125水平。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-122-5p、HE4及CA125水平对EOC的诊断价值。采用Pearson相关分析EOC患者血清miR-122-5p表达与HE4和CA125的相关性。结果 EOC组、良性组和对照组血清miR-122-5p(F=16.628,P<0.001)、HE4(F=18.590,P<0.001)及CA125(F=13.402,P<0.001)水平比较,差异有统计学意义。EOC组血清miR-122-5p水平为3.16±1.35,高于良性组的1.42±0.71和对照组的1.07±0.63,t值分别为13.842和16.217,均P<0.001;HE4水平为(346.48±58.65) pmol/L,高于良性组的(53.27±11.58) pmol/L和对照组的(48.35±9.70) pmol/L,t值分别为15.610和17.513,均P<0.001;CA125水平为(307.73±94.28) U/mL,高于良性组的(26.90±11.52) U/mL和对照组的(20.85±9.42) U/mL,t值分别为10.415和13.263,均P<0.001。EOC患者血清miR-122-5p表达在临床分期(t=17.863,P<0.001)、分化程度(t=7.482,P<0.001)及淋巴结转移(t=18.105,P<0.001)中有差异;HE4表达在临床分期(t=10.815,P<0.001)、分化程度(t=8.305,P<0.001)及淋巴结转移(t=13.315,P<0.001)中有差异;CA125表达在临床分期(t=5.604,P=0.002)、分化程度(t=5.258,P=0.008)及淋巴结转移(t=8.963,P<0.001)中有差异。ROC曲线结果显示,血清miR-122-5p为2.42、HE4为190.25 pmol/L、CA125为163.17 U/mL是诊断EOC的最佳截断值,3项联合诊断EOC曲线下面积(95%CI:0.892~0.997)最大,灵敏度为96.18%,特异度为88.18%。相关分析结果显示,EOC患者血清miR-122-5p表达水平与HE4(r=0.841,P<0.001)及CA125(r=0.790,P<0.001)均呈正相关。结论 EOC患者血清miR-122-5p、HE4及CA125水平升高,3项联合检测对EOC诊断有较高临床价值。

糖尿病足部感染患者热休克蛋白及微小核糖核酸和炎症因子表达水平

目的分析2型糖尿病足部感染患者热休克蛋白(HSP)27、HSP70及微小核糖核酸(miR)-122、miR-144和炎症因子表达水平,为临床诊断提供依据.方法选取2021年1月-2022年10月河北医科大学第二医院收治的120例2型糖尿病足感染患者为研究组(轻度感染51例、中度感染43例,重度感染26例),132例2型糖尿病足无感染患者为对照组,比较两组及感染组不同病情进展患者HSP27、HSP70、miR-122、miR-144及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、成纤维细胞生长因子2(FGF2)、白细胞介素-6(IL-6)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、降钙素原(PCT)等炎症指标水平.结果研究组HSP27、HSP70,miR-122、miR-144、TNF-α、FGF2、IL-6、VCAM-1和PCT水平高于对照组(P<0.05);糖尿病足部感染随着程度加重HSP27、HSP70、miR-122、miR-144、TNF-α、FGF2、IL-6、VCAM-1和PCT水平呈升高趋势(P<0.05).结论2型糖尿病足部感染患者血清HSP27、HSP70、miR-122、miR-144表达增加,且表达水平与病情进展、炎症指标密切相关.