流动注射-高分辨飞行时间质谱检测毒饵大米中的氟乙酰胺

采用氨水加热水解氟乙酰胺 -流动注射 -大气压电喷雾电离 -高分辨飞行时间质谱检测氟乙酰胺水解产物氟乙酸负离子。该方法具有离子质量检测误差小 (误差 <1 m D)、专属性强、简便快速、灵敏度高等特点 ,可检测氟乙酰胺含量为 1 0 μg/g的毒饵大米 ,大米空白不产生干扰。讨论了针对氟乙酸负离子检测的仪器参数优化、负离子质量校正物选择、内标选择、氟乙酰胺水解条件和水解率、检测方法的精密度等。对该方法在其它样品的应用前景做了推测。

流动注射-电喷雾电离-飞行时间质谱法测定氟乙酰胺精确质量及其在毒饵大米中的应用

探讨了以对甲苯胺为质量定标物 ,采用流动注射 -电喷雾电离 -飞行时间质谱 (FI-SEI-TOF-MS)技术测定剧毒鼠药氟乙酰胺精确质量的快速筛选方法。用水提取毒饵大米中的氟乙酰胺 ,提取液在 40 0 0 r/ min下离心 5 min,取 0 .1 0 m L上清液用水稀释至 0 .5 0 m L ,进样 2μL样品溶液进行 TOF-MS检测。以 p-甲基苯胺(正离子质量 1 0 8.0 81 3 u)为锁定质量时测量的氟乙酰胺精确质量为 78.0 3 5 5 u± 1 mu。在 78.0 3 5 5 u± 1 0mu范围内仅有 C2 H7NS(正离子质量 78.0 3 77u)可能产生质量干扰 ,但其可由 M+2的同位素峰判断区别。氟乙酰胺 -对甲基苯胺峰面积比与氟乙酰胺浓度在 1 0～ 1 5 0 mg/ L成线性关系 ,相关系数 >0 .99。排除干扰后 ,该方法具有检测精确质量 ,质量误差 <1 mu、对氟乙酰胺检测专属性强、简便快速等特点 ,空白大米不干扰检测 ,可定量测定氟乙酰胺含量大于 1 5μg/ g的毒饵大米。从样品处理到质谱检测可在半小时内完成。

OsRUS1酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用检测

采用PCR技术扩增水稻(Oryza sativa L)根UV-B敏感基因1(ROOT UV-B SENSITIVE 1,RUS1)四个不同片段[OsRUS1(1-1782)、OsRUS1(1-504)、OsRUS1(510-1282)、OsRUS1(1188-1782)],连接到T载体pMD18-T-Simple上,测序无误后分别亚克隆到诱饵载体pGBKT7上,酶切和测序结果表明构建的4个OsRUS1基因片段的诱饵载体构建成功,读码框正确;转化重组载体于酵母感受态细胞Y187中,用LacZ、MEL1活性检测法和营养缺陷型培养基SD-Trp-DO培养法进行自激活检测和毒性检测,结果表明诱饵载体对酵母菌株Y187没有转录激活活性和毒害作用。说明构建的4个OsRUS1基因片段的诱饵载体可以用于酵母双杂交系统中,为下一步从水稻cDNA文库中筛选互作蛋白奠定了基础。

酵母双杂交系统筛选与水稻条纹病毒Pc2互作的寄主蛋白基因片段

水稻条纹病毒编码的Pc2蛋白在病毒侵染及宿主症状发生中起作用。研究其与寄主间的分子互作有助于揭示病毒侵染与致病的分子机制。分别将编码Pc2N端（Pc2-N）与Pc2C端（Pc2-C）的基因片段克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7上．并构建水稻叶片cDNA文库．然后分别用Pc2-N和Pc2-C为诱饵筛选文库寻找与其互作的寄主因子。结果表明．诱饵载体中插入的Pc2-N和Pc2-C编码框和氨基酸序列均正确。Pc2-N对酵母菌株AHl09无毒性和自主激活能力，但Pc2-C对酵母具有细胞毒性。文库滴度为4x107CFU／mL．且大多数插入片段在500～2000bp之间。利用Pc2-N为诱饵筛选水稻cDNA文库．获得有8个候选阳性克隆。经序列测定和BLAST分析结果表明．这些克隆共编码5种蛋白．主要为胁迫相关蛋白与光系统相关蛋白。

蛇形毒饵站的稻田防治效果试验

为了确定自主研发的蛇形管毒饵站的使用效果,于2007年7月在哈尔滨市民主乡高玉环屯水稻田进行了田间防治试验。结果表明:在处理样地中的毒饵站平均毒饵消耗量的下降趋势符合y=5.169 3e-0.0685x,R2=0.984 5;在对照中平均饵料消耗量增长趋势符合y=1.820 7e0.027x,R2=0.966 7。说明在处理样地中的毒饵消耗随着害鼠数量的减少而逐渐减少,对照样地中害鼠对毒饵站中的饵料选择性增加,使饵料的消耗量逐渐增加。夹夜结果为处理平均捕获率为2%,对照平均捕获率为11.33%,防治率为82.35%,防治效果明显。

甘氟大米毒饵现场灭鼠效果观察

目的:观察1.5％的甘氟大米毒饵毒杀褐家鼠效果。方法:用75％甘氟钠盐200g,自配成1.5％的甘氟大米毒饵,现场设置25个观察点,每点放置食皿2个,并分别投放毒饵和无毒大米各40g,观察2周。结果:鼠对毒饵的接受性,前4d的摄食系数为0.93,大于0.5。说明鼠对1.5％甘氟大米毒饵的接受性良好,观察2周后鼠密度由投毒前的79.50％下降到4.80％,灭鼠率为93.90％。结论:1.5％甘氟大米毒饵毒杀褐家鼠效果显著,是目前部队大面积灭鼠较好的一种方法。

立克命追踪粉对家栖鼠类的防治效果

为验证杀鼠剂立克命对家栖鼠类的灭杀效果,为今后开展大面积灭鼠提供科学依据,采用单因素试验方法,对0.037 5%立克命大米毒饵与0.005%溴敌隆颗粒毒饵对家栖鼠类的药效进行对比试验。结果表明:立克命大米毒饵的平均灭鼠效果为93.60%,溴敌隆颗粒毒饵的平均灭鼠效果为91.01%;立克命大米毒饵消耗率为49.31%,溴敌隆颗粒毒饵消耗率为52.12%,两者无明显差异。说明,立克命对家栖鼠适口性较好,不产生拒食现象,且具有很好的安全性。结论:立克命大米毒饵可以作为贵州省大面积杀灭家栖鼠类的首选轮换杀鼠剂。

水稻LRR型受体蛋白激酶OsRPK1胞外区酵母双杂交诱饵载体构建

[目的]寻找水稻LRR型蛋白受体激酶(Leucine rich repeat receptor protein kinase)OsRPK1胞外结构域的互作蛋白。[方法]以日本晴水稻为研究材料,以水稻根部c DNA为模板通过PCR扩增方法得到OsRPK1胞外结构域基因编码片段OsRPK1-OD(969 bp)。将该片段插入酵母双杂交诱饵载体p GBKT7,构建重组诱饵载体p GBKT7-OsRPK1-OD。[结果]对pGBKT7-OsRPK1-OD进行毒性检测和转录自激活鉴定,酵母生长结果发现,含有pGBKT7-OsRPK1-OD载体的Y2H Gold细胞,在SD/-Trp、SD/-Trp/X-α-gal营养缺陷型固体培养基上生长出白色菌落,在SD/-Trp/X-α-gal/Ab A固体培养基上生长受到抑制;在SD/-Trp生长出含有pGBKT7-OsRPK1-OD载体的Y2H Gold酵母菌落大小与转化了空载的酵母菌落大小一致,显示插入的OsRPK1-OD对酵母生长无毒性作用。[结论]OsRPK1-OD无法参与激活转录酵母中报告基因HIS3,ADE2,MEL1和AUR1-C,该片段可以作为诱饵基因筛查水稻c DNA文库,寻找与之相互作用的蛋白质。

南方灭鼠应用稻谷与大米毒饵的比较

生物测定法测得谷壳对复方88-1灭鼠剂的阻滞率为54.3％,光谱分析法测得其对敌鼠钠盐的阻滞率在47.43％～57.00％之间。相同条件下,褐家鼠Rattus norvegicus取食敌鼠钠盐稻谷毒饵量为大米毒饵的2倍多。在南方潮湿的环境下,大米毒饵更易松散、霉变,使其适口性更低。综合考虑认为南方灭鼠使用稻谷毒饵更为合适。

酵母双杂诱饵表达载体pGBKT7-S1-G/pGBKT7-S1-J的构建

S1是水稻(Oryza sativa L.)种间杂种不育一个最重要的基因座,对杂种的雌雄配子都有选择性杀灭作用。通过构建S1基因的酵母诱饵载体,进行相应水稻品种酵母表达文库的筛选,得到S1蛋白作用的下游因子,对S1基因如何控制杂种不育的分子机理了解有重要意义。本研究通过RT-PCR扩增获得了S1基因CDS序列,测序后与pGBKT7酵母诱饵载体连接构建了p GBKT7-S1-G/pGBKT7-S1-J,再双酶切鉴定并转化酵母菌株AH109,S1蛋白在酵母菌株中能正确稳定表达,未表现出毒性和自激活性。此酵母诱饵蛋白表达载体被成功构建,为后续蛋白互作筛选提供理论参考。