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猪肠道组织RIG-I的表达及其在猪传染性胃肠炎病毒致病机制中作用的初步研究
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作者 王文哲 李亮 +2 位作者 何豪杰 薛美 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期161-168,共8页
为探究天然免疫分子维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-I)在猪肠道组织中的表达情况,评价其在猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)致病机制中的作用。本研究经原核表达重组RIG-I蛋白(rRIG-1)并采用SDS-PAGE切胶纯化该蛋白,将其免疫大白兔制备兔RIG-I多克隆抗体... 为探究天然免疫分子维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-I)在猪肠道组织中的表达情况,评价其在猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)致病机制中的作用。本研究经原核表达重组RIG-I蛋白(rRIG-1)并采用SDS-PAGE切胶纯化该蛋白,将其免疫大白兔制备兔RIG-I多克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体效价。结果显示获得了效价可达1∶64000的兔RIG-I多克隆抗体。利用该抗体经western blot检测SPF猪各肠道组织中RIG-I的表达。结果显示,制备的多克隆抗体可与猪各肠道中的RIG-I反应,且RIG-I在SPF猪空肠中的表达量最高。利用该抗体经western blot检测TGEV感染的ST细胞及猪空肠中RIG-I的表达水平。结果显示,TGEV感染后ST细胞中RIG-I的表达水平极显著高于空白对照细胞(P<0.01);与正常SPF猪空肠相比,TGEV感染的SPF猪空肠组织中RIG-I蛋白的表达水平明显提高。表明TGEV感染后能够刺激细胞内源性及感染猪肠道组织中RIG-I蛋白的表达水平。将本研究构建的重组质粒pCAGGS-RIG-I-flag和RIG-I干扰RNA(siRIG-I)分别转染ST细胞,采用western blot鉴定RIG-I的过表达和敲低效果后,再利用TGEV感染,24 h后采用qPCR检测RIG-I对上述ST细胞中IFN-β转录水平的影响;收集细胞上清,采用TCID50方法测定病毒滴度。qPCR及病毒滴度的测定结果显示,与转染空载体的对照组相比,RIG-I过表达的ST细胞中IFN-β的转录水平极显著升高(P<0.001),且细胞上清中的病毒滴度下降约75%;与转染NCsiRNA的对照组相比,敲低RIG-I的ST细胞中IFN-β的转录水平极显著下降(P<0.001),且细胞上清中的病毒滴度升高约4.8倍。表明,TGEV感染细胞中的RIG-I能够促进细胞中IFN-β的转录,提高宿主细胞的抗病毒免疫反应,从而抑制病毒的复制。本研究结果证实RIG-I在介导TGEV诱导宿主细胞产生IFN的过程中发挥重要作用,该结果为深入探究TGEV的致病机制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 维甲酸诱导基因I(rig-I) 多克隆抗体 猪传染性胃肠炎病毒 干扰素Β 致病机制
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ZNF205通过靶向RIG-I正调控RLR抗病毒信号通路
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作者 钟霓 王晨 +1 位作者 翁光秀 许亮国 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期708-713,共6页
目的探究ZNF205(zinc finger protein 205)对RIG-I(retinoic acid-inducible gene I)介导的RLR(RIG-I like receptors,RLRs)抗病毒信号通路的影响。方法采用免疫共沉淀、免疫印迹、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、双荧光素酶报告基因实验、... 目的探究ZNF205(zinc finger protein 205)对RIG-I(retinoic acid-inducible gene I)介导的RLR(RIG-I like receptors,RLRs)抗病毒信号通路的影响。方法采用免疫共沉淀、免疫印迹、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、双荧光素酶报告基因实验、实时荧光定量PCR、病毒空斑等实验探索ZNF205在RLRs信号通路中的作用。结果ZNF205与RIG-I相互作用。过表达ZNF205促进了SeV诱导的IRF3(interferon regulatory factor 3)的二聚化,也增强了RIG-I-N(aa1-284)介导或SeV诱导的IFN-β(interferon beta)启动子的活性,同时还增强了SeV诱导的IFN-β的转录。病毒空斑实验结果显示过表达ZNF205能够抑制病毒的复制。研究结果还表明,ZNF205促进RIG-I的泛素化修饰以及RIG-I的K63泛素化修饰。结论ZNF205在RLR抗病毒先天免疫信号通路中起正调控作用。 展开更多
关键词 ZNF205 rig-I 泛素化 RLR信号抗病毒信号通路
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RIG-Ⅰ、USP5在卵巢上皮性癌组织中的表达水平及预后意义
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作者 齐曼 芦秋彤 +3 位作者 刘少卿 张娟 崔艳萍 刘咏梅 《中南医学科学杂志》 CAS 2023年第2期277-280,共4页
目的 探讨维甲酸诱导基因-Ⅰ(RIG-Ⅰ)、泛素特异性肽酶5(USP5)在卵巢上皮性癌组织中的表达水平及预后意义。方法 选取98例卵巢上皮性癌组织样本为病例组,同期98例正常卵巢组织为对照组。免疫组化法测定两组RIG-Ⅰ、USP5表达水平。单因... 目的 探讨维甲酸诱导基因-Ⅰ(RIG-Ⅰ)、泛素特异性肽酶5(USP5)在卵巢上皮性癌组织中的表达水平及预后意义。方法 选取98例卵巢上皮性癌组织样本为病例组,同期98例正常卵巢组织为对照组。免疫组化法测定两组RIG-Ⅰ、USP5表达水平。单因素及多因素Cox回归分析RIG-Ⅰ、USP5表达水平与卵巢上皮性癌患者临床预后的关系。结果 病例组RIG-Ⅰ、USP5表达阳性率均高于对照组(P<0.05)。卵巢上皮性癌患者RIG-Ⅰ、USP5表达与肿瘤最大径、TNM分期、肿瘤浸润、分化程度、淋巴结转移、复发率相关(P<0.05)。RIG-Ⅰ、USP5阳性的卵巢上皮性癌患者5年生存率均分别低于RIG-Ⅰ、USP5阴性的卵巢上皮性癌患者(P<0.05)。单因素分析显示:肿瘤最大径≥2 cm、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、浸润深度≥1 cm、分化程度高、淋巴结转移、复发、RIG-Ⅰ阳性、USP5阳性的卵巢上皮性癌患者5年生存率分别低于肿瘤最大径<2 cm、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、浸润深度<1 cm/无浸润、分化程度低、无淋巴结转移、无复发、RIG-Ⅰ阴性、USP5阴性的卵巢上皮性癌患者(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示:TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、分化程度高、RIG-Ⅰ和USP5表达阳性均是影响卵巢上皮性癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 RIG-Ⅰ、USP5与卵巢上皮性癌患者临床病理特征相关;RIG-Ⅰ、USP5阳性表达是卵巢上皮性癌预后危险因素。 展开更多
关键词 维甲酸诱导基因Ⅰ 泛素特异性肽酶5 卵巢上皮性癌
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Development of a Test Rig for Axial Strains Measurement in Automobile Wheel
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作者 Samuel Onoriode Igbudu David Abimbola Fadare 《Open Journal of Applied Sciences》 2023年第10期1764-1777,共14页
In automobile wheel application, a test rig is vital and used to simulate conditions of the wheel in service in order to affirm the safety and reliability of the wheel. The present work designed a test rig for measuri... In automobile wheel application, a test rig is vital and used to simulate conditions of the wheel in service in order to affirm the safety and reliability of the wheel. The present work designed a test rig for measuring axial strains in automobile wheel. The wheel used was a five-arm wheel (6JX14H2;ET 42) and Tyre (175 × 65 R 14). Experimental (EXP) test was carried out, with a radial load of 4750 N and inflation pressure of 0.3 MPa, to measure the axil strains which were converted to maximum principal strain values and, compared with data from Finite Element Analysis (FEA) using Creo-Element/Pro 5.0 at wheel’s contact angles of 90 degree (FEA 90 deg), 40 degree (FEA 40 deg) and 30.25 degree (FEA 30.25 deg), respectively. Results show that at the wheel’s point of contact with the ground, maximum principal strain values were highest at the inboard bead seat with a value of about 5.69 × 10<sup>-4</sup> mm/mm, followed by the values at the well of about 5.66 × 10<sup>-4</sup> mm/mm. The value at the outboard bead seat was least at about 2.22 × 10<sup>-4</sup> mm/mm, which was due to the presence of spikes at this location that tends to resist imposed radial loads. However, the highest mean maximum principal strain values at the locations of inboard, well and outboard, were about 2.11 × 10<sup>-4</sup> mm/mm, 3.78 × 10<sup>-4</sup> mm/mm and .99 × 10<sup>-4</sup> mm/mm, respectively. With the highest single value of about 5.69 × 10<sup>-4</sup> mm/mm, the inboard bead seat was the most strained location of the wheel. Overall results showed that all values of maximum principal strains were below the threshold value of about 1 × 10<sup>-2</sup> mm/mm. The values obtained for EXP and FEA could be said to be in close agreement when compared with the threshold value. With this in mind, the rig is recommended for use in related experimental procedures. 展开更多
关键词 Test rig STRAIN Contact Angle Radial Load Inflation Pressure
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Finite Element Analysis of Jumbo Rig Assembly for Tunneling
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作者 YAO Haiping 《International Journal of Plant Engineering and Management》 2023年第1期59-64,共6页
This paper describes the force acting the assembly of the jumbo rig for tunneling.The finite element analysis is used to calculate this machine structure on its different working states.
关键词 jumbo rig for tunneling fea STRESS DEFORMATION failure analysis
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基于改进RIG算法的动态诊断策略生成 被引量:5
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作者 李登 万福 +1 位作者 尹亚兰 周红波 《电子测量与仪器学报》 CSCD 2014年第2期159-163,共5页
针对TEAMS生成的静态诊断策略无法满足现场诊断的需求,在研究rollout信息启发式(RIG)算法的基础上,提出了一种基于改进RIG算法的动态诊断策略生成方法。首先通过改进原有的RIG算法使之符合动态诊断的需要;然后根据现场诊断过程中出现的... 针对TEAMS生成的静态诊断策略无法满足现场诊断的需求,在研究rollout信息启发式(RIG)算法的基础上,提出了一种基于改进RIG算法的动态诊断策略生成方法。首先通过改进原有的RIG算法使之符合动态诊断的需要;然后根据现场诊断过程中出现的各种具体情况,获取局部D矩阵;在此基础上利用改进的RIG算法选择出下一步最佳的测试,最终实现了故障诊断策略的动态生成。仿真实例表明,若直接采用基于RIG算法的静态诊断策略,需要4种类型的测试;若采用基于改进RIG算法的动态诊断策略生成方法,只需选择一步测试即能诊断出系统故障。该方法能够实现维修人员的交互式诊断,有效地提高了故障诊断策略的实用性。 展开更多
关键词 诊断策略 D矩阵 rig算法 故障诊断
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RIG-I样受体信号通路及其调控研究进展 被引量:19
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作者 丁云磊 孙英杰 +3 位作者 王晓旭 胡跃 费荣梅 丁铲 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第5期72-79,共8页
模式识别受体(pattern-recognition receptors,PRRs)中的RIG-I样受体(RIG-I like receptors,RLRs)是细胞质中一类RNA解旋酶,它们可以通过其RNA配体结合病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP),识别非自身的病毒... 模式识别受体(pattern-recognition receptors,PRRs)中的RIG-I样受体(RIG-I like receptors,RLRs)是细胞质中一类RNA解旋酶,它们可以通过其RNA配体结合病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP),识别非自身的病毒RNA。被感染的细胞中,这种相互作用可以通过触发RLRs以及下游信号分子的活化,最终导致I型干扰素的产生和炎性因子的产生,细胞做出抗病毒免疫应答。本文简单介绍了RLR信号通路的组成及其泛素化调控,总结了病毒逃避RLR通路信号转导的机制,最后阐述了NOD样受体(NOD-like receptors,NLRs)通路对RLR通路的影响。通过对RLR信号通路分子在抗病毒免疫调节中的作用了解,可以为控制病毒的感染和免疫调节提供一个新的思路。 展开更多
关键词 rig-I样受体 先天性免疫 细胞信号转导 病毒感染
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全反式维甲酸诱导Rig-g基因表达的调控机制研究 被引量:5
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作者 潘晓蓉 楼叶江 +3 位作者 张长林 许桂平 贾培敏 童建华 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期31-35,共5页
为了揭示全反式维甲酸(ATRA)诱导急性早幼粒白血病(APL)细胞株NB4细胞分化过程中rig-g基因表达的分子机制,进一步阐明ATRA在APL细胞分化中的信号转导网络,采用荧光素酶报告基因试验、蛋白质免疫共沉淀试验以及染色质免疫共沉淀试验等对... 为了揭示全反式维甲酸(ATRA)诱导急性早幼粒白血病(APL)细胞株NB4细胞分化过程中rig-g基因表达的分子机制,进一步阐明ATRA在APL细胞分化中的信号转导网络,采用荧光素酶报告基因试验、蛋白质免疫共沉淀试验以及染色质免疫共沉淀试验等对直接启动rig-g基因表达的转录因子及其作用机制进行研究。结果显示:在NB4细胞中,STAT2、IRF-9和IRF-1均能够被ATRA诱导表达,但表达时相有所不同。STAT2和IRF-9可以发生相互作用,形成复合物,并与rig-g基因启动子上的序列结合,激活rig-g基因的表达。IRF-1单独也能激活含rig-g基因启动子的报告基因,但是C/EBPα能强烈抑制IRF-1的这种转录激活作用。结论:在维甲酸诱导APL细胞分化过程中,ATRA首先诱导IRF-1的表达;随着C/EBPα的逐渐下调,IRF1-继而又进一步使细胞内的IRF-9和STAT2的蛋白水平上升。IRF-9和STAT2相互作用形成的复合物是直接诱导rig-g基因表达最基本的转录因子。本研究对于深入理解ATRA诱导APL细胞分化的信号转导网络具有一定的意义。 展开更多
关键词 全反式维甲酸 rig-g基因 IRF-1 IRF-9 STAT2
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鸭RIG-1基因的组织表达及体外抗禽流感病毒活性研究 被引量:5
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作者 张雅春 胡卫杰 +5 位作者 王建超 王伟 邓瑞坡 李越 赵颖慧 孟庆文 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期955-959,共5页
视黄酸诱导基因蛋白1(RIG-1)是一类模式识别受体,在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒(AIV)活性,本研究采用RT-PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3.1(+)中构建重... 视黄酸诱导基因蛋白1(RIG-1)是一类模式识别受体,在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒(AIV)活性,本研究采用RT-PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3.1(+)中构建重组真核表达质粒pcDNA-RIG-1,应用荧光定量PCR方法检测该基因在鸭不同组织中的特异性表达水平;并将pcDNA-RIG-1转染DF-1细胞,通过病毒TCID50测定、间接免疫荧光、荧光定量PCR的方法检测RIG-1的抗AIV活性。结果显示,从金定鸭脾脏中扩增的RIG-1基因的CDS序列大小为2 802 bp,编码934个氨基酸;RIG-1基因在不同组织中的表达各不相同,在鸭的脾脏和肾脏中表达量较高,肝脏中度表达,心脏、肺脏和肌肉低度表达;pcDNA-RIG-1转染DF-1细胞组与pcDNA3.1(+)转染组相比,病毒TCID50及相对表达量显著降低,IFN-β及Mx的相对表达量显著升高,表明RIG-1产生了显著的抗AIV作用。本研究为禽类RIG-1蛋白功能和家禽的天然免疫研究奠定了基础。 展开更多
关键词 rig-1 组织表达 抗病毒
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岗藿抗感汤治疗流感临床疗效观察及其对RIG-I、Th1/Th2影响 被引量:9
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作者 杨柳柳 刘小虹 +1 位作者 冯立志 张高 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2017年第10期83-86,共4页
目的:研究岗藿抗感汤对流感患者临床症状及调节免疫的影响。方法:本研究选择流感患者60例,随机分为岗藿抗感汤组30例、磷酸奥司他韦胶囊组(可威)30例。通过使用岗藿抗感汤治疗流行性感冒,并对患者进行感冒症状分级量化评分及测定患者外... 目的:研究岗藿抗感汤对流感患者临床症状及调节免疫的影响。方法:本研究选择流感患者60例,随机分为岗藿抗感汤组30例、磷酸奥司他韦胶囊组(可威)30例。通过使用岗藿抗感汤治疗流行性感冒,并对患者进行感冒症状分级量化评分及测定患者外周血RIG-I(IFN-α、IFN-β)、Th1/Th2(IFN-γ/IL-4)细胞比值表达,从而了解岗藿抗感汤在流行性感冒发生发展中如何参与调节免疫及对临床症状的影响,为指导临床治疗提供依据。结果:岗藿抗感汤组连续给药5 d,可缩短患者退热时间,改善其感冒症状,升高RIG-I(IFN-α、IFN-β)(P<0.05),也对增高的IFN-γ及IFN-γ/IL-4比值有降低作用(P<0.05)。结论:岗藿抗感汤具有抑制流感病毒Th1细胞亚群优势反应的作用,同时可激活RIG-I诱导I型干扰素的产生,抑制流感病毒的复制。 展开更多
关键词 岗藿抗感汤 流感 rig-I TH1/TH2
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模式识别受体TLR3、RIG-I和MDA5在慢性乙肝患者外周血的表达水平 被引量:7
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作者 牟娜 樊秀红 +2 位作者 郭连峰 李宁 曾瑞红 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期715-719,共5页
目的:观察慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血中单个核细胞胞膜和胞质模式识别受体mRNA的表达表达水平。方法:54例慢性乙型肝炎患者为实验组,40例健康体检者为对照组。采集实验组和对照组的新鲜空腹抗凝血,分离单个核细胞,提取单个核细胞中RNA... 目的:观察慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血中单个核细胞胞膜和胞质模式识别受体mRNA的表达表达水平。方法:54例慢性乙型肝炎患者为实验组,40例健康体检者为对照组。采集实验组和对照组的新鲜空腹抗凝血,分离单个核细胞,提取单个核细胞中RNA,并反转录为c DNA,应用实时定量PCR技术检测Toll样受体3(TLR3)、维甲酸诱导基因-I(RIG-I)、黑色素瘤分化相关分子5(MDA5)、I型干扰素(IFN-α、IFN-β)、转录因子3(IRF-3)mRNA表达水平。结果:与正常对照组比较,实验组的TLR3、RIG-I、MDA5、IFN-α、IFN-β、IRF-3 mRNA表达水平均明显降低,具有显著性差异(P<0.05)。高病毒载量组中的各分子表达水平与低病毒载量组和健康对照组比较降低更明显,且TLR3、RIG-I、MDA5、IFN-α、IFN-β、IRF-3mRNA水平分别与HBV-DNA的含量呈负相关(r=-0.697、-0.738、-0.867、-0.618、-0.415、-0.573)。结论:细胞胞膜(TLR3)和胞质(RIG-1、MDA5)模式识别受体、IFN-α、IFN-β、IRF-3 mRNA水平在慢性乙型肝炎患者的外周血单个核细胞中的表达降低,可能与HBV感染的慢性化状态有关。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎 TLR3 rig-1 MDA5 IFN-Α IFN-Β IRF-3
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RIG-I样受体与RNA病毒识别 被引量:13
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作者 秦成峰 秦鄂德 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1418-1423,共6页
RIG-I样受体(RIG-I likereceptors,RLR)是一类新发现的模式识别受体,能够识别细胞质中的病毒RNA,通过RLR级联信号诱导干扰素和促炎症细胞因子的产生,对抗病毒天然免疫的建立起着非常重要的作用。RLR信号通路既受宿主的严格调控,也能够... RIG-I样受体(RIG-I likereceptors,RLR)是一类新发现的模式识别受体,能够识别细胞质中的病毒RNA,通过RLR级联信号诱导干扰素和促炎症细胞因子的产生,对抗病毒天然免疫的建立起着非常重要的作用。RLR信号通路既受宿主的严格调控,也能够作为病毒逃避宿主干扰素反应的靶点。本文重点讨论了RLR及其在RNA病毒识别和抗病毒天然免疫中的作用。 展开更多
关键词 天然免疫 RNA病毒 干扰素 rig-I MDA5 RLR
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鸭RIG-1启动子克隆、序列分析及在鸭胚胎期发育性表达 被引量:2
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作者 罗俊 刘贺贺 +3 位作者 刘俊莹 张涛 王郁石 韩春春 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期104-112,共9页
RIG-1属于细胞内蛋白,与细胞增殖、分化和天然抗免疫功能密切相关。为研究RIG-1在鸭胚胎期免疫器官发育中的作用,本研究克隆得到鸭RIG-1启动子并做生物信息学分析,应用实时荧光定量PCR技术检测RIG-1基因以及预测得到的多个转录因子在鸭... RIG-1属于细胞内蛋白,与细胞增殖、分化和天然抗免疫功能密切相关。为研究RIG-1在鸭胚胎期免疫器官发育中的作用,本研究克隆得到鸭RIG-1启动子并做生物信息学分析,应用实时荧光定量PCR技术检测RIG-1基因以及预测得到的多个转录因子在鸭胚胎免疫器官发育过程中的表达模式。结果表明,扩增得到鸭RIG-1基因启动子4 372bp。序列分析表明,该基因启动子存在典型的TATA-box、CAAT-box调控元件,有IRF-1、RXR、RAR、AP1、NF-κB、SP1、IL6及Pax-2等多个转录因子结合位点。此外,RIG-1启动子预测发现了一个CpG岛,GC含量65.8%。定量结果发现,RIG-1在鸭胚胎免疫器官中表达呈动态性,具有不同的表达模式;并在法氏囊中的表达量高于脾脏和胸腺。聚类热图显示,只有在法氏囊中RIG-1与IRF-1、RXR、AP1、NF-κB、IL6的mRNA表达量具有相似的表达模式,这可能是由于在鸭胚胎期法氏囊具有较为完整的结构与功能,暗示它们可能为RIG-1的转录因子;而在法氏囊、脾脏和胸腺中,RIG-1与IRF-1、NF-κB基因都有较为相似的表达模式,在3个组织当中均被聚类在一起,说明IRF-1和NF-κB可能参与调控RIG-1的表达。研究结果为探索鸭RIG-1基因转录调控、表达,与在细胞增殖、分化、天然抗病毒免疫方面的功能提供了依据和方向。 展开更多
关键词 rig-1 启动子 免疫
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猪RIG-I真核表达载体的构建及其抗口蹄疫病毒作用研究 被引量:2
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作者 王国庆 朱紫祥 +5 位作者 曹伟军 杨帆 毛箬青 李丹 刘磊 郑海学 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期600-607,共8页
为研究模式识别受体分子RIG-I是否具有抑制口蹄疫病毒(FMDV)复制的作用,本研究从猪的PK15细胞中提取RNA,通过分段扩增与融合PCR的方法,扩增猪的RIG-I的完整CDS序列,进一步构建猪RIG-I的真核表达质粒。通过Western blotting和间接免疫荧... 为研究模式识别受体分子RIG-I是否具有抑制口蹄疫病毒(FMDV)复制的作用,本研究从猪的PK15细胞中提取RNA,通过分段扩增与融合PCR的方法,扩增猪的RIG-I的完整CDS序列,进一步构建猪RIG-I的真核表达质粒。通过Western blotting和间接免疫荧光试验对构建的真核表达质粒进行表达验证,证明其成功表达,同时证明猪RIG-I蛋白定位于细胞的细胞质中。感染试验发现FMDV能够诱导细胞内RIG-I的转录上调,这表明两者间存在着重要联系。过表达试验证实RIG-I具有抑制FMDV复制的作用,而下调表达RIG-I可以促进FMDV的复制,这表明RIG-I在机体抗口蹄疫病毒感染过程中发挥着重要作用。本研究的开展,为进一步探索RIG-I抗口蹄疫病毒的分子机制提供了理论支持;为口蹄疫病毒感染过程中,天然免疫系统抗病毒机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 rig-I 天然免疫 抗病毒作用
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甘露消毒丹及其挥发油对流感病毒感染小鼠RIGⅠ/NF-κB信号通路的影响 被引量:5
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作者 刘光华 刘娟 +2 位作者 高畅 张聪聪 贾晓妍 《中国中西医结合儿科学》 2017年第6期461-466,共6页
目的观察甘露消毒丹及其挥发油对流感病毒感染小鼠血清中白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素α/β(IFN-α/β)含量及肺组织中非结构蛋白1(NS1)、维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)mRNA、核因子κB(NF-κB)蛋白的影响,以探讨甘... 目的观察甘露消毒丹及其挥发油对流感病毒感染小鼠血清中白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素α/β(IFN-α/β)含量及肺组织中非结构蛋白1(NS1)、维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)mRNA、核因子κB(NF-κB)蛋白的影响,以探讨甘露消毒丹及其挥发油抗病毒作用的分子机制。方法选择SPF级BALB/c小鼠36只,雌雄各半,随机分为6组,分别为正常组、模型组、灌胃组、滴鼻组、灌胃滴鼻合用组、奥司他韦组,每组6只。除正常组外,其余5组以流感病毒FM1-6-E2滴鼻造模。于造模后第7天,摘眼球放血处死小鼠,通过透射电子显微镜对肺组织进行检测以及图像分析,采用ELISA法测定血清中IL-4、TNF-α、IFN-α/β含量,qRT-PCR检测各组小鼠肺组织中NS1、RIG-ⅠmRNA的表达,Western blot方法测定各组小鼠肺组织NF-κB蛋白的表达。结果 (1)流感病毒感染后模型小鼠肺组织超微结构可见Ⅱ型细胞坏死、肺泡结构破坏,肺泡腔内纤毛增粗、脱落,形成肺部炎症;各治疗组均可改善肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的异常改变。(2)流感病毒感染小鼠后,血清中IL-4、TNF-α、IFN-α/β的含量及肺组织中的NS1、RIG-ⅠmRNA、NF-κB蛋白表达均高于正常组,模型组与正常组比较,差异显著;与模型组比较,灌胃组、滴鼻组、灌胃滴鼻合用组、奥司他韦组血清中IFN-α/β含量显著升高,IL-4、TNF-α含量及NS1 mRNA、RIG-ⅠmRNA、NF-κB蛋白表达明显下调(P<0.05),甘露消毒丹各治疗组不同剂型抗流感病毒作用差异有统计学意义(P<0.05),灌胃滴鼻合用组>灌胃组>滴鼻组。结论甘露消毒丹具有抗流感病毒感染的作用,通过抑制RIG-Ⅰ/NF-κB信号传导通路的活化,阻止炎症的病理反应,提高免疫因子含量,降低流感病毒引起的免疫炎性损伤。 展开更多
关键词 流感病毒感染 甘露消毒丹 挥发油 rig NFΚB 小鼠
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酵母双杂交研究与RIG-G相互作用的蛋白 被引量:2
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作者 朱海青 王海红 +3 位作者 陈赛娟 陈竺 王振义 童建华 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2001年第5期385-389,400,共6页
目的应用酵母双杂交技术研究能够与维甲酸诱导的G基因 (RIG -G)发生作用的蛋白 ,以了解其功能。 方法应用酵母双杂交技术 ,以RIG -G为诱饵 ,筛选人类骨髓cDNA文库 ,寻找能与之相互作用的蛋白。利用生物信息学 ,一对一酵母回复性杂交 ,... 目的应用酵母双杂交技术研究能够与维甲酸诱导的G基因 (RIG -G)发生作用的蛋白 ,以了解其功能。 方法应用酵母双杂交技术 ,以RIG -G为诱饵 ,筛选人类骨髓cDNA文库 ,寻找能与之相互作用的蛋白。利用生物信息学 ,一对一酵母回复性杂交 ,β -GAL实验等提供的信息 ,筛除假阳性克隆 ,确定阳性克隆。  结果经过酵母双杂交共获得 10 9个克隆 ,经过验证 ,有 2 4个阳性克隆 ,它们分别是细胞的信号传导蛋白、细胞骨架蛋白、激酶等。 结论为了研究诸如RIG -G新基因的功能 ,酵母双杂交技术是可靠的分子生物学技术。 展开更多
关键词 酵母双杂交 rig-G 基因功能 全反式维甲酸 急性白血病 治疗 诱导分化治疗
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柯萨奇病毒A组16型的3C蛋白抑制RIG-Ⅰ介导的IFN-β的诱导 被引量:1
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作者 杨彬 王凤龙 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期760-763,共4页
目的探讨柯萨奇病毒A组16型对RIG-Ⅰ介导的信号通路的影响。方法将带有IFN-β启动子的萤火虫荧光素酶报告质粒pIFN-β-luc及内对照报告载体pRL-CMV转染细胞,之后用CA16感染细胞,24 h后检测报告基因活性。将CA16感染细胞,在感染6 h、12 h... 目的探讨柯萨奇病毒A组16型对RIG-Ⅰ介导的信号通路的影响。方法将带有IFN-β启动子的萤火虫荧光素酶报告质粒pIFN-β-luc及内对照报告载体pRL-CMV转染细胞,之后用CA16感染细胞,24 h后检测报告基因活性。将CA16感染细胞,在感染6 h、12 h、24 h以及48 h后用Real-time PCR方法测定细胞中IFN-β的mRNA的表达水平。将pIFN-β-luc和pRL-CMV以及表达RIG-I的质粒和表达CA16的3C蛋白质粒共转染细胞,24 h后检测报告基因活性。将带有绿色荧光蛋白GFP的IRF3质粒和表达RIG-I基因N端质粒以及表达CA16的3C蛋白共转染细胞,24 h后用荧光显微镜观察。将表达RIG-I的质粒和表达CA16的3C蛋白质粒共转染细胞,24 h后用免疫共沉淀方法验证蛋白质间相互作用。结果 CA16感染细胞不能引起IFN-β表达的上调,CA16的3C蛋白抑制了RIG-I诱导的IFN-β的启动子活性以及IRF3的核迁移,CA16的3C蛋白与RIG-Ⅰ存在相互作用。结论 CA16的3C蛋白通过与RIG-Ⅰ相互作用从而抑制RIG-Ⅰ介导的IFN-β的诱导。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A组16型 3C蛋白 rig-Ⅰ IFN-Β IRF3
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Rig-I基因表达下降对成熟B细胞株的影响
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作者 柳子星 孙岳平 +1 位作者 马志敏 王铸钢 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期131-133,共3页
Rig-I是全反式维甲酸诱导NB4细胞分化过程的上调基因,可能与细胞分化有关。通过RNAi的方法,使一株B细胞株(1B4.B6.细胞株)的Rig-I下降,研究其下调后对该B细胞株的影响。结果表明Rig-I下调表达使1B4.B6.细胞株中的CD138单阳性细胞比例明... Rig-I是全反式维甲酸诱导NB4细胞分化过程的上调基因,可能与细胞分化有关。通过RNAi的方法,使一株B细胞株(1B4.B6.细胞株)的Rig-I下降,研究其下调后对该B细胞株的影响。结果表明Rig-I下调表达使1B4.B6.细胞株中的CD138单阳性细胞比例明显减少,B220单阳性和CD138+B220+双阳性细胞不同程度的升高,这可能与B细胞株分化成浆细胞有关,同时Rig-I下调使LPS刺激该细胞株产生IgG3的胚系转录本(germlinetranscript)的表达下调。提示Rig-I可能参与抗体类别转换。 展开更多
关键词 rig—I RNAI技术 Iγ3-Cγ3
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加味五痹汤(肺痹)干预流感病毒感染诱导RIG-I/IFN-I信号通路作用机制研究
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作者 刘光华 高畅 +2 位作者 刘娟 岳志军 吴振起 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2019年第1期52-55,I0003,共5页
目的:观察加味五痹汤(肺痹)对流感病毒(IV)感染的BALB/c小鼠肺组织病理炎症及诱导RIG-I/IFN-I信号通路的作用机制。方法:SPF级BALB/c小鼠24只,随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、加味五痹汤(肺痹)组(C组)、奥司他韦组(D组),除A组外,其... 目的:观察加味五痹汤(肺痹)对流感病毒(IV)感染的BALB/c小鼠肺组织病理炎症及诱导RIG-I/IFN-I信号通路的作用机制。方法:SPF级BALB/c小鼠24只,随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、加味五痹汤(肺痹)组(C组)、奥司他韦组(D组),除A组外,其余3组以IV FM1-6-E2滴鼻造模。于造模后第7天进行取材,镜下观察小鼠肺组织病理切片,采用qPCR法检测RIG-ImRNA的表达、ELISA法测定血清中IFN-α/β含量、Western-blot法检测NF-κB蛋白的表达。结果:IV感染后B组小鼠肺组织出现水肿、肺泡隔增厚与炎性细胞浸润,各治疗组肺部炎症有不同程度减轻。IV感染组小鼠肺组织内RIG-I的mRNA水平显著升高,与B组相比,C组RIG-I的mRNA表达量升高(P<0.05);感染组NF-κB蛋白表达增高,各治疗组可下调其表达;感染组血清中的IFN-α/β含量增高(P<0.05),治疗组能明显升高IFN-α/β含量(P<0.05),且C组与D组比较有差异性(P<0.05)。结论:加味五痹汤(肺痹)具有抗IV感染的作用,增加RIG-I和IFN-α/β含量及抑制NF-κB表达是其作用机制之一,且RIG-I/IFN-I可能是其信号通路的作用靶点。 展开更多
关键词 流感病毒 加味五痹汤(肺痹) rig/IFN-I
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欧洲鳗鲡RIG-I基因的克隆、序列特征分析与原核表达
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作者 李英英 陈曦 +3 位作者 杨金先 陈强 宋铁英 葛均青 《海洋渔业》 CSCD 北大核心 2022年第5期513-520,共8页
为研究欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)RIG-I基因的特性,通过设计引物,扩增其序列,克隆至pCE2-TA/Blunt-Zero载体,测序验证后对所获得欧洲鳗鲡RIG-I基因序列进行生物信息学分析及原核表达。结果表明,欧洲鳗鲡RIG-I基因ORF序列有2823 bp碱基... 为研究欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)RIG-I基因的特性,通过设计引物,扩增其序列,克隆至pCE2-TA/Blunt-Zero载体,测序验证后对所获得欧洲鳗鲡RIG-I基因序列进行生物信息学分析及原核表达。结果表明,欧洲鳗鲡RIG-I基因ORF序列有2823 bp碱基,编码940个氨基酸,与日本鳗鲡(A.japonica)的序列同源性为96.71%;RIG-I蛋白属酸性亲水性蛋白,不存在跨膜结构,无信号肽,较不稳定,主要分布于细胞质中,有6个保守功能区;SDS-PAGE和western blot结果显示,实现了RIG-I基因在大肠杆菌中的高效表达,为后期制备RIG-I多克隆抗体和进一步探索RIG-I介导的天然免疫在鳗鲡抵御鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus,AngHV)侵染过程中的作用机制提供了研究基础。 展开更多
关键词 欧洲鳗鲡 rig-I 克隆 序列特征分析 原核表达
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