小RNAs作用机制的研究进展

RNAi的发现引发了生物学的一次革命，也揭示了一种原来未被发现的，通过小RNAs（大小～20-30nt）家族在转录水平或转录后水平调解基因表达的方式。在真核生物中，这些小RNAs包括siRNAs、miRNAs、piRNAs、scnRNAs、21U。RNAs和其他一些小RNAs等。它们通过调节基因表达来控制细胞的代谢、生长和分化，维持基因组的完整性，协调生殖细胞的成熟和抑制病毒对细胞的侵袭以及转座成分的转座。文章综述了这些小RNAs在鉴定和生物合成方面的研究进展，并讨论了它们对基因表达的调节作用。

脑出血患者血浆miRNA-26a表达的初步研究

目的比较脑出血(ICH)患者与正常对照者循环miRNA的表达差异,寻找分别与高血压及非高血压ICH相关的标记性miRNA,指导临床诊断与病情评估。找到标记性miRNA的靶标基因/蛋白,明确靶蛋白相关通路,在表观遗传与蛋白水平揭示ICH的发病机制。在人群队列中前瞻性观察标记性miRNA与ICH发生与发展的关系。在已建立的慢病防治社区队列中观察标记性miRNA与初发ICH的关系,在新募集的ICH患者队列中观察标记性miRNA与ICH预后的关系;为ICH的预防和治疗提供新的靶点。方法ICH患者循环miRNA表达谱。(1)比较3例高血压ICH与3例对照、3例非高血压ICH与3例对照血浆miRNA表达谱的差异,经过初步筛选及Realtime PCR方法复筛,选择表达差异最大的6种miRNA(高血压与非高血压ICH各3种);(2)通过逐步扩大样本多次验证的方法,选择2种差异最大的miRNA(高血压与非高血压ICH各1种(以下2种miRNA命名为miR-Xs));(3)分别在社区来源的慢病防治队列及医院来源的ICH队列中前瞻性观察基线血浆miR-Xs水平与新发ICH及ICH预后的关系。蛋白质组差异表达寻找miR-X的靶标基因:(1)选择miR-Xs模拟物(pre-miR-Xs)和miRNA阻遏物(anti-miR-Xs)瞬时转染细胞;(2)蛋白质组分析结合生物信息学靶点预测,选择差异表达量最大的2~4蛋白列入后续研究;(3)将pre-miR-Xs和anti-mir-Xs转染细胞,参照蛋白质结构和功能预测软件分析数据并结合Western blot检测结果,最终选择2种列入后续研究,命名为蛋白Ys。miR-Xs及其靶标基因表达产物的功能与机制研究:(1)通过pre-miR-Xs和anti-miR-Xs瞬时转染后,观察miRNA对细胞功能的影响及作用机制;(2)通过构建蛋白Ys的病毒表达载体,观察miRNA靶标基因表达产物-蛋白Ys对细胞功能的影响及作用机制。结果 (1)通过病例对照研究,发现ICH患者循环miR-26a表达升高,提示miR-26a可能参与了ICH的病理生理过程;(2)确证PEX13是miR-26a的靶基因;(3)miR-26a/PEX13可能通过PDGF-DD通路调节血管平滑肌细胞表型转化、迁移及增殖影响ICH的病理生理过程。结论本文发现miR-26a调控平滑肌细胞表型转化、迁移与增殖。为ICH的病理生理机制研究提供了创新性的研究思路。

环状RNA及其在胃癌中作用的研究进展

环状RNA(circular RNA,circRNA)是具有闭环结构的RNA。circRNA由于具有分布广泛、序列保守、性能稳定和表达的时空特异性等特征,很有可能成为新型的诊治疾病、判断预后的生物标志物和靶点,并具有研发药物的潜在价值。胃癌居全球癌症发病率第5位。我国是胃癌的高发地区,每年胃癌新发病例占全球的近半数。在胃癌早期筛查方面,我们目前尚无简单、高效的手段。该综述就circRNA领域研究的新成果及其在胃肿瘤的作用进行探讨。

宫颈癌细胞株HeLa与正常宫颈细胞株Ect1/E6E7的微小RNA表达谱的差异

目的探讨宫颈癌细胞株HeLa与正常宫颈细胞株Ect1/E6E7中微小RNA(miRNA)分子表达谱的差异。方法选取HeLa细胞和Ect1/E6E7细胞各3个样本分别作为实验组和对照组,采用miRNA芯片筛选两者之间差异表达的miRNA,样品间表达变化标准以上/下调4倍作为阈值范围,并运用miRWalk软件预测差异表达miRNA可能调控的靶基因,并对这些靶基因进行信号通路的富集分析。结果在HeLa细胞中,上调超过4倍差异表达miRNA分子7个,下调超过4倍差异表达miRNA分子16个(P<0.01)。生物信息学分析发现hsa-miR-126-3p的靶基因在肿瘤通路、凋亡通路以及Wnt信号通路上出现聚集;而hsa-miR-25-5p的靶基因肿瘤通路和钙离子信号通路出现聚集;且hsa-miR-205-5p靶基因在TGF-β信号通路和EGFR信号通路出现聚集。结论宫颈癌细胞HeLa与正常宫颈细胞Ect1/E6E7之间存在差异表达miRNA分子,他们可能参与宫颈癌的发生发展机制。