C57小鼠胸腺和睾丸中mPer1基因启动子区CpGs甲基化分析

利用实时定量PCR方法检测胸腺和睾丸组织中mPer1基因表达时相特点,采用亚硫氢酸修饰法对两种组织两个时间点该基因2个启动子区域5个E-box CpGs甲基化情况进行研究.结果显示:C57 BL/6J小鼠胸腺和睾丸组织中mPer1基因表达没有显著波动性,mPer1基因启动子区CpGs呈低甲基化状态(<10%).两种组织中E3和E4甲基化频率存在显著差异(P<0.01).在睾丸中,不同时间点E3和E4甲基化频率有显著变化(P<0.01).说明在睾丸中,mPer1启动子E-box3的甲基化状态能够随时间波动.但在胸腺和睾丸中,甲基化并不是mPer1基因调节的主要方式.

PMA诱导小鼠Lewis肺癌细胞节律基因的表达

目的采用体外节律诱导剂以研究小鼠Lewis肺癌细胞近日节律基因的表达情况。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(PMA)刺激体外培养的小鼠Lewis肺癌细胞(LLC),RT-PCR检测不同时间点mPer1的mRNA表达水平。Real-time PCR和RT-PCR检测mClock的mRNA表达水平。结果发现LLC细胞的节律基因mClock、mPer1存在近日节律振荡。结论经PMA诱导后,LLC细胞的节律基因存在近日节律振荡,为体外研究授时因子对近日节律的导引机制提供证据。

干扰Gnb21l对节律基因mPer1表达的影响

目的研究干扰Gnb21l表达对节律基因mPer1表达的影响。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(Phorbol 12-Myristate 13-acetate,PMA)诱导NI H3T3细胞,使其节律基因稳定表达,然后用脂质体介导法将pGenesil-1/Gnb2l1质粒(实验组)及pGenesil-1/vector质粒(对照组)分别转染入NI H3T3细胞中,采用RT-PCR半定量技术检测不同时间点NTH3T3细胞中Gnb2l1及mPer1 mRNA的表达水平的变化情况。结果实验组比对照组的Gnb2l1以及mPer1 mRNA的表达量均明显降低(P<0.05),但经余弦分析比较两组的mPer1表达周期无明显改变。结论干扰Gnb2l1使节律基因mPer1表达量降低。