Robo2基因对黑色素形成影响的研究进展

黑色素是一类生物色素,具有抗氧化、调控体温和防辐射等重要作用,虽不是生物生长发育所必需物质,但它的存在可提高生物的生存竞争能力。动物黑色素是由黑素细胞内的细胞器黑素小体合成储存,动物黑素细胞主要是神经嵴细胞沿背侧路径迁移分化形成。环形交叉路口引导受体2(roundabout guidance receptor 2,Robo2)基因属于轴突导向分子家族Robo的一员,是指导背部轴突导向的主要受体。笔者通过介绍动物黑色素形成和合成途径,简述Robo2基因的来源及功能,分述Robo2基因在黑色素形成中对神经元生长锥方向移动、小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor, MITF)表达和轴突发育的作用,并对黑色素合成机制进行补充,为后期寻找影响黑色素合成的主效基因和揭示黑色素合成机制提供理论依据。但目前对于Robo2基因在黑色素形成中的具体作用机制和调控途径还存在许多未解之谜,需要进一步的研究来揭示。

TMC BC ROBO 6智能采血系统故障维修3例

简要介绍了TMC BC ROBO 6智能采血系统的工作原理,分析了该设备在日常使用中出现的3例故障的原因,并给出了故障排除方法,为临床工程师排除类似故障提供了参考。

Slit—Robo GTPase激活蛋白在坐骨神经切断后脊神经节的表达变化

目的：观察Slit—Robo GTP酶激活蛋白（srGAP）在成年哺乳类动物脊神经节（DRG）的表达及其变化，了解srGAP在神经再生中的作用。方法：应用RT-PCR、免疫印迹法、免疫组织化学方法，检测成年SD大鼠正常和坐骨神经切断后1、3、7d的DRGsrGAP1、2、3mRNA及其蛋白的表达。结果：srGAP1、3mRNA在正常DRG均有弱表达，而srGAP2不表达；坐骨神经切断后3、7d，srGAP1、3mRNA表达增强，以术后7d最高；免疫组织化学显示，srGAP1在神经元胞体、突起均有表达，在DRG内胶质细胞亦有表达，坐骨神经切断后3、7d表达增强。结论：本研究结果说明Slit-Robo信号通路存在于大鼠周围感觉神经元内，周围神经损伤可激活此信号通路。

马斯克的RoboTaxi和机器人

2024年10月,马斯克在发布会推出了全世界期待已久的RoboTaxi和擎天柱机器人。在市场上,特斯拉依然是条鲶鱼。2019年的特斯拉投资日上,马斯克当着所有人的面,承诺“马上”就会有一只特斯拉RoboTaxi(自动驾驶出租车)车队,2020年在道路上就能看到100万辆特斯拉,自己在路上跑了。但事实上,到2020年底,特斯拉的自动驾驶依然还在测试。

电针对周围神经损伤大鼠轴突靶向再生修复的Slit/Robo信号通路的影响

目的:探讨电针对周围神经损伤大鼠轴突靶向再生修复大鼠的Slit/Robo信号通路的影响。方法:清洁级健康雄性SD大鼠120只,Excel软件随机分成空白组、假手术组、模型组和电针组,每组30只,每组再分为7 d、15 d和23 d3个亚组,每亚组10只。后两组大鼠右坐骨神经横断后即刻端对端缝合造模。假手术组只切开相应皮肤再缝合。造模后第二天,电针组取'环跳''足三里'进行电针治疗,1次/d,每次15 min,7 d为1个疗程,连续治疗3个疗程,疗程间隔1d。空白组不予干预,模型组、假手术组予模拟电针组抓取。每疗程结束后,分别检测比较大鼠腓肠肌湿重恢复率(WWG);实时荧光定量核酸扩增检测系统(qPCR)观察比较坐骨神经Robo1mRNA的表达变化;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)观察比较坐骨神经和相应脊髓段(L4-L6) Slit2、Robo1蛋白的表达变化。结果:与空白组、假手术组比较,模型组、电针组WWG恢复率降低(P <0. 01);与模型组比较,电针组WWG恢复率逐渐升高(P <0. 05)。电针组与模型对照组比较,大鼠损伤的坐骨神经和相应脊髓段中Slit2蛋白表在第1疗程后(7 d)达到高峰后逐渐降低,3个疗程均高于模型组(P <0. 01),且两组均高于空白组和假手术组(P <0. 01);Robo1蛋白及其mRNA表达也有类似规律,但表达高峰在第2疗程后(15 d)。结论:电针治疗能增强损伤坐骨神经和相应脊髓段中Slit2蛋白、Robo1蛋白及其mRNA的表达,调控Slit/Robo信号通路可能是其促进周围神经损伤再生修复的机制之一。

Slit2/Robo1信号通路蛋白在早期糖尿病肾病肾小球中的表达及临床意义

目的探讨早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾小球中Slit2和Robo1的表达与肾小球内皮细胞增生的关系及临床意义。方法收集符合Tervaert’s糖尿病肾病病理分型Ⅰ~Ⅱa期,患者24 h尿蛋白>30 mg且<500 mg,肾小球滤过率(estimate glomerular filtration rate,e GFR)>90 m L/(min·1.73 m2)等纳入标准的19例2型糖尿病DN标本,以及15例正常肾组织手术标本,采用HE染色、PAS染色和电镜观察DN肾小球组织形态结构的变化,免疫组化检测Slit2、Robo1和血管内皮细胞标记物CD31在肾小球中的表达,分析DN肾小球中Slit2和Robo1与CD31表达的相关性,以及Slit2、Robo1和CD31的表达与24 h尿蛋白以及e GFR的相关性。结果早期DN存在肾小球肥大、系膜基质轻度增多、基底膜增厚、毛细血管扩张、血管内皮细胞增大和增多等典型早期DN病理特征。Slit2表达于肾小球血管内皮、肾小管上皮和系膜细胞区域;Robo1表达于肾小球血管内皮、肾小管上皮和足细胞区域。与正常肾组织相比,早期DN肾小球中CD31的表达水平显著增高。早期DN肾小球中Slit2和Robo1的表达较正常肾组织也显著性增高(P<0.01)。相关性分析显示,早期DN肾小球中Slit2和Robo1的表达与CD31表达呈显著正相关(r=0.73,P<0.01;r=0.72,P<0.01);早期DN肾小球中Slit2、Robo1和CD31表达与e GFR呈显著正相关(r=0.78,P<0.01;r=0.81,P<0.01;r=0.57,P<0.05);早期DN肾小球中Slit2、Robo1和CD31表达与24 h尿蛋白也呈显著正相关(r=0.46,P<0.05;r=0.49,P<0.05;r=0.47,P<0.05)。结论 Slit2/Robo1信号通路可能通过参与早期DN肾小球内皮细胞增生促进病理性血管生成,从而加速蛋白尿的进展。

ROBO4/ARF6信号通路在糖尿病肾病患者肾小球组织的表达及意义

目的探讨不同病理分期糖尿病肾病(DKD)患者肾小球中ROBO4/ARF6的表达情况及其与肾小球内皮细胞(MGECs)通透性的相关性。方法收集30例DKD患者肾穿刺活检标本,参考Tervaert病理分期将DKD肾组织分为早、中、晚期各10例,以10例正常肾组织标本作为对照。采用免疫组化法检测ROBO4/ARF6在MGECs中的表达,分析其与蛋白尿、血清肌酐、肾小球滤过率(e GFR)、糖化血红蛋白的相关性。结果正常MGECs中有丰富的ROBO4表达,而ARF6表达较少。DKD组ROBO4主要在MGECs中表达,而ARF6在MGECs和肾小管上皮细胞中均有表达。与正常对照组相比,DKD组ROBO4染色阳性强度明显降低(P<0.05),且随病理分期的增加阳性强度逐渐减弱;而ARF6阳性强度随DKD病理分期的增加逐渐增高(P<0.05)。ROBO4在MGECs中的阳性强度与24h蛋白尿呈负相关(r=–0.840,P<0.01),与血清肌酐呈负相关(r=–0.689,P<0.01),与糖化血红蛋白呈负相关(r=–0.660,P<0.01),与e GFR呈正相关(r=0.589,P<0.01);ARF6在MGECs中的染色强度与血清肌酐、e GFR无相关性(P>0.05),与24h蛋白尿呈正相关(r=0.603,P<0.01),与糖化血红蛋白呈正相关(r=0.582,P<0.01)。结论 DKD患者MGECs中存在ROBO4低表达和ARF6高表达,提示ROBO4/ARF6信号通路可能参与了DKD肾小球内皮、血管的病理损伤和尿蛋白的进展。

Slit-Robo信号对口腔癌Tb细胞增殖作用的影响

目的:探讨SlitRobo信号对人舌鳞状上皮癌细胞系Tb细胞生长与增殖的影响及其作用机制。方法:采用Westernblot免疫印迹法检测Tb细胞中Slit和Robo蛋白的表达;在Robo1受体胞外区的单克隆抗体R5作用下,以MTT比色法与平板克隆形成实验观察Tb细胞生长变化及用免疫组化检测增殖相关蛋白PCNA的表达。结果:Tb细胞表达Slit和Robo蛋白;在R5抗体的作用下,Tb细胞体外生长能力受到抑制,增殖能力明显减弱,PCNA蛋白表达水平下降。结论:SlitRobo信号能够调控Tb细胞的生长增殖能力,对肿瘤细胞内的PCNA有正调控作用,提示该信号可能参与了口腔肿瘤的发生、发展过程。

Slit2和Robo1蛋白表达与胃癌关系的临床研究

目的:研究胃癌组织中神经迁移因子Slit2与受体Robo1的表达,探讨两者与胃癌生物学行为和血管生成的关系。方法:免疫组织化学SP法检测54例胃癌组织及28例癌旁组织中Slit2蛋白和Robo1蛋白的表达水平,观察不同临床病理学行为下Slit2蛋白和Robo1蛋白的表达变化;检测CD34标记的微血管密度(microvessel density,MVD),研究在胃癌组织中MVD与Slit2蛋白和Robo1蛋白的关系。结果:Slit2蛋白和Robo1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率分别为63.0%和77.8%,在癌旁组织中的阳性表达率分别为3.6%和10.7%,两种组织中Slit2蛋白和Robo1蛋白的表达水平差异有统计学意义(χ2=26.586,P<0.01;χ2=33.491,P<0.01)。胃癌组织中MVD显著增高(t=19.562,P<0.01)。Slit2蛋白表达水平与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和远处转移相关;Robo1蛋白表达水平与肿瘤大小、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移相关。Slit2与Robo1阳性表达呈正相关(r=0.4202,P<0.01)。Slit2和Robo1表达阳性者MVD显著增高(t=2.256,P<0.05;t=2.631,P<0.05)。结论:Slit2及其受体Robo1在胃癌组织中表达增加,与肿瘤的侵袭和转移密切相关,其机制可能是Slit2/Robo1信号途径能促进肿瘤血管生成。

大鼠皮质星形胶质细胞氧糖剥夺后Slit2、Robo1的表达研究

目的探讨神经生长导向因子slit2及其受体robo1在氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)不同时间后大鼠皮质星形胶质细胞的表达变化及其意义。方法建立培养乳大鼠皮质星形胶质细胞OGD模型,并分为OGD 0h组(对照组)、2h组、4h组、6h组和12h组。相差显微镜观察各组的细胞形态,MTT法检测各组的细胞活力,RT-PCR法检测各组slit2mRNA和robo1 mRNA的相对表达情况。结果 (1)对照组、OGD 2h组、4h组、6h组和12h组的细胞活力(OD值)分别为0.756±0.013、0.681±0.016、0.563±0.033、0.404±0.024和0.222±0.026,细胞活力随着氧糖剥夺时间延长而下降,呈时间依赖性(P<0.01)。(2)氧糖剥夺后,统计结果显示不同组别星形胶质细胞slit2 mRNA和robo1 mRNA表达先逐渐升高,6h组达高峰(与对照组比,P<0.05),12h组明显下降(与6h组比,P<0.01)。结论 slit2/robo1信号通路可能参与缺血后抑制性微环境的形成,影响神经的再生修复过程。

大鼠坐骨神经切断后Robo2在脊髓及背根节的表达变化

目的:研究坐骨神经损伤后Roundabout 2(Robo2)在成年大鼠背根节和脊髓的表达变化。方法:健康成年雌性SD大鼠坐骨神经切断后分别存活3～28d,取其L_(4～6)背根节(DRG)和脊髓;利用RT-PCR和免疫组织化学技术检测Robo2在上述组织中的表达变化。图像分析技术对阳性细胞的灰度值进行测定。结果:正常DRG感觉神经元表达Robo2 mRNA和蛋白质,脊髓前角运动神经元不表达。坐骨神经切断后3 d DRG内Robo2表达增加,7～14 d达高峰,21～28 d恢复到正常水平。结论:坐骨神经切断可导致DRG内Robo2的表达上调,可能与早期的感觉轴突再生有关。

Slit2/Robo1蛋白在直肠癌中的表达及与微血管密度的关系

目的研究直肠癌中Slit2/Robo1蛋白的表达,探讨两者与直肠癌微血管密度(MVD)及生物学行为的关系。方法免疫组化SP法检测65例直肠癌组织及相应43例对照组织中Slit2/Robo1蛋白的表达水平及MVD计数,研究在直肠癌中Slit2/Ro-bo1蛋白的表达强度与MVD关系,观察不同临床病理学行为下Slit2/Robo1蛋白的表达变化。结果(1)直肠癌组织中Slit2/Robo1蛋白阳性表达率分别为64.6%和78.5%,对照组织中的阳性表达率分别为4.7%和7.0%,两种组织中表达差异有统计学意义(P<0.01),直肠癌组织中MVD显著增高(t=32.09,P<0.01);(2)Slit2与Robo1阳性表达呈正相关(r=0.551,P<0.01),两者表达阳性的癌组织MVD计数明显大于表达阴性的癌组织(t=5.674,P<0.01,t=6.103,P<0.01);(3)Slit2/Robo1蛋白表达水平与肿瘤大小、浸润深度、Dukes分期及淋巴结转移相关,统计学检验有显著性差异(P<0.05)。结论(1)Slit2/Robo1蛋白在直肠癌组织中表达较对照组明显增高,并与MVD密切相关,推测Slit2/Robo1蛋白在直肠癌血管生成中起着重要作用;(2)直肠癌组织中Slit2/Robo1蛋白及MVD与直肠癌的生长、侵袭及转移密切相关,临床通过检测Slit2/Robo1蛋白表达强度及MVD计数可作为直肠癌进展程度及预后情况的重要指标。

ROBO4在上皮性卵巢癌组织和血清中的表达及临床意义

目的探讨ROBO4在上皮性卵巢癌组织和血清中的表达及其在卵巢癌发生发展中的作用。方法采用免疫组织化学和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测110例卵巢癌,54例卵巢良性肿瘤,40例正常卵巢组织中ROBO4蛋白和ROBO4mRNA表达,比较其表达与卵巢癌临床病理特征的关系;并采用ELISA检测卵巢癌、卵巢良性肿瘤和正常人血清中ROBO4表达水平。结果卵巢癌组织中ROBO4蛋白和ROBO4mRNA表达显著低于正常对照组和卵巢良性肿瘤组(P<0.05);上皮性卵巢癌血清中ROBO4的表达明显低于卵巢良性肿瘤和正常人(P<0.05);卵巢癌组织中ROBO4表达降低与卵巢癌FIGO分期、淋巴结转移、大网膜转移和腹水相关(P<0.05);卵巢癌组织中ROBO4表达与年龄、组织学类型和病理分级无相关性。卵巢癌患者血清ROBO4、CA125的相关分析显示,两者之间无相关性。结论在卵巢癌发生过程中ROBO4表达降低起到重要作用,表达异常的ROBO4与卵巢癌的侵袭转移能力相关,并与卵巢癌的临床病理学特征有明显的相关性。

Slit-Robo信号在涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭中的表达和意义

目的:了解涎腺腺样囊性癌(SACC)中Slit蛋白和其受体Robo的表达并探讨其在肿瘤嗜神经侵袭中的意义。方法:对34例SACC进行组织分型、嗜神经性分组,同时应用免疫组化方法,对SACC中Slit/Robo的表达进行检测。结果:有嗜神经现象、临床复发的SACC病例中Slit/Robo的表达较无嗜神经现象、临床无复发的病例显著升高(P<0.05)。结论:Slit/Robo在不同分组SACC中均存在不同程度的阳性表达。Slit/Robo与SACC的嗜神经性、临床复发具有密切关系。

Slit-Robo信号对粘液表皮样癌细胞增殖作用的影响

目的探讨Slit-Robo信号对粘液表皮样癌细胞系Mc3细胞生长与增殖作用的影响及其作用机制。方法免疫组织化学方法及流式细胞术细胞内因子检测法检测Mc3细胞Slit2及Robo1蛋白的表达;在Robo1受体胞外区的单克隆抗体R5作用下,以细胞计数法与软琼脂克隆形成实验观察Mc3细胞生长变化及用流式细胞术细胞内因子检测法检测增殖相关蛋白PCNA的表达。结果 Mc3细胞表达Slit2及Robo1蛋白,并且在R5单克隆抗体作用下,Mc3细胞体外生长能力受到抑制,增殖能力明显减弱,PCNA蛋白表达水平下降。结论 Slit-Robo信号可能影响Mc3细胞的生长增殖能力,对肿瘤细胞内的PCNA有正调控作用,提示该信号可能参与粘液表皮样癌的发生及发展过程。

Robo4在实体肿瘤血管新生中的表达及其意义

目的了解引导神经发育的Robo4基因在实体肿瘤血管新生中的表达,证实Robo4是肿瘤血管新生特异性标志物(tumor endothelial marker,TEM)。方法采用RT-PCR技术检测多种不同细胞中Robo4 mRNA的表达情况;采用原位杂交和免疫组化染色检测多种肿瘤组织及其对应正常组织的相邻组织切片中Robo4和CD31在微血管的表达情况。结果RT-PCR显示在包括肿瘤细胞和正常细胞的9种受检细胞株中,Robo4 mRNA特异性表达于血管内皮细胞HUVEC和HMVEC中;Robo4在各种正常组织的微血管中表达极其微弱,而在肿瘤组织的微血管上显著表达;CD31在正常和肿瘤组织的微血管上均显著表达。结论Robo4仅特异性表达于肿瘤血管新生的部位,是肿瘤血管新生标志物。

Slit/Robo信号在肿瘤发生发展中的作用

Slit/Robo信号作为神经导向因子在神经系统发育中具有导向轴突生长和排斥神经细胞迁移的重要作用,该信号还有抑制白细胞的趋化功能和在发育期吸引血管发生的作用。目前Slit/Robo的研究主要集中在中枢神经系统发育上,在肿瘤中的作用尚无定论。本文从Slit/Robo信号在肿瘤中的表达情况、在肿瘤新生血管和细胞迁移中的作用及其可能介导的信号通路等方面做一综述,探讨Slit/Robo信号作为肿瘤治疗靶点的潜在意义,对其深入研究具有重要的理论和临床意义。

七氟醚预处理对缺氧诱导因子1α表达和Slit2/Robo1信号通路的影响

目的评价七氟醚预处理对原代大鼠皮质神经元氧糖剥夺-复糖复氧后缺氧诱导因子(HIF)1α表达和Slit2/Robo1信号通路的影响。方法出生24h内的SD大鼠体外提取原代皮质神经元,以1×106/ml的密度接种于6孔板(2ml/孔)培养皿,采用随机数字表法分为四组:对照组(C组)神经元正常培养;氧糖剥夺-复糖复氧组(O组)神经元行氧糖剥夺90min;七氟醚预处理组(S组)在行氧糖剥夺前预先给予2%七氟醚处理1h,余同O组;HIF-1α抑制组(H组)在七氟醚预处理前行2ME(5μM/L)处理72h,余同S组。复糖复氧24h后收集神经元,采用Hoechst/PI双染色法测定神经元凋亡率;采用RT-PCR法测定HIF-1α、Slit2和Robo1mRNA的表达量;采用Western blot法测定HIF-1α、Slit2和Robo1蛋白的表达量。结果与C组比较,O组神经元PI阳性率明显升高,HIF-1αmRNA和蛋白表达量明显上调,Slit2和Robo1mRNA和蛋白表达量明显上调(P<0.05);与O组比较,S组神经元PI阳性率明显下降,HIF-1αmRNA和蛋白表达量明显上调,Slit2和Robo1mRNA和蛋白表达量明显上调(P<0.05);与S组比较,H组神经元PI阳性率明显升高,HIF-1αmRNA和蛋白表达量明显下调,Slit2和Robo1 mRNA和蛋白表达量明显下调(P<0.05)。结论七氟醚预处理通过HIF-1α增加Slit2/Robol信号通路的表达,抑制原代大鼠皮质神经元在氧糖剥夺-复糖复氧后的凋亡。

去泛素化酶USP33通过下调SLIT2/ROBO1信号通路抑制肺腺癌的侵袭和转移

目的探讨去泛素化酶USP33参与调节SLIT2/ROBO1信号通路抑制肺腺癌的侵袭转移的机制。方法采用q PCR、免疫组化的方法检查USP33在肺腺癌中的表达,利用A549、SPC-A-1细胞,以沉默USP33后作为沉默组,空白组作为对照,72 h后用q PCR与Western blot检测USP33的沉默效果,利用划痕实验、细胞迁移和侵袭基质胶法检测USP33沉默后对细胞侵袭转移的影响,利用Western blot检测USP33的沉默后SLIT2和ROBO1表达,IL6刺激后USP33的表达。结果 q PCR、免疫组化显示与肺腺癌癌组织相比,癌旁组织USP33表达量明显增加(P<0.05);与空白组相比,qPCR、Western blot结果显示沉默组USP33的表达量明显下降(P<0.05);划痕实验,Transwell迁移实验,Boyden侵袭实验提示USP33沉默后细胞迁移、侵袭转移率明显增加(P<0.05);抑制USP33后,SLIT2和ROBO1表达均下调;IL6刺激使USP33的表达增加(P<0.05)。结论 USP33抑制A549、SPC-A-1细胞迁移、侵袭转移,其侵袭转移的机制可能与炎症因子IL6、SLIT2/ROBO1信号通路存在交叉作用。

Slit/Robo信号在血管新生及内皮细胞迁移中作用的研究进展

在研究轴突导向分子Slit及其受体Roundabout(Robo)轴突导向功能过程中,发现Slit/Robo信号同样参与血管新生及内皮细胞迁移的调控。但Slit/Robo信号究竟起抑制还是促进作用目前还存在争议,该文从抑制和促进两方面对Slit/Robo信号在血管新生及内皮细胞迁移中的作用进行综述,以期进一步探讨Slit/Robo信号在该领域的功能研究。