转rolA、B、C基因枳橙快繁技术

通过对转rol基因枳橙B、D、E系及对照的高接植株春梢茎段进行萌芽诱导、增殖及试管苗生根成苗的试验,摸索出适宜枳橙快繁各种培养基配方及培养条件。结果表明,以MS+6-BA1mg/L的培养基适合于芽萌发,以MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L的培养基适合于芽增殖,生根则以1/2MS+NAA0.5mg/L+0.2%活性炭的组合最佳,转基因各系生根率均在93.3%以上,显著高于对照生根率(66.7%)。快繁苗移栽成活率可达90%,目前生长良好。

发根农杆菌转化新疆紫草的PCR检测及序列分析

以发根农杆菌MSU440菌株转化的新疆紫草毛状根为材料,设计了rolC基因的特异性引物,应用PCR技术,扩增得到了600 bp左右的特异性核苷酸片段。进行双向测序分析,扩增的基因序列全长626 bp,含rolC基因的编码区540 bp,编码180个氨基酸组成的蛋白。正向测序rolC基因与GENEBENK已发表的序列相比较,核苷酸序列的同源性达到100%,氨基酸同源性高达100%;反向测序中,同源性达到97%。证实并确认了新疆紫草毛状根的真实性,为进一步利用新疆紫草毛状根生产次生代谢产物研究奠定了物质基础。